浓烟吸入诱发大鼠透明质酸升高的研究

目的　探讨大鼠烟雾吸入后透明质酸增多与大鼠肺吸入性损伤的关系。方法　４０ 只ＳＤ 大鼠随机分成５ 组：正常对照组和烟雾吸入后不同时间观察组。分别测定血清、支气管肺泡灌洗液和肺组织中的透明质酸含量,支气管肺泡灌洗液中的炎性细胞比例及蛋白含量。结果　烟雾吸入后,血清和肺组织中的透明质酸含量升高,１２ ｈ 达到高峰［ 血清：１２ ｈ 组（４７０．４±９７ ．５） μｇ／Ｌ,对照组（１８６．４ ±３１．５） μｇ／Ｌ;肺组织：１２ ｈ 组（６９７ ．５±１１５．１）μｇ／Ｌ,对照组（２０２ ．６ ±３９．４） μｇ／Ｌ］ 。而支气管肺泡灌洗液的各时间观察组升高不显著。支气管肺泡灌洗液蛋白含量６ ｈ 达高峰;细胞数在１２ ｈ 最多,主要是中性粒细胞。结论　烟雾吸入后支气管内炎性细胞以中性粒细胞为主。肺内透明质酸含量高于血液。透明质酸似可作为烟雾吸入性肺损伤的病理指征。     

重组狗凝血因子Ⅷ的慢病毒介导体外表达的研究

本研究的目的是制备携带狗凝血因子Ⅷ（cFⅧ）基因的慢病毒载体,探讨慢病毒载体能否介导cFⅧ在体外的有效表达。用构建携带cFⅧ基因的慢病毒载体pTK161（含PUB启动子）和pTK162（含2OH1启动子）,同时构建含绿色荧光蛋白（GFP）的慢病毒载体pTK161′（含PUB启动子）和pTK162′（含2OH1启动子）的方法,分别与包装质粒ΔNRF、包膜蛋白质粒VSV-G共转染293T包装细胞,将包装好的病毒颗粒再感染293T细胞,检测病毒滴度和培养细胞上清中cFⅧ活性。结果显示：经限制性酶切鉴定,成功构建了pTK161、pTK162、pTK161′和pTK162′正向连接载体;pTK161′和pTK162′的病毒滴度分别为1.54×10^6U/ml和2.83×106U/ml;pTK161、pTK162感染靶细胞后24小时细胞上清中即可检测到cFⅧ的表达,72小时表达量达高峰。pTK162载体cFⅧ表达活性接近正常狗血浆FⅧ活性,而且明显高于pTK161（p〈0.05）,6周后cFⅧ表达活性仍达最高值的1/4。结论：构建的自身失活慢病毒载体可携带较大片段的cFⅧ基因,并在体外可获得有效表达;本研究为慢病毒载体介导的血友病A的基因治疗研究提供实验依据。     

小鼠造血干细胞移植后移植物抗宿主病与内皮细胞损伤的关系

目的 探讨异基因造血干细胞移植后移植物抗宿主病(GVHD)与内皮细胞损伤的关系.方法 以C57BL/6小鼠为供者、Balb/c小鼠为受者,分4组进行异基因造血干细胞移植,每组受者15只:对照组(仅输入磷酸盐缓冲液)、单纯骨髓移植组(仅输入骨髓单个核细胞)、GVHD组(输入骨髓单个核细胞和脾细胞)、GVHD减轻组(在GVHD组基础上加用环孢素A).分别于移植后不同时间观察受者的表现,检测外周血中内皮细胞及组织病理学变化.结果 术后第5天,各组受者均无典型的GVHD表现及组织病理学改变;术后第9天,GVHD组受者出现明显的GVHD的表现及病理学改变,并于15 d内全部死亡.术后第5天,单纯移植组、GVHD组和GVHD减轻组受者的外周血中内皮细胞数分别为(11.51±7.40)、(7.34±1.26)和(7.36±0.16)个/μl,三组间差异均无统计学意义(P＞0.05);术后第9天,内皮细胞数分别为(10.49±5.61)、(153.64±35.35)及(47.82±4.69)个/μl,三组间差异均有统计学意义(P＜0.05).术后第5天,单纯移植组、GVHD组、GVHD减轻组受者GVHD靶器官组织病理学评分分别为3.33±0.58、4.33±1.53及4.0±1.73,三组间差异均无统计学意义(P＞0.05);术后第9天,评分分别为3.33±1.15、10.0及4.33±0.58,三组间差异均有统计学意义(P＜0.05);术后第14天,评分分别为2.33±1.25、10.33±2.58和3.33±1.15,三组间差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 GVHD的发生再次引起内皮的损伤,同时损伤的内皮加重了GVHD.

Abstract：

Objective To study the relationship between graft-versus-host disease (GVHD) and endothelium injury following hematopoietic stem cells transplantation in mice. Methods C57BL/6 mice as donors and Balb/c mice as recipients were randomly divided into 4 groups: control group, bone marrow transplantation group, GVHD group, GVHD mitigation group. The clinical manifestations,circulating endothelial cells and tissue pathological changes were observed at different time points after transplantation. Results No manifestations of GVHD were found in each group at the day 5, while those were found in GVHD group at the day 9 and all died within 15 days. The counts of endothelial cells in peripheral blood showed no significant difference at the day 5 between GVHD group (7. 34 ±1.26 cells/μl) and bone marrow transplantation group (11.51 ± 7. 40 cells/μl) or GVHD mitigation group (7. 36 ± 0. 16 cells/μl), while among three groups there was statistically significant difference at the day 9 (GVHD group: 153. 64 ± 35. 35 cells/μl vs bone marrow transplantation group: 10. 49 ±5. 61 cells/μl and GVHD mitigation group: 47. 82 ± 4. 69 cells/μl). The scores of pathological aGVHD had no significant difference at the day 5 between GVHD group (4. 33± 1. 53) and bone marrow transplantation group (3. 33 ± 0. 58) or GVHD mitigation group (4. 00 ± 1.73), while among three groups there was statistically significant difference at the day 9 (GVHD group: 10. 0 vs bone marrow transplantation group: 3. 33 ± 1.15 or GVHD mitigation group: 4. 33 ± 0. 58) and at the day 14 (GVHD group: 10. 33 ± 2. 58 vs bone marrow transplantation group: 2. 33 ± 1.25 or GVHD mitigation group 3. 33 ± 1.15). Conclusion Occurrence of GVHD causes endothelial damage again and injured endothelium worsens the GVHD.     

Fas/FasL诱导细胞凋亡在大鼠抗GBM肾炎中的作用

目的 探讨Fas/FasL诱导细胞凋亡在大鼠抗肾小球基底膜(CBM)肾炎中的作用.方法 复制大鼠抗GBM肾炎模型,在实验室的2、7、14、21和28 d,行以下处理:收集24 h尿、血清样本检测大鼠24 h尿蛋白、血肌酐及血尿素氮含量;取肾组织经光镜、电镜观察肾组织病理变化;采用KT-PCR法和Western blot法检测肾组织中Fas、FasL和Caspase-3的表达情况;采用分光光度法检测肾组织中Caspase-3活性;采用TUNEL法检测大鼠肾组织细胞凋亡情况.结果 与正常对照组大鼠相比,肾炎模型组大鼠24h尿蛋白、血肌酐及血尿素氮含量均明显升高(P<0.01);肾组织中Fas、FasLmRNA及其蛋白和Caspase-3mRNA及其蛋白活性均明显增加(P<0.01);肾组织中凋亡细胞数明显增多(P<0.01),且与Fas、FasL及Caspase-3表达呈正相关(P<0.01).结论 Fas/FasL诱导的细胞凋亡在大鼠抗GBM肾炎中发挥重要作用.     

小鼠异基因造血干细胞移植中清髓照射对供者来源内皮祖细胞归巢的影响

目的 研究异基因造血干细胞移植预处理因素--清髓照射对供者来源内皮祖细胞(EPCs)归巢的影响. 方法 密度梯度离心和差速贴壁法获取小鼠骨髓单个核细胞,EGM-2培养基培养,5～7 d检测CD133+CD31+CD45low表面标记及吸食Dil-Ac-LDL和结合FITC-UEA-1鉴定,并行羟基荧光素=醋酸盐琥珠酰亚胺酯(CFSE)标记.实验分组:正常组,正常+EPCs移植组,照射组,照射+EPCs移植组.流式细胞术(FCM)分析外周血、脾脏和骨髓中内皮细胞(ECs)、EPCs和CFSE阳性细胞比例;病理、电镜和免疫荧光分析各组织的损伤情况及CFSE标记EPCs的分布. 结果 流式细胞术鉴定内EPCs为CD45lowCD133+CD31+;Dil-ac-LDL+、FITC-UEA-1+.照射后短时间内循环中ECs即开始升高,第5 d达高峰,持续到第7 d,与正常组相比差异有统计学意义 (P<0.05);循环中EPCs照射后短时间内也增加,于第4 d达到峰值,随后下降至正常水平,其增加与正常组相比差异有统计学意义 (P<0.05).照射后3 d光镜下肝脏弥漫性的炎症浸润,小肠大量炎症细胞浸润;电镜下肝脏中血小板聚集到内皮下暴露的胶原上,小肠中ECs和基底膜间被损坏.照射+EPCs移植组,荧光显微镜下观察,移植后3 h见CFSE阳性细胞归巢至损伤的肝脏和小肠,细胞少且不连续; 36 h细胞较多,且呈连续性.结论 移植预处理中的清髓照射可引起严重的内皮损伤, 该损伤启动了EPCs的动员,并驱动外源性EPCs归巢至损伤比较重的组织中.     

被动型Heymann肾炎脂质过氧化损伤及谷胱甘肽的防治作用

作为人类膜性肾炎的动物模型之一———被动型Ｈｅｙｍａｎ肾炎（ｐａｓｉｖｅＨｅｙｍａｎｎｎｅｐｈｒｉｔｉｓ，ＰＨＮ），其病理过程中动态测定脂质过氧化物少见报告。本实验在复制大鼠ＰＨＮ模型后检测了大鼠血清及肾皮质匀浆中的超氧化物歧化酶（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄ...     

猪到人异种移植超急性排斥反应的靶抗原

目的　探索猪到人异种移植超急性排斥反应的靶抗原。方法　对近年来国内、外有关文献进行检索 ,并作综述。结果　α半乳糖基 (α Gal)是目前公认的猪到人异种移植超急性排斥反应的主要抗原 ,其表达受α 1,3半乳糖转移酶 (α 1,3GT)控制。克服α Gal引起的超急性排斥反应的方法有免疫吸附天然抗体、酶消化α Gal、α GT基因敲除及转基因技术等。除α Gal外 ,还存在与人血清中天然抗体相结合的其它抗原 ,如红细胞表面相对分子质量为 40× 10 3 的分子 ,猪胚胎脑细胞上相对分子质量为 2 10× 10 3 、10 5× 10 3 及 5 0× 10 3 的抗原分子等。结论　α Gal是异种移植超急性排斥反应的主要靶抗原 ,除α Gal外还存在有待进一步研究的非α Gal。     

大剂量地塞米松导致胸腺细胞损伤的作用研究

本研究观察大剂量地塞米松对胸腺上皮细胞（thymic epithelial cells,TEC）的结构和功能的影响.将6-8周龄的C57BL/6雄性小鼠随机分为地塞米松（20 mg/kg）处理组以及正常对照组.给药后第5d,取小鼠新鲜胸腺标本,应用常规病理学和免疫荧光技术观察TEC的形态学变化,并用流式细胞术分析胸腺内细胞总数、TEC和各胸腺细胞亚群数量的变化,同时应用实时定量PCR分析与TEC功能相关的基因的表达情况.结果表明,与正常对照组相比,大剂量地塞米松处理组TEC结构被破坏、胸腺内总细胞数减少（P＜0.05）;胸腺细胞各亚群构成发生变化,其中双阳性（double positive,DP）胸腺细胞数急剧降低（P＜0.05）;与胸腺修复功能相关的因子Foxn1和IL-22的表达量较正常对照小鼠明显增加（P＜0.05）.结论：大剂量地塞米松的使用可导致TEC的结构和功能破坏,并诱导与TEC修复相关的基因的表达水平上调.     

白血病干细胞的新型标志蛋白IL1RAP杂交瘤细胞的制备及其分泌单克隆抗体的检测

本研究旨在制备针对白血病干细胞表面标志蛋白IL1RAP（IL-1receptoraccessoryprotein）的特异性单克隆抗体并对其进行鉴定。用重组人IL1RAP作为抗原免疫BALB／c小鼠,通过常规杂交瘤技术将免疫后的小鼠脾细胞与SP2／0细胞经PEG融合,筛选阳性杂交瘤细胞株。分别应用EusA和Westernblot法对杂交瘤细胞上清中分泌抗体进行抗体类型、滴度和敏感性检测。分离人外周单个核细胞,检测所得抗体对细胞内源性抗原的特异性。结果表明,获得了8株可稳定分泌IL1RAP单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别为3H6E10、486A6、8G1185、9E9F2、10D8A7、1C7H7、1D7G11和2D3D3;抗体类型鉴定为IgG1／K型;分泌的单克隆抗体能特异性识别单个核细胞表达的IL1RAP。结论：本实验成功制备了可稳定分泌IL1RAP单克隆抗体的杂交瘤细胞及其特异性的IL1RAP单克隆抗体,为将来有效清除体内白血病干细胞提供了新途径。