脂毒性对大鼠胰岛细胞凋亡的作用

目的　探讨脂毒性引起胰岛细胞凋亡在 β细胞功能异常中的作用。 　方法　 8周龄雄性SD大鼠随机分为两组 ,分别予总热量相同的正常脂肪含量饲料 (脂肪占总热量的 13% )和高脂饲料 (脂肪占总热量的 5 9% )饲养。 2 8周后 ,透射电镜观察胰岛细胞超微结构 ;进行胰岛素免疫组化染色光镜下定位 β细胞 ,图像分析测定平均每个胰岛内胰岛素的表达量 ;TUNEL法观察胰岛细胞凋亡情况并计数每个胰岛中 β细胞凋亡率 ,以Ki6 7单克隆抗体染色观察胰岛细胞的增生情况。 　结果　高脂饲养组 (HF组 )胰岛细胞内可见明显脂质沉积 ,胰腺免疫组化染色图像分析显示平均每个胰岛内胰岛素染色阳性细胞面积和积分下光密度HF组均显著低于正常饲养组 (NC组 ) (HF :2 5 2 2 μm2vsNC :5 0 10 μm2 ,P =0 0 0 ;HF :12 10vsNC :2 4 4 7,P =0 0 0 )。HF组β细胞凋亡率明显高于NC组[(2 6± 8) %vs15± 5 ) % ,P <0 0 1]。两组增生的胰岛细胞数差异无显著意义 (0 5 0个 /胰岛vs 0 5 4个 /胰岛 ,P >0 0 5 )。　结论　高脂饲养对大鼠胰岛细胞的复制无明显改变 ,β细胞凋亡的增加可能是长期高脂饲养后大鼠胰岛功能改变的机制之一。     

西洋参茎叶总皂苷对载脂蛋白E基因敲除小鼠血脂及脂质代谢相关基因周脂素和CD36表达的影响

目的观察西洋参茎叶总皂苷对载脂蛋白E基因敲除小鼠斑块成分及脂质代谢相关基因周脂素和清道夫受体CD36表达的影响,探讨西洋参茎叶总皂苷稳定动脉粥样硬化斑块的作用及可能机制。方法33只6~8周龄小鼠载脂蛋白E基因敲除小鼠予高脂饮食喂养13周后,待其形成成熟的动脉粥样硬化斑块后,随机分为3组:模型组、西洋参茎叶总皂苷组、辛伐他汀组(阳性对照组),每组11只。继续高脂喂养,并按体重比折算给予小鼠临床推荐剂量的相应药物治疗13周,处死动物,检测血脂,取心脏和主动脉,每只小鼠均取主动脉根部的4个切面,分别行HE染色和Movat染色,观察并计算各组小鼠主动脉粥样斑块内脂质核心大小,脂质成分与胶原成分比值。实时荧光定量PCR法检测主动脉内周脂素和CD36 mRNA的表达。结果给药13周后,与模型组比较西洋参茎叶总皂苷组小鼠主动脉斑块内脂质核心面积以及脂质成分与胶原成分比值明显减小(P<0.01),血清高密度脂蛋白显著升高(P<0.01)。而主动脉内周脂素和CD36 mRNA的表达与模型组比较均显著降低(P<0.05)。结论在临床推荐剂量上,西洋参茎叶总皂苷可通过改善载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉斑块内部成分,尤其是减少斑块内脂质含量来起到稳定动脉硬化斑块的作用,其机制可能与抑制脂质代谢相关基因周脂素和清道夫受体CD36 mRNA的表达有关。     

健脑安对大鼠海马神经元糖皮质激素受体的影响

背景:先前实验中已经证实补肾活血化痰中药健脑安可抑制脑缺血再灌注后2～24h内糖皮质激素含量增高,降低高糖皮质激素的促神经细胞凋亡毒性作用。这一作用是否在受体环节也有影响尚不清楚。目的:观察中药健脑安对糖皮质激素受体的干预作用,进一步明确健脑安保护脑缺血再灌注后海马神经细胞的作用靶向;并与复方阿米三嗪进行阳性对照。设计:随机对照动物实验。单位:北京中医药大学中心实验室。材料:实验于2002-07/2003-03在北京中医药大学中心实验室进行。取SD雄性大鼠80只,随机分为假手术组、模型组、治疗组、阳性对照组和拮抗剂组5组,每组16只,每组又分为再灌注2,6,12和24h4个时点,每个时点4只。方法:①给药:除模型组外,其他4组大鼠于造模前7d开始灌胃给药,1次/d。假手术组给予7μL/(g·d)蒸馏水;阳性对照组予复方阿米三嗪7.39mg/(kg·d);治疗组予健脑安(肉苁蓉、石菖蒲、大黄等组成)生药6.7g/(kg·d);拮抗剂组给予糖皮质激素受体拮抗剂米非司酮10g/(kg·d),7μL/g。②给药7d后用大脑中动脉阻塞线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型,假手术组麻醉后,剥离颈总动脉后缝合,不予进栓线。主要观察指标:各组在再灌注相应时间点处死大鼠取脑,利用免疫组化方法观察大鼠糖皮质激素受体蛋白表达的变化,计算CA2区3个200倍视野内阳性细胞数。结果:80只大鼠全部进入结果分析。假手术组糖皮质激素受体表达损伤侧与健侧双侧对称,糖皮质激素受体表达无明显差别。模型组、治疗组、阳性对照组、拮抗剂组损伤侧较健侧糖皮质激素受体表达明显减少,亦明显少于假手术组(P<0.05)。治疗组、阳性对照组、拮抗剂组在再灌注各时间点的糖皮质激素受体表达量无明显变化,各组与模型组相比差异不显著(P>0.05)。结论:健脑安对糖皮质激素受体和糖皮质激素含量的调节有选择性,不能调节糖皮质激素受体的表达,与复方阿米三嗪相似;但健脑安可通过降低血浆和脑组织中糖皮质激素含量,发挥对脑缺血再灌注后的神经细胞的保护作用。     

人类表皮因子受体在人脑胶质瘤中的表达及其与增殖潜能的相关性研究

我们使用免疫组化方法检测了 38例胶质瘤中人类表皮因子受体 (ＥＧＦＲ)的表达水平 ,旨在探讨ＥＧＦＲ在人脑胶质瘤中的表达及其与增殖潜能之间的关系 ,现将结果报告如下。一、材料与方法38例胶质瘤标本均取自我院 1990～ 1997年手术标本存档蜡块 ,按ＷＨＯ分类标准进行组织学分型。Ⅰ～Ⅱ级 2 0例 ,其中星形细胞瘤 16例 ,少枝胶质细胞瘤 3例 ,室管膜细胞瘤 1例 ;Ⅲ级 11例 ,均为间变性星形细胞 ;Ⅳ级 7例 ,均为多形性胶质母细胞瘤。免疫组化染色使用ＳＰ法 ,并设阳性和阴性对照。ＥＧＦＲ阳性染色定位于细胞膜及胞浆 ,ＰＣＮＡ阳性染色定位…     

黄连提取物对ApoE基因敲除小鼠主动脉易损斑块Perilipin和PPAR-γ基因表达的影响

目的 观察黄连提取物对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化（AS）易损斑块内周脂素（perilipin）和过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ）基因表达的影响，探讨黄连提取物稳定AS斑块的作用及可能机制。方法 33只6～8周龄ApoE基因敲除小鼠予高脂饮食喂养13周，待其形成成熟的AS斑块后，随机分为3组：模型组、黄连提取物组、辛伐他汀组（阳性对照组），每组11只。继续高脂喂养，并按体重比折算给予小鼠临床推荐剂量的相应药物治疗13周，处死动物，每只小鼠分别取主动脉根部的4个切面，分别行HE染色和Movat染色，观察并计算各组小鼠主AS斑块内埋藏纤维帽的平均数目，实时荧光定量PCR法检测主动脉内perilipin和PPAR-γmRNA的表达。结果 给药13周后，黄连提取物组斑块内埋藏纤维帽的数目与模型组比较明显减少（P<0.05），并且斑块内perilipin mRNA的表达与模型组比较显著降低（P<0.05），而PPAR-γmRNA的表达较模型组显著增加（P<0.01）。结论 在临床推荐剂量上，黄连提取物可显著减少ApoE基因敲除小鼠主动脉粥样斑块破裂次数，有助于稳定易损斑块，其机制可能与促进小鼠AS斑块内PPAR-γmRNA表达，抑制perilipin mRNA表达有关。     

马来酸罗格列酮干预高脂饲养大鼠脂肪肝的研究

目的观察高脂饲养所致正常SD大鼠脂肪肝与胰岛素抵抗的关系及罗格列酮干预脂肪肝的效果。方法将8周龄雄性SD大鼠随机分为三组，每组各11只：正常饲养组（NC）、高脂饲养组（HF）、高脂＋罗格列酮组（HF4-Ros）。饲养8周后取空腹血测定血糖、脂联素，胰岛素敏感性用正常血糖高胰岛素钳夹术稳态时的葡萄糖输注率（GIR）来评价，测定肝脏中TG含量，并对大鼠肝脏组织做HE染色。结果高脂饲养8周后，与NC组相比，HF组肝脏呈现明显脂肪肝，肝脏中TG明显增加达154．2％（NC组3．89mg／g，HF组9．89mg／g，P〈0．01）；与HF组相比，HF4-Ros组肝脏中TG显著降低达46．6％（5．28mg／g，P〈0．01），脂肪肝减轻。结论马来酸罗格列酮能明显改善高脂饲养大鼠的脂肪肝。     

健脑安对大鼠海马神经元糖皮质激素受体的影响

背量：先前实验中已经证实补肾活血化痰中药健脑安可抑制脑缺血再灌注后2-24h内糖皮质激素含量增高，降低高糖皮质激素的促神经细胞凋亡毒性作用。这一作用是否在受体环节也有影响尚不清楚。 目的：观察中药健脑安对糖皮质激素受体的干预作用，进一步明确健脑安保护脑缺血再灌注后海马神经细胞的作用靶向；并与复方阿米三嗪进行阳性对照。 设计：随机对照动物实验。 单位：北京中医药大学中心实验室。 材料：实验于2002啊07／2003—03在北京中医药大学中心实验室进行。取SD雄性大鼠80只，随机分为假手术组、模型组、治疗组．阳性对照组和拮抗剂组5组．每组16只．每组又分为再灌注2，6．12和24h 4个时点，每个时点4只。 方法：①给药：除模型组外，其他4组大鼠于造模前7d开始灌胃给药。1次／d。假手术组给予7μL／（g&;#183;d）蒸馏水；阳性对照组予复方阿米三嗪7，39mg／（kg&;#183;d）；治疗组予健脑安（肉苁蓉、石菖蒲、大黄等组成）生药6．7g／（kg&;#183;d）：拮抗剂组给予糖皮质激素受体拮抗剂米非司酮10g／（kg&;#183;d），7μL／g。②给药7d后用大脑中动脉阻塞线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型，假手术组麻醉后，剥离颈总动脉后缝合，不予进栓线。 主要观察指标：各组在再灌注相应时间点处死大鼠取脑，利用免疫组化方法观察大鼠糖皮质激素受体噩白表达的变化，计算CA2区3个200倍视野内阳性细胞数。 结果：80只大鼠全部进入结果分析。假手术组糖皮质激素受体表达损伤侧与健侧双侧对称，糖皮质激素受体表达无明显差别。模型组、治疗组、阳性对照组、拮抗剂组损伤侧较健侧糖皮质激素受体表达明显减少，亦明显少于假手术组（P〈0.05）。治疗组、阳性对照组、拮抗剂组在再灌注各时间点的糖皮质激素受体表达量无明显变化，各组与模型组相比差异不显著（P〉0.05）。 结论：健脑安对糖皮质激索受体和糖皮质激素含量的涧节有选择性，不能调节糖皮质激素受体的表达．与复方阿米三嗪相似；但健脑安可通过降低血浆和脑组织中糖皮质激素含量，发挥对脑缺血再灌注后的神经细胞的保护作用。     

脂质沉积性肌病1例

患者女性，26岁。因“感冒后四肢酸痛无力一个月，呼吸困难半月”于2006年5月22日入院。入院前一个月感冒后出现下肢肌肉酸痛和压痛，南坐位或蹲位站立，上下楼梯、步行、双臂上举和梳头均有不同程度困难。肌肉疼痛及无力症状渐进性加重．半月前出现腰部酸痛，胸闷和呼吸困难。当地医院行腰穿脑脊液检查未见明显异常，肌电图示肌原性损害，     

动脉粥样硬化模型小鼠心脏中Movat染色技术的应用

目的:ApoE基因敲除小鼠为目前研究动脉粥样硬化的常用模型之一,其在高脂饲养下可加速形成主动脉粥样硬化斑块。动脉粥样硬化的病灶成分有平滑肌细胞、泡沫细胞、胆固醇结晶、胶原纤维、弹力纤维和蛋白聚糖。Movat染色技术可以在一张切片上直观显示出这几种成分的病理变化,规范和细化的实验操作步骤可以保证染色结果的一致性,为动脉粥样硬化的深入研究提供清晰可靠的实验依据,从而更客观的评估实验结果。方法:Apo E基因敲除小鼠,雄性70只随机分为8组:Apo E空白组,阳性对照药组,治疗药物A高、中、低剂量组,治疗药物B高、中、低剂量组,以及6只C57小鼠对照组。高脂饲养26周后,采血后处死。取心脏,石蜡包埋后进行定位切片。分批进行染色,染色过程中摸索和细化了染液配置、染色温度、染色时间等条件,规范实验操作。成片后进行组织病理学观察,并对胶原纤维、弹力纤维、蛋白聚糖、泡沫细胞等进行定性和定量分析。结果:通过试验建立了细化、规范化的Movat染色操作流程。光镜下观察染色结果可见各结构成分着色分明:胶原纤维和弹力纤维分别为黄色和黑色,蛋白聚糖呈绿色,泡沫细胞呈淡紫色,心肌平滑肌呈红色。主动脉粥样硬化斑块病灶部位结构清晰,病理表现为血管平滑肌增生,胶原纤维、平滑肌细胞和蛋白聚糖形成纤维帽,纤维帽下泡沫细胞形成并向下延伸,脂质大量沉积,弹力纤维断裂。与空白组和阳性对照组相比,治疗药物A和B均对病症的严重程度和病程进展有一定的治疗效果。结论:在本实验中对Movat染色的染液配置、染色时间、染色温度等进行细化和调整,为实验操作流程的规范化提供依据。在保证了实验统一性的基础上,可客观评估药物对动脉粥样硬化的治疗效果,同时因粥样斑块各结构成分颜色分明,利于镜下成像鉴别,可对各成分进行定量统计分析,为实验结果提供了可靠的实验数据。