福建肾综合征出血热野鼠型和家鼠型病毒毒力差异的初步观察

肾综合征出血热褐家鼠型和黑线姬鼠型之间,除流行特征、临床症状及病毒抗原性方面有差异外,其病毒毒力亦有不同。非流行区家鼠型病毒株的毒力比流行区野鼠型的弱。乳小鼠可用于测定本病病毒株毒力。福建南部广泛存在出血热疫源地,但除个别地区偶发少数轻型病例外,多数地区为无病例区或隐性感染区,这是与该地区褐家鼠型病毒株毒力较弱有关。该病的流行与否及其强度,和当地是否存在有野鼠型病毒株有明显关系。     

肾综合征出血热病毒76－118株的反转录及聚合酶链反应扩增、鉴定的初步研究

用反转录和聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增了肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）７６－１１８株ＭＲＮＡ３＇－端２３７ｂｐ基因片段。制备了长臂光敏氨基已酸生物素标记的２３７ｂｐ探针。经琼脂糖电泳和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹，生物素－亲和素系统杂交和显色，对２３７ｂｐ扩增产物进行了特异性和灵敏性鉴定。ＰＣＲ技术与反转录技术相结合可用来对一些ＲＮＡ病毒进行研究和诊断，并能快速制备出质量较好的标记探针。     

HFRS病毒结构蛋白致病作用及检测的研究

用分子生物学方法动态观察ＨＦＲＳ患者外周血和单核细胞中在第３、５、７和１４病日检出ＨＦＲＳＶ抗原的同时，发现ＨＦＲＳ患者在第３～１４病日外周血单核细胞中亦可查到ＭＰ和ＮＰ，说明ＨＦＲＳＶ在其细胞内存留时间较长，并不断有病毒ＭＰ和ＮＰ表达，在早期ＭＰ表达较强者中大部分患者有典型５期经过或向重型发展；ＭＰ持续高表达者则病情重预后差。随着病程延长和机体产生中和抗体，病毒复制减少，ＭＰ和ＮＰ表达也随之减弱乃至消失。此外，轻型和重型病人血清抗体检测表明，血清特异性ＩｇＭ滴度的高低与病情的轻重关系密切而ＩｇＧ则与病情轻重无关。     

抗肾综合征出血热病毒独特型人源性单克隆抗体的制备

分离肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）恢复期患者外周静脉血淋巴细胞，经分离的Ｂ淋巴细胞ＥＢ病毒转化后分别与人─鼠种间骨髓瘤细胞系ＳＨＭ－Ｄ３３和小鼠骨髓瘤细胞系Ｘ６３－Ａｇ８．６５３融合，融合率分别为９６％和９０％。杂交瘤生长孔分泌抗ＨＦＲＳＶ抗体阳性率达３３％和２３％。而且均有一孔为抗ＨＦＲＳＶ独特型抗体阳性，经克隆化筛选各得到一株杂交瘤细胞系，命名为Ｃ８和Ｆ３。经鉴定两株杂交瘤细胞系分泌的人源性单克隆抗体均为ＩｇＭ型。Ｆ３抗体产量小于１ｍｇ／ｍｌ，Ｃ８抗体产量为３０～５０ｍｇ／ｍｌ，且已稳定传代两年以上。抗ＨＦＲＳＶ独特型人源性单克隆抗体的成功制备，为ＨＦＲＳＶ疫苗的研制开辟了一条新路。     

肾综合征出血热混合型疫区分型的研究

运用血凝抑制试验方法，对肾综合征出血热混合型疫区病人进行分型研究，发现姬鼠型与家鼠型病人之比为２．６４：１，提示家鼠感染与室内感染及轻型病人有关，而野鼠感染则发生在户外，且与重型病人有关。     

H-2~b和H-2~d单体型小鼠MHCI类分子结合的HFRSV蛋白抗原表位的预测

本文通过对Ｈ－２ｂ和Ｈ－２ｄ单体型小鼠主要组织相容性抗原Ｉ类分子结合抗原肽的分析，建立了一个计算机预测模型，并对肾综合征出血热病毒核蛋白（ＮＰ）及囊膜糖蛋白Ｇ１和Ｇ２可与Ｂａｌｂ／ｃ小鼠（Ｈ－２ｄ）和Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ－２ｂ）小鼠ＭＨＣＩ类分子相结合的抗原表位进行了分析，预测出可分别与Ｈ－２Ｋｂ，Ｈ－２Ｄｂ，Ｈ－２Ｋｄ，Ｈ－２Ｄｄ和Ｈ－２Ｌｄ结合的核蛋白表位，依此各有７，１４，４，０和８个；囊膜糖蛋白Ｇ１＋Ｇ２的表位，依次有１４，１９，２７，２和４４个。     

肾综合征出血热病毒血凝素单克隆抗体的建立与鉴定

用HFRSV血凝素免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,共获得56株分泌抗HFRSV McAb的杂交瘤细胞系。对其中10株细胞系应用血凝抑制试验证明有9株为特异性分泌抗HFRSV血凝素McAb的杂交瘤细胞系。应用微量细胞培养中和试验证明6株具有中和活性。z株(3D_8和3G_1)具有高滴度的血凝抑制活性和中和活性。10株HFRSV血凝素McAb均能与从不同疫区,不同宿主分离的HFRSV反应,说明HFRSV血凝素具有群共同性。     

汉坦病毒核衣壳蛋白mAb B11模拟结合肽的筛选和鉴定

目的：应用噬菌体展示肽文库筛选可与肾综合征出血热病毒mAb B11特异性结合的短肽。方法：采用Protein-A亲和纯化的单抗为筛选配基，对噬菌体展示的随机12肽文库进行生物亲和淘选，夹心ELISA、竞争ELISA鉴定筛选克隆的结合特性，并进一步对阳性克隆进行序列测定和分析。结果：通过4轮淘选，ELISA测定显示筛选到的噬菌体短肽多数能与B11单抗特异性地结合（12／15），序列分析表明8个阳性克隆氨基酸序列分为4组，同源性分析显示核心序列可能为（M／F）HR（H／T）X（H／W）或（R／F）HX（H／T）P（W／M）（L／Y）。结论：基于表位水平的HFRSV特异性诊断试剂的研制和小分子多肽疫苗的设计提供了重要依据     

一株抗独特型人单抗轻链可变区基因的克隆及序列测定

目的：探索抗独特型抗体模拟抗原的分子机理。方法：利用反转录－ＰＣＲ方法，从分泌肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）内影像型抗独特型人单抗的杂交瘤细胞系（Ｃ８），成功地克隆了抗ＨＦＲＳＶ Ｉｄ人单抗轻链可变区基因，并将此基因重组入Ｍ１３噬菌体ＤＮＡ中，测定了此轻链可变区基因全序列。结果：经计算机分析，基因全长共３２４ｂｐ，编码１０８个氨基酸，氨基酸序比较性分析发现所得的该单抗ＣＤＲ２区与ＨＦＲＳＶＧ２蛋     

肾综合征出血热病毒核酸的免疫研究

目的编码NP的S基因进行病毒核酸的免疫研究.方法进行实验动物的DNA免疫,细胞因子的测定,淋巴细胞增殖反应测定,免疫鼠血清的抗核蛋白NP抗体的测定.结果蛋白在Vero-E6细胞中的瞬时表达.免疫鼠细胞因子：接种pcDNA3.1＋S的鼠IL-4的产生和IFN-γ的产生均较对照组要高.细胞增殖反应：阳性对照刀豆蛋白A（ConA）刺激组的增殖指数为2.1,对照空载体增殖指数较低为0.797,而实验组pcDNA3.1＋S接种组和pcDNA3.1＋S（ISS）接种组的增殖指数分别为1.43和1.67.免疫鼠血清特异性抗体的检测：接种pcDNA3.1＋S（ISS）免疫鼠的血清抗体水平较接种pcDNA3.1＋S免疫鼠的血清抗体水平升高明显.而空载体pcDNA3.1＋接种组的小鼠血清抗体水平低.结论肾综合征出血热（HFRS）病毒编码NP的S基因作为病原体的抗原基因进行的核酸免疫,可以起到免疫保护作用.