设施设备心脏组织特异性表达Neuregulin-2转基因小鼠的建立及心脏功能分析

目的神经调节蛋白2(neuregulin-2,NRG2)可促进神经系统发育,基因缺失表现早期生长延迟,NRG2在心脏中也有表达,但其在心脏发育尤其是病理刺激时对心脏结构及功能的影响尚未见报道。本文目的是建立心脏组织特异性表达NRG2转基因小鼠,分析其在正常及压力负荷刺激时对心脏结构及功能的影响。方法将人NRG2基因插入到心脏特异性启动子α-MHC下游,构建转基因表达载体,显微注射法建立NRG2转基因小鼠,PCR鉴定转基因小鼠基因型,western blot鉴定NRG2蛋白在心脏中的表达并筛选高表达的转基因品系,主动脉缩窄术(transverse aortic constriction,TAC)制备压力负荷诱导的心肌肥厚小鼠模型。利用超声影像分析和病理学观察小鼠心脏结构和功能改变。结果建立了心脏组织特异性高表达NRG2转基因小鼠品系。与同窝阴性转基因小鼠相比,转基因小鼠左心室舒张末期后壁厚度(LVPWD)明显增加,3月龄时可达15.6%(P0.05),经压力负荷刺激后,NRG2转基因手术小鼠心室壁增厚程度显著下降,心室腔增大,同时心肌排列紊乱程度和纤维化程度明显比NTG手术小鼠严重。结论在压力负荷下,转基因表达NRG2缩短了肥厚过程,同时加速了心衰进程。     

芪苈强心胶囊对心肌梗死大鼠心肌纤维化及TGF-β1／Smad3信号通路的影响

目的探讨芪苈强心胶囊对心肌梗死后大鼠心肌纤维化的影响及其作用机制。方法 SD雄性大鼠结扎冠脉左前降支,建立急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction,AMI)模型,4周后根据心脏超声结果随机分为模型组和芪苈强心组,另设假手术组,分别给予1 g/(kg·d)芪苈强心及等体积蒸馏水灌胃。4周后超声心动图检测大鼠心脏功能,取梗死周围心肌组织采用HE及Masson染色观察心肌病理形态改变,免疫组织化学方法检测心肌α-SMA表达,Western blotting方法检测心肌α-SMA、胶原Ⅰ(collagenⅠ)、转化生长因子-β_1(TGF-β_1)及p-Smad3蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组左心室短轴缩短分数(FS)和射血分数(EF)明显降低(P0.05),左心室收缩末期内径(LVIDs)和收缩末期容量(ESV)显著升高(P0.05),心肌纤维化明显(P0.05),α-SMA、collagenⅠ、TGF-β_1和p-Smad3等表达增加(P0.05)。与模型组比较,芪苈强心组EF和FS明显升高(P0.05),LVIDs和ESV明显降低(P0.05),心肌纤维化程度减轻(P0.05),α-SMA、collagenⅠ、TGF-β_1和p-Smad3等表达明显降低(P0.05)。结论芪苈强心胶囊能够降低心肌梗死大鼠心肌纤维化程度,改善心脏功能,其作用机制可能与调控TGF-β_1/Smad3信号通路相关蛋白有关。     

转基因表达KLK1抵抗压力负荷引起的心室重构

目的 KLK1基因对高血压具有保护作用,KLK1在心脏中也有所表达,但目前对KLK1基因在心肌中的作用所知甚少。本研究通过建立KLK1基因转基因小鼠,在压力负荷的条件下,研究KLK1对心室重构的作用。方法把人KLK1基因插入鸡β-肌动蛋白启动子下游,构建转基因表达载体,显微注射法建立C57BL/6JKLK1转基因小鼠,PCR鉴定转基因小鼠基因型。采用Western Blot鉴定KLK1在心脏、大血管和肾脏中的表达筛选高表达转基因品系。用无创血压仪测量血压,利用超声影像分析技术和病理学观察转基因小鼠心脏结构与功能改变。结果建立了在心脏、肾脏和大血管壁高表达KLK1基因的转基因小鼠。在正常情况下,与同窝转基因阴性小鼠相比,转基因小鼠心脏结构和功能无显著变化。主动脉缩窄术后1个月,由于压力负荷的存在,同窝阴性小鼠左心室壁厚病理性肥厚,而转基因表达的KLK1可明显地抑制左心室壁肥厚的进程;主动脉缩窄术后2个月,同窝阴性小鼠心脏进入到病理性扩张阶段,KLK1也表现出对心肌病理性扩张的抑制,同时,组织学染色显示KLK1转基因小鼠心肌肥厚与纤维化程度减弱。结论转基因表达KLK1可抵抗压力负荷引起的心室重构。     

直肠神经内分泌肿瘤的临床病理特征及误诊原因分析

目的:探讨直肠神经内分泌肿瘤的临床和病理特征，减少误漏诊。方法:回顾性分析22例经病理证实的直肠神经内分泌肿瘤的临床资料和组织学表现及误漏诊情况。结果:22例直肠神经内分泌肿瘤中1例曾漏诊，15例曾误诊，其中误诊为混合痔8例，直肠息肉5例，肛瘘2例。结论:直肠神经内分泌肿瘤临床极易误诊，病理学表现具有诊断提示意义，临床和病理医师提高对直肠神经内分泌肿瘤病变的认识，将其列入诊断和鉴别诊断思路，可减少和避免漏诊、误诊。     

主动脉缩窄术模型小鼠成模早期评价技术研究

目的 主动脉缩窄小鼠是常用的心肌病模型，但是很多研究者在使用该模型时会遇到判定模型成功与否的问题。本文结合国内外该模型的建立与评价技术，利用显微手术建立主动脉缩窄小鼠模型，并利用超声多普勒技术分析建立该模型早期评价的方法。方法 C57BL/6J小鼠经开胸手术结扎主动脉弓，获得理论直径为0.4mm的无名动脉远端主动脉弓重建血管；超声多普勒分析重建小鼠主动脉弓及其分支内血流流速，分析小鼠主动脉重建情况；记录小鼠生存情况，Spss16.0软件Kaplan-Meier curves分析小鼠存活率；将术后1周多普勒血流分析数据与术后4周左室壁厚度做相关性分析；生物信息学总结分析国内外立该模型的技术与评价，综合分析建立主动脉缩窄小鼠模型的超声多普勒早期评价方法，为相关研究者提供参考。 结果 术后8周时重建组（TAC）小鼠存活率为85.0%（n=40），而假手术组（Sham）小鼠存活率为96.4%（n=28）；小鼠术后1周超声多普勒检测无名动脉血流/左颈总动脉血流比值（IA/LCCA）大于5.9时，术后4周舒张期左室后壁厚度（LVPWD）显著增厚占比达100%；IA/LCCA于5.9~10.7之间时与LVPWD成线性相关，当IA/LCCA大于10.7时线性关系下降，LVPWD增大趋势变缓。结论 TAC小鼠术后1周时使用多普勒血流分析，IA/LCCA比值大于5.9时，术后4周小鼠LVPWD即发生显著增厚，超声多普勒血流分析可以作为模型是否成功的早期评价方法。     

乳腺外Paget病6例临床病理分析

目的探讨乳腺外Paget病的临床病理和免疫组化特征,提高对该病的诊断与鉴别诊断。方法回顾性分析6例乳腺外Paget病临床病理资料,观察其组织学形态和免疫表型,并复习相关文献。结果 6例患者中,男性5例,女性1例,年龄63～79岁,平均70.7岁。临床主要为皮肤瘙痒和疼痛等表现。大体见皮损呈境界较清的鳞屑性红斑,可伴有渗出或结痂等改变。镜下可见特征性肿瘤细胞(Paget细胞),细胞胞体大,且具有非典型性,胞质淡染透明及大的圆形核仁。免疫组化:Paget细胞CK7、EMA、CAM5.2、CEA和GCDFP-15(+)。结论乳腺外Paget是一种少见的、缓慢生长的肿瘤,临床表现缺乏特异性,临床及病理医师应当充分认识该病,避免延误诊断和治疗。     

利用CRISPR/Cas9敲除大鼠胰岛素受体底物1（Irs1）基因

目的为研究胰岛素受体底物1(Irs1)基因与代谢病之间的关系,我们利用CRISPR/Cas9系统敲除大鼠Irs1基因,为研究代谢病提供基因敲除大鼠。方法针对Irs1第一外显子,设计CRISPR/Cas9作用靶点,构建sgRNA表达质粒。利用T7 RNA聚合酶体外转录sgRNA和Cas9。将Cas9 mRNA和sgRNA混合物注射入SD大鼠的受精卵中,实现靶基因敲除。用T7EN1实验初步检测靶基因的修饰情况,再经过测序分析确定突变。结果获得了5个在Irs1基因突变的首建鼠,突变效率为83%。结论得到了稳定遗传的Irs1基因敲除大鼠。     

Sleeping Beauty转座酶转基因小鼠模型的建立

目的建立表达Sleeping Beauty（sB）转座酶转基因小鼠模型,为研究sB转座子在小鼠中的应用提供工具动物。方法利用人的泛素C启动子驱动sB转座酶基因的表达,利用显微注射方法建立C57BL／6J表达sB转座酶的转基因小鼠。PCR鉴定首建鼠的基因型,Western Blot（WB）和免疫组织化学（IHC）检测SB转座酶基因在小鼠生殖腺睾丸中的表达情况,筛选睾丸中高表达sB转座酶的转基因小鼠。结果通过显微注射方式产生了4只首建小鼠,其中3只能稳定传代,利用WB和IHC成功的筛选出一株在睾丸中高表达sB转座酶的转基因小鼠。结论成功建立了睾丸组织中高表达SB转座酶转基因小鼠动物模型,为将SB转座子应用于建立基因修饰小鼠模型提供非常重要的工具动物。     

芪术颗粒对肝纤维化模型大鼠肝窦内皮细胞vWF及Caveolin-1表达的影响

目的观察芪术颗粒对肝纤维化模型大鼠肝组织内Ⅷ因子相关抗原(vWF)及陷窝蛋白-1(Caveolin-1)蛋白表达的影响。方法将24只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、芪术颗粒组、复方鳖甲软肝片组,每组6只。模型组、芪术颗粒组及复方鳖甲软肝片组腹腔注射40%CCl_4橄榄油溶液制备肝纤维化模型,同时,芪术颗粒组给予芪术颗粒1.25 g/(kg·d)、复方鳖甲软肝片组给予复方鳖甲软肝片0.625 g/(kg·d)灌胃;模型组给予等容积的无菌水灌胃。连续给药4周。正常组同等条件下饲养,不造模。用免疫组化法及Western blot法检测肝组织内vWF、Caveolin-1蛋白表达。结果 vWF、Caveolin-1表达于肝窦内皮细胞。与正常组比较,模型组肝组织内vWF、Caveolin-1蛋白表达明显增强;与模型组比较,芪术颗粒组、复方鳖甲软肝片组肝组织内vWF、Caveolin-1蛋白表达量相对较低(P0.05)。结论芪术颗粒可下调vWF、Caveolin-1蛋白的表达。