褐藻酸硫酸酯凝胶剂的质量考察及安全性研究

目的 制备褐藻酸硫酸酯凝胶剂,并对其进行质量考察及安全性评价。方法 以褐藻酸硫酸酯为有效成分制备凝胶剂,从外观、装样量、酸碱度、粘度、有效成分含量及微生物限度方面对凝胶剂质量进行考察,并对其生物安全性进行评价,包括细胞毒性、刺激性及致敏性。结论 制备得到了性状良好、性质稳定的褐藻酸硫酸酯凝胶剂,并且具有较高的生物安全性,为后期褐藻酸硫酸酯药物或医用功能制品的开发奠定了基础。     

平颏海蛇皮中新型硫酸皮肤素的分离纯化和结构表征

目的 从平颏海蛇皮中提取分离糖胺聚糖(GAGs),并对其结构进行初步表征。方法 对海蛇皮进行脱脂处理后,采用木瓜蛋白酶和胰蛋白酶联合酶解提取粗多糖,采用氯代十六烷基吡啶(CPC)沉淀和Q-Sepharose Fast Flow离子交换树脂对粗多糖进行分离纯化。运用醋酸纤维素薄膜电泳分析其GAGs种类,采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生高效液相色谱(HPLC)法分析其单糖组成,利用硫酸软骨素酶降解结合质谱和强阴离子交换色谱(SAX-HPLC)法分析其2糖组成。结果 获得了2种GAGs纯化组分,并对其中1种含量较高的纯化组分(HSAP-2)进行了初步结构表征。HSAP-2中含有4种2糖,主要为单硫酸化2糖(4S和6S)和少量2硫酸化2糖(46S)、非硫酸化2糖(0S);单糖组成中含有葡萄糖醛酸(GlcA)和乙酰氨基半乳糖(GalNAc);是1种高度杂合的新型硫酸皮肤素(DS)。结论 从平颏海蛇皮中分离纯化获得了1种结构新颖的DS,为平颏海蛇多糖结构与生物活性的深入研究提供了基础。     

柴胡龙骨牡蛎汤高效液相色谱指纹图谱的建立

目的:建立柴胡龙骨牡蛎汤水煎液和正丁醇萃取液的反相高效液相指纹图谱的检测方法。方法:采用高效液相色谱法,Thermo Fisher Hypersil GOLD C18色谱柱,流动相乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,柱温35℃,流速1 m L·min-1,检测波长276,210 nm。结果:分别建立了柴胡龙骨牡蛎汤水煎液和正丁醇萃取液指纹图谱共有模式,并指认其中的共有色谱峰。通过与对照品的保留时间和紫外光谱图比较,水煎液指纹图谱中8,12,14,15号峰分别归属为黄芩苷、肉桂酸、桂皮醛、大黄酸。正丁醇萃取液指纹图谱中16,17,28,29号峰分别归属为人参皂苷Rg1,人参皂苷Re,柴胡皂苷a,柴胡皂苷b2。10批柴胡龙骨牡蛎汤水煎液和正丁醇萃取液的HPLC指纹图谱相似度,均0.88。结论:该方法灵敏度高、稳定性和准确性良好,为柴胡龙骨牡蛎汤质量标准建立提供了可靠的科学依据。     

基于标准浸膏-指标成分-药效的多指标综合评分法优化牡蛎散提取工艺

目的 运用基于标准浸膏特征谱图-指标成分-药效的多指标综合评分法确定经方牡蛎散的最佳提取工艺。方法 利用HPLC法建立牡蛎散标准浸膏特征图谱,并建立指标成分毛蕊异黄酮苷的含量测定方法,采用小鼠体外脾淋巴细胞增殖实验评价浸膏的免疫活性;以与标准浸膏特征图谱的相似度、毛蕊异黄酮苷提取率和体外脾细胞增殖率为指标,采用L9（34）正交试验设计法对牡蛎散进行提取工艺优化,运用多指标综合评分法确定最优提取工艺参数。结果 牡蛎散的最佳提取工艺为：药材加8倍量水,浸泡1 h,提取2 h,提取2次。结论 优选的提取工艺合理可靠,适合工业化生产;多指标设计探索将化学与生物活性相结合、特征图谱与指标成分相结合,为经方提取工艺优化研究提供了方法学参考。     

南极海茸多糖果冻的润肠通便功能研究

目的 制备南极海茸多糖果冻,研究其对便秘小鼠的润肠通便作用。方法 以南极海茸多糖为原料,制备一款酸甜可口的果冻。采用PMP柱前衍生-HPLC法测定果冻中南极海茸多糖的含量。探索了南极海茸多糖果冻对便秘小鼠润肠通便作用：将昆明小鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组、果冻低剂量组和高剂量组。果冻低剂量组和高剂量组小鼠按0.2 mL/10g剂量分别灌胃给予添加量为5%南极海茸多糖果冻溶液;阳性对照组按0.2 mL/10 g剂量灌胃给予乳果糖口服液;空白组和模型组小鼠给予相同剂量的果冻基质,连续灌胃7d。采用盐酸洛哌丁胺小鼠便秘模型,观察各组小鼠的首粒排黑便时间、5h内排便粒数、排便重量以及小肠墨汁推进率。结果 采用PMP柱前衍生-HPLC法,以岩藻糖表征南极海茸多糖含量为5.06%,测定值与实际添加量相符。实验结果表明,与模型组相比,南极海茸多糖果冻可显著提高小肠墨汁推进率(P＜0.05),明显增加便秘小鼠的排便粒数和排便重量(P＜0.05),显著缩短便秘小鼠的首粒排黑便时间(P＜0.01)。结论：成功制备了南极海茸多糖果冻,PMP柱前衍生-HPLC法检测果冻中岩藻糖含量结果准确,专属性好,可用于南极海茸多糖果冻的质量控制。南极海茸多糖果冻具有良好的润肠通便作用。     

沙蚕(Perinereis aibuhitensis)硫酸多糖的结构表征及抗凝血活性研究

目的 对来源于沙蚕（Perinereis aibuhitensis）的硫酸多糖进行结构表征和抗凝血活性研究。方法 采用两步酶解法从沙蚕中提取多糖;利用强阴离子交换色谱和凝胶渗透色谱对粗多糖进行分离纯化;通过离子色谱法、高效液相色谱法（HPLC）、高效凝胶渗透色谱-多角度激光光散射仪（HPGPC-MALLs）联用技术、硫酸软骨素酶ABC酶法分析、核磁共振氢谱（1H-NMR）等方法,研究纯化多糖的化学组成和结构特征;通过测定APTT、PT和TT评价其体外抗凝血活性。结果 从沙蚕中纯化得到了2种硫酸多糖组分PAE1和PAE2,二者的总糖含量、蛋白含量、硫酸根含量及分子量分别为65.21%、14.31%、0.33%、24.49 kDa和53.08%、11.33%、13.46%、57.39 kDa。PAE1主要由Gal（43.58%）、Glc（32.63%）、GalN（8.71%）、GlcA（7.66%）及少量Fuc（2.77%）组成;PAE2主链为硫酸软骨素C（GlcAβ1→3GalNAc6S）,支链主要由Fuc（35.33%）、Gal（20.9%）和Glc（8.98%）构成。PAE1和PAE2均可明显延长APTT和PT。结论 首次从沙蚕中提取、分离得到2种硫酸多糖,其中PAE2是1种含有Fuc、Gal与Glc支链并具有明显的体外抗凝血活性的结构新颖的类硫酸软骨素,该发现为沙蚕硫酸多糖的开发提供了依据。     

褐藻胶寡糖对刀豆蛋白A诱导的急性肝损伤保护作用及机制初探

目的 研究褐藻胶寡糖对刀豆蛋白A (Concanavalin A, ConA)诱导急性肝损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法 本实验以分子量为3kDa的甘露糖醛酸寡糖（M-3k）和古罗糖醛酸寡糖（G-3k）为受试样品,通过检测ConA注射后14h血清转氨酶水平及肝组织病理学评估肝脏损伤;通过酶联免疫法(ELISA) 检测TNF-α、IL-6水平;Western Blotting法检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果 与模型组相比,褐藻胶寡糖预防组显著降低了ConA急性肝损伤小鼠血清AST和ALT水平(P＜0.05),且组织病理学观察发现,肝细胞损伤、炎性浸润和凋亡程度减轻;与模型组相比,褐藻胶寡糖预防组显著降低了肝组织匀浆中促炎因子TNF-α、IL-6水平(P＜0.05);褐藻胶寡糖预防组Bcl-2蛋白表达明显高于模型组(P＜0.05),Bax蛋白表达水平明显低于模型组(P＜0.05)。讨论 说明褐藻胶寡糖对ConA诱导小鼠急性肝损伤具有一定保护作用,并且其作用机制可能部分与抑制肝脏炎症反应和干扰凋亡过程有关。     

南极海茸多糖咀嚼片的制备及含量测定

目的：研制南极海茸多糖咀嚼片的配方工艺,并建立含量测定方法。方法：以南极海茸多糖为原料,采用湿法制粒压片工艺,通过正交实验,以多指标综合评分法,确定最适工艺配方。采用Gibbons 比色法测定咀嚼片中南极海茸多糖的含量。结果：南极海茸多糖咀嚼片的优选处方为：南极海茸多糖10%,填充剂木糖醇、甘露醇和山梨醇78%,风味剂11.5%,硬脂酸镁0.5%。采用Gibbons 比色法,检测到咀嚼片中岩藻糖含量为5.9 mg/g,岩藻糖在10-100 μg范围内线性关系良好(r=0.9993),回收率在95.8%-103.3%之间, RSD=1.88%(n=6)。结论：按照正交优化的配方工艺,可制备出性状良好、口感酥脆、风味协调且具有海洋特色的南极海茸多糖咀嚼片。Gibbons 比色法检测结果准确,操作简单快速,可用于南极海茸多糖嚼片的质量控制。     

HPLC法测定海藻药材质量标志物岩藻糖的含量

目的 建立中药海藻药材岩藻糖含量的HPLC测定方法。方法 水提得海藻粗多糖,继而经2 mol/L三氟乙酸降解、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生后,采用HPLC测定岩藻糖含量,并进行方法学考察。结果 岩藻糖在6.44 ~ 824.52 μg/mL 浓度范围内具有良好的线性关系,y = 15.074 x - 52.068,r = 0.9998;最低检测限0.80 μg/mL,最低定量限1.61 μg/mL;供试品溶液在40 h内稳定性良好,RSD 0.04%;精密度、重复性良好,RSD分别为0.51%、1.15%;平均加样回收率为99.28 %,RSD 2.15 %(n = 9)。结论 建立的方法简便准确、精密度高、重复性好,可用于海藻药材的质量控制。     

海洋抗肿瘤候选药物普那布林(Plinabulin)及类似物的研究进展孙天文1,2,丁忠鹏1, 王世潇2, 赵建春1,2, 管华诗1,2,

【】 微管蛋白是细胞骨架的重要组成部分,在维持形态、信号传导及有丝分裂等过程中起着重要的作用。普那布林(Plinabulin)是在从海洋焦曲霉菌中分离得到的天然产物 Phenylahistin 结构基础上,经构效关系研究,合成出的二酮哌嗪类微管蛋白抑制剂。普那布林作为抗肿瘤候选药物,目前已进入临床二期研究。近年来,为了获得高效、低毒和生物利用度更高的普那布林衍生物,本领域研究人员进行了大量的优化研究,获得了一些具有更好活性的衍生物。本文就普那布林及其类似物优化的研究进展进行综述。