核因子κB与胶质细胞在阿尔茨海默病中的研究进展

近年研究发现核因子κB(nuclear factor，NF-κB)作为能调节多种基因表达的核转录因子，在神经退行性疾病中有重要作用，且NF—κB在胶质细胞中的激活及其产生的级联反应，对于阿尔茨海默病(AD)发生发展有重要影响，越来越受到人们的重视。本文就核因子κB在神经胶质细胞的作用机制及其对AD发病的影响作简要综述。     

APP/PS1双转基因老年性痴呆小鼠早期病理和认知行为变化

【目的】探讨APP/PS1双转基因老年性痴呆(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠早期病理和行为学变化。【方法】选取5、7月龄的APP/PS1双转基因小鼠和非转基因小鼠,采用刚果红染色法和定量方法,并结合Morris水迷宫行为学测试,对其脑内淀粉样斑块积聚与学习记忆能力的月龄变化关系进行研究。【结果】(1)7月龄的双转基因组小鼠的空间辨别学习记忆能力与非转基因组小鼠比较差异有统计学意义(P<0.05);(2)APP/PS1双转基因组小鼠在5、7月龄时海马与脑皮质均观察到明显的橘红色斑块沉积,但非转基因组小鼠海马及脑皮质均未观察到淀粉样斑块沉积。【结论】7月龄APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆能力下降,APP/PS1双转基因小鼠大脑皮层和海马部位淀粉样斑块的早期出现随年龄依赖性增加。     

液相蛋白芯片技术及其在中医药研究中的应用

以荧光微球为载体基质且有别于固相蛋白芯片的液相蛋白芯片技术,是美国纳斯达克上市公司Luminex于本世纪初研制出的后基因组时代的技术平台,通常用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、受体和配体识别分析及蛋白质一蛋白质相互作用等研究,可广泛应用于生物医学包括中医药研究的各个领域。液相蛋白芯片具有灵活性好、灵敏度高、操作简单、通量大等特点,可进行细胞因子、激酶、肽类等的检测,并可用于中药复方和单体的药理学研究及有效方药和成分的筛选。     

蛇床子素对Aβ_(25-35)诱导的星形胶质细胞NF-κB活化机制的影响

【目的】探讨蛇床子素（Osthole,Ost）拮抗β淀粉样蛋白25—35（Ap25-35）毒性损伤、保护神经细胞的作用及其与核因子-κB（NF—κB）活化机制的关系。【方法】以原代培养的大鼠星形胶质细胞（astrocytes,AS）为靶标建立阿尔茨海默病（Alzheimer＇s disease,AD）细胞模型。采用CCK-8（cell counting kit-8）法检测细胞活力,进行AB25-35造模浓度、时间以及Ost预处理最适宜浓度的选择。经Aβ25-35和Ost干预后,采用激光共聚焦显微镜检测分析异硫氰酸荧光素／碘化丙啶（FITC／PI）双重标记的NF—κB与其抑制蛋白（IKBot）在细胞内的激活程度,结合形态学观察分析Ost对星形胶质细胞的保护作用。【结果】Ost可拮抗Aβ25-35的神经毒性作用,尤其以低浓度（0．01-1μmol／L）为佳,随着浓度的升高,对细胞的保护作用呈减弱趋势。40μmol／L的Aβ25-35作用于As24h可过度活化NF—κB的表达（P〈0．01）,激活IκBα发生磷酸化及降解（P〈0．01）。低浓度的Ost可显著抑制NF—κB的过度活化（P〈0．01）,上调细胞核内IκBα的表达（P〈0．01）。【结论】Ost抑制Aβ25-35的神经毒性作用,延缓AD发生发展的作用机理可能与NF—κB活化机制有关。     

石菖蒲活性成分及其不同比例配伍对痴呆小鼠学习记忆功能的影响

目的 观察石菖蒲两种活性成分单体β-细辛醚、丁香酚及其不同比例配伍对东莨菪碱致痴呆模型小鼠学习记忆功能的影响.方法 采用Morris水迷宫筛选出学习记忆成绩及体重相近的小鼠99只,随机区组分为9组,即正常对照组、模型组、安理申阳性药对照组、β-细辛醚组、丁香酚组、β-细辛醚与丁香酚的配伍比例为1∶1,3∶1,5∶1,7∶1的配伍组,每组11只.除正常对照组和模型组给予灌服相同体积生理盐水外,其余各组均给予灌服相应的治疗药液;行为学测试前除正常对照组外,其余各组均于每次测试前30 min予腹腔注射氢溴酸东莨菪碱(3 mg· kg-1)制备学习记忆障碍痴呆模型.灌胃第8天开始通过Morris水迷宫测试小鼠的学习记忆能力,以逃避潜伏期(s)和游泳路程(cm)作为观测指标.结果 与正常对照组(逃避潜伏期16.55±12.99,游泳路程250.6±199.0)相比,模型组的逃避潜伏期(38.73±35.45)和游泳路程(555.7±474.9)均明显延长(P＜0.01);与模型组相比,β细辛醚组(潜伏期18.63±9.18,路程290.5±145.8)、丁香酚组(潜伏期22.78±12.01,路程351.2±182.0)、3∶1配伍组(潜伏期19.25±14.43,路程312.2±246.7)及5∶1配伍组(潜伏期18.27±15.87,路程295.7±269.8)的逃避潜伏期和游泳路程均明显缩短(P＜0.01,P＜0.05).结论 石菖蒲中两种主要活性成分β-细辛醚与丁香酚的较优配伍比例可能在3∶1和5∶1之间.     

基于诊断相似度评价的强直性脊柱炎古代医案分析

[目的]通过对古医籍中强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)相关病案报告进行基于典型症状和病史的诊断相似度评价,以期在提高古代病案诊断正确性的基础上,对古代中医治疗AS的临证经验进行挖掘.[方法]以AS病名源流梳理得到的17个相关中医病症名为检索词,检索《中华医典》中的医案类文献,对医案诊断相似度进行评价,对经过诊断相似度评价的病因病机、方药等诊疗经验进行总结.[结果]按症状词共检索出8 053条古文献条文,医案类文献275例,具有AS的3大主症之一的医案共113例,符合纳入标准的古医案共26例.26例医案分析结果显示,AS的病机特点为本虚标实,以肾督亏虚,气血不足为本,风寒湿邪为标,治法以补虚祛邪、活血化瘀为主.[结论]古代AS的中医典籍普遍存在重理论探讨、轻诊疗证据的情况,且记录简单、不规范;基于诊断相似度评分与筛选的古医案评价方法值得进一步深入研究.     

以患者报告结局为疗效评价指标时需注意的问题

患者报告结局（patient-reported outcomes, PROs）为临床研究者提供了一个很好的从患者角度评价临床治疗效果的途径。笔者介绍了当以PROs为疗效评价指标时需着重注意的问题,包括PRO测量量表的选择、测量实施过程中质量控制、测量结果的解释以及PRO指标的适用范围。     

人参皂苷Rg1对Aβ_(25-35)诱导的神经细胞核因子-κB活化的影响

目的探讨人参皂苷Rg1拮抗β淀粉样蛋白(Aβ)、保护神经细胞的作用是否与核因子κB(NF-κB)活化机制变化有关。方法分别以原代培养的大鼠海马神经元和星形胶质细胞为靶标建立Alzheimer病(AD)细胞模型。采用四唑盐显色(MTT)法检测细胞活力,进行Aβ25-35造模浓度、时间以及人参皂苷Rg1预处理最适宜浓度的选择。经Aβ25-35和Rg1干预后,用激光共聚焦显微镜检测分析FITC/PI双重标记的NF-κB在细胞内的激活程度,结合形态学观察分析人参皂苷Rg1对以上两种细胞的保护作用。结果40μmol.L-1的Aβ25-35作用24h后可激活原代培养星形胶质细胞的NF-κB(P<0.01),下调原代培养神经元的NF-κB活性(P<0.01)。2μmol.L-1的人参皂苷Rg1能明显提高神经元的NF-κB活性(P<0.01),减弱星形胶质细胞的NF-κB活性(P<0.01)。同时结合形态学观察和细胞活力检测发现,人参皂苷Rg1对两种细胞都有保护作用。结论人参皂苷Rg1通过启动神经元中NF-κB活化、下调星形胶质细胞的NF-κB活性,从两方面发挥其保护神经细胞的作用,从而有可能达到减缓AD发病进程的效果。     

人参皂苷对Aβ25-35蛋白诱导的老年性痴呆体外模型NG108-15神经元细胞凋亡的抑制作用

【目的】探讨在以NG108-15细胞作为神经元代表、β-淀粉样蛋白25-35片段(Aβ25-35)诱导凋亡的阿尔茨海默病体外细胞模型中,人参皂苷Rg1保护神经元的作用及其机制。【方法】采用倒置显微镜观察细胞形态,结合流式细胞仪检测凋亡率,进行Aβ25-35造模浓度与时间的选择以及Rg1预处理最佳浓度时间的选择;在此基础上,采用荧光显微镜和数据处理系统(DMR)图像分析仪检测免疫细胞化学法标记的核因子-κB(NF-κB)的活性;采用免疫组化染色法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达;采用酶标光度计、半胱氨酸/天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)比色检测试剂盒检测caspase-3活性。【结果】20μmol/L Aβ25-35作用24 h可诱导NG108-15细胞凋亡,2μmol/L Rg1组的NF-κB活性与模型组比较显著性提高(P<0.01),Rg1预处理组Bcl-2表达呈阳性,且caspase-3活性较模型组显著性降低(P<0.01)。【结论】高浓度聚焦状的Aβ25-35可下调神经元内NF-κB的活性,诱导细胞凋亡,Rg1通过启动神经元中NF-κB的活化从而上调Bcl-2表达,抑制caspase-3活性而发挥保护神经元的作用。     

人参皂苷Rg1．对淀粉样β蛋白诱导大鼠海马神经元损伤的保护

目的：观察人参皂苷Rg1对淀粉样β蛋白25-35诱导的海马神经元细胞损伤是否具有保护作用，并分析其作用机制。 方法：实验于2004-03／2005-03在广州中医药大学临床药理研究所DME中心完成。①取新生24h清洁级SD大鼠，无菌环境下取出海马组织进行贴壁培养并以B27无血清培养基添加剂抑制非神经元细胞的生长。②海马神经元形态及细胞活力观察：细胞培养7d至分化成熟状态，然后被随机分为3组：人参皂苷Rg1预处理组（分为1，2,4，8，16μmol／L5个浓度组）。首先每加入各浓度的Rg1（中国药品生物制品检定所提供，批号：0703—200221）预作用24h后，再加入40μmoL／L淀粉样β蛋白25～35共孵育24h；模型组：每孔加入40μmol／L淀粉样β蛋白25-35作用24h；空白组：正常细胞培养用液；每组均为8孔。运用倒置显微镜进行海马神经元形态学观察，四甲基偶氮唑盐比色法法检澍细胞活力。即吸光度（A值），该值越高说明细胞活力越强。⑨检测核因子κB活性：调整细胞悬液密度为2&;#215;10^8L^-1，接种于6孔板（内置已用多聚赖氨酸包被的盖玻片），1mL／孔。随机分为5组（3孔／组）：正常组，模型组，2，4，8μmol／L人参皂甙Rg1预处理组。细胞培养7d后，2，4，8μmol／L人参皂甙Rg1预处理组加终浓度为2，4，8μmol／L的人参皂甙Rg1预作用24h后，与模型组一起加40μmol／L淀粉样β蛋白，作用24h。激光共聚焦显微镜检测核因子κB在细胞内的激活程度，以图像分析仪计算核区荧光与胞浆区荧光比值，比值越高说明核因子κB活性越高。④计量结果差异比较采用单因素方差分析。 结果：①神经元细胞形态：相差显微镜下可见人参皂甙Rg1预处理组细胞损伤相对较模型组轻，但较正常组严重。②海马神经元细胞活力：正常组和2，4μmol／L人参皂甙Rg1预处理组明显高于模型组（P〈0．05），以4μmol／L人参皂甙Rg1预处理组最高；1，8，16μmol／L人参皂甙Rg1预处理组虽然也高于模型组，但差异不明显（P〉0．05）。⑧神经元细胞核因子κB活性：正常组和2，4，8μmol／L人参皂甙Rg1预处理组明显高于模型组（P〈0．01），以4μmol/L人参皂甙Rg1预处理组最高；4,8μmol／L人参皂甙Rg1预处理组明显高于正常组（P〈0.01）。 结论：人参皂甙Rg1对淀粉样β蛋白25-35诱导的大鼠海马神经元损伤具有保护作用，尤以4μmol／L人参皂甙Rg1作用效果最明显。核因子κB信号通路可能是人参皂甙Rg1对抗淀粉样β蛋白25～35细胞毒性作用的重要途径之一。