吸入式气管滴注法的建立

目的:建立一种廉价、高效的呼吸道给药或染毒方法。方法:24只雄性BALB/c小鼠随机平均分为两组,分别进行鼻腔滴注和吸入式气管滴注。24只雄性SD大鼠随机平均分为两组,分别给予非暴露式气管滴注和吸入式气管滴注。小鼠每只滴注50μL生理盐水,大鼠每只滴注100μL生理盐水;每组中取1只动物按相应方法滴注用生理盐水配制的含体积分数50%的蓝墨水,解剖观察肺部形态,评价滴注效果;记录操作时间(从麻醉结束至滴注完成)和成功率。结果:小鼠鼻腔滴注的操作时间为(92.6±5.4)s,吸入式气管滴注操作时间为(25.2±4.0)s;大鼠非暴露式气管滴注操作时间为(102.6±6.5)s,吸入式气管滴注操作时间为(39.9±3.3)s;吸入式气管滴注操作时间均明显较短(t=35.042、29.849,P<0.001)。吸入式气管滴注组小鼠和非暴露式气管滴注组大鼠的肺组织散在分布蓝色印迹,而鼻腔滴注组小鼠的肺部着色不明显;鼻腔滴注和吸入式气管滴注的成功率为100%,而非暴露式气管滴注的成功率为83.7%。结论:吸入式气管滴注兼具廉价、快捷、无创、高效的优点,可广泛应用于呼吸道给药或染毒实验以及疾病模型的建立。     

SARS-CoV-2 Nsp8基因及蛋白分子特征探讨

  目的  SARS-CoV-2感染不仅引起呼吸系统病变，且可能累及生殖系统及中枢神经系统。本研究探讨SARS-CoV-2 nsp8基因变异、Nsp8蛋白结构与生物学功能及靶向药物，为建立更有效的防控策略奠定基础。  方法  采用生物信息学技术和大型生物数据库，分析nsp8基因变异性、Nsp8理化特征、空间结构、抗原表位、生物功能、药物结合靶点等。  结果  基于3种28株冠状病毒的nsp8序列构建了进化树；SARS-CoV-2毒株间nsp8基因保守性为99%~100%，与SARS遗传距离较MERS近；Nsp8无信号肽及跨膜区；在体外网织红细胞内半衰期为4 h，具有亲水性；获得Nsp8二级和三级结构模型；Nsp8具有线性B细胞和CTL细胞抗原表位、磷酸化及SUMO修饰位点；从DrugBank数据库筛选出可靶向结合Nsp8的四种药物。  结论  Nsp8具有典型抗原分子特征，参与病毒复制，且同种不同株nsp8基因高度保守，在病毒致病机制、分型及防治研究中具有应用潜力。在全球亟需新型冠状病毒肺炎特效防治措施的状况下，靶向结合Nsp8的化疗药物具有重要科学意义和应用价值。     

肠道病毒感染致神经损伤小鼠脑组织NOD样受体蛋白3的表达

目的:探讨NOD样受体蛋白3(NLRP3)在肠道病毒(EV)感染导致的神经损伤中的作用.方法:30只BALB/c小鼠分为对照组、肠道病毒(EV)71组和柯萨奇病毒A组2型(CVA2)组,每组10只.EV71组和CVA2组小鼠分别经腹腔注射EV71或经肌内注射CVA2,观察临床症状和生存情况.感染后第7天,采用HE和尼氏...     

中国柯萨奇病毒A组6型分离株全基因序列特征分析

  目的  分析中国2007-2019年柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A6,CVA6)毒株遗传进化规律,以期为疾病预防及疫苗研发提供理论依据。  方法  收集中国截至2021年3月1日Genbank数据库中454株CVA6毒株全基因序列,分析毒株分离年份、地区信息,构建系统发育树揭示进化规律并进行基因重组分析。  结果  地区信息显示,毒株主要分布于中国沿海及南方地区,时间信息表明,自2013年起,CVA6毒株报告数量逐渐增加。系统进化结果表明,454株CVA6毒株分10个分支,A分支中3株分离自江西省的毒株与CVA6原型毒株Gdula(AY421764)亲缘关系极为接近,核酸序列相似度近乎100%,J分支是中国流行最广泛的毒株群,包含了中国较多省份如山东省、广东省等。基因重组分析显示,基因重组现象较为普遍,大部分CVA6代表毒株在P2区和P3区与其他肠道病毒A组毒株之间存在基因重组现象。  结论  2007-2019年CVA6毒株在中国广泛传播,毒株间基因重组现象普遍存在。     

中国柯萨奇病毒A组2型的遗传进化分析

  目的  探讨中国柯萨奇病毒A组2型(coxsackievirus A2, CV-A2)毒株的遗传进化特征。  方法  收集中国CV-A2毒株的VP1区及全基因序列,采用MEGA 10.2.4软件构建系统进化树并开展氨基酸位点突变分析,采用SimPlot 3.5.1软件进行基因重组分析。  结果  共收集到118条VP1序列和26条全基因序列。CV-A2毒株主要来源于广东省,毒株数量自2011年开始迅速增多。基于VP1序列构建的进化树有7个分支,原型毒株为独立A组,多数CV-A2毒株聚集于G组。具有全基因组序列的CV-A2代表株的基因重组分析显示毒株间存在基因重组。另外,VP1氨基酸序列共有22个突变位点。  结论  中国流行的CV-A2毒株已发生较明显的基因重组和VP1区域氨基酸位点突变,监测CV-A2的演化对于手足口病的防控具有重要意义。     

纳米氧化锌对人冠状动脉内皮细胞血红素氧合酶-1和血小板内皮细胞黏附分子-1表达的影响

目的 探讨纳米氧化锌(zinc oxide nanoparticles,ZnO-NPs)对人冠状动脉内皮细胞血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和血小板内皮细胞黏附分子-1(platelet endothelial cell adhesion molecules-1,PECAM-1)蛋白表达的影响.方法 采用噻唑蓝实验(MTT比色法)检测ZnO-NPs(12.5、25、50、70、80、90、100、200 μg/ml处理后)对人冠状动脉内皮细胞存活率的影响.用不同浓度ZnO-NPs(0、10、20、40 μg/ml)刺激人冠状动脉内皮细胞24 h后,用ELISA法检测细胞培养上清中HO-1及PECAM-1蛋白的表达.结果 12.5、25、50、70、80、90、100、200 μg/ml ZnO-NPs处理后,人冠状动脉内皮细胞的存活率分别为89.76％、83.61％、63.10％、53.20％、48.11％、42.35％、38.06％、25.44％.0、10、20、40μg/ml ZnO-NPs刺激后,人冠状动脉内皮细胞HO-1蛋白的表达量分别为(0.041±0.011)、(0.512±0.076)、(0.906±0.059)、(1.062±0.089) ng/L,两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.05),ZnO-NPs浓度与HO-1蛋白表达存在剂量-效应关系.0、10、20、40 μg/ml ZnO-NPs刺激后,人冠状动脉内皮细胞PECAM-1蛋白的表达量分别为(7.966±0.046)、(7.993±0.036)、(8.629±0.052)、(8.811±0.039) μg/L,当ZnO-NPs浓度为20、40 μg/ml时,与空白对照组比较,PECAM-1蛋白的表达均上升,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 ZnO-NPs能够降低人冠状动脉内皮细胞存活率,并可诱导人冠状动脉内皮细胞HO-1和PECAM-1蛋白表达上调.     

血管紧张素转化酶2参与臭氧暴露导致的小鼠肺部炎症及气道重塑

目的 研究血管紧张素转换酶2（ACE2）在臭氧暴露致小鼠肺部炎症及气道重塑中的作用。方法 16只野生型（WT）C57BL/6J小鼠和16只ACE2 敲除（KO）小鼠分别暴露于空气和臭氧（0.8 ppm）中,每天暴露3 h,连续暴露5 d。分别设置AirWT组,Air KO组,Ozone WT组和Ozone KO组。Masson染色观察小鼠肺组织胶原沉积情况,HE染色观察小鼠肺部病理学改变,并进行评分;收集小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）,并进行细胞计数;分别采用BCA法和酶联免疫吸附法（ELISA）测定BALF总蛋白和细胞因子浓度;荧光定量PCR检测肺组织中气道重塑相关指标的mRNA表达;小鼠的气道阻力采用小动物呼吸机测量（乙酰甲胆碱激发）。结果 臭氧暴露ACE2 KO小鼠肺组织炎症病理学变化总分显著高于臭氧暴露WT小鼠（P<0.05）。Masson染色结果显示,臭氧暴露小鼠肺组织支气管和肺泡周围有大量的胶原沉积,臭氧暴露ACE2 KO小鼠肺组织的支气管和肺泡的胶原沉积阳性区域面积为（19.62±3.16）%、（21.63±3.78）%,高于臭氧暴露 WT 小鼠肺组织的（6.49±1.34）%、（4.44± 0.99）%,两者差异具有统计学意义（P<0.05）。臭氧暴露ACE2 KO小鼠BALF中总细胞数与总蛋白含量均高于臭氧暴露WT小 鼠,差异无统计学意义（P>0.05）。臭氧暴露ACE2 KO小鼠BALF中IL-6、IL-1β、TNF-α、趋化因子（C-X-C基序）配体1（CXCL1/KC）和单核细胞趋化蛋白（MCP-1）水平均高于臭氧暴露WT小鼠,其中IL-1β水平的变化差异具有统计学意义（P<0.05）。臭氧暴露 ACE2 KO 小鼠的肺组织中的基质金属蛋白酶 9（MMP-9）、MMP-13、金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP4）、Ⅰ型胶原α1 （COL1A1）、TGF-β的mRNA水平均明显高于WT组小鼠,两组的MMP-9、TIMP4、COL1A1、TGF-β的mRNA水平差异具有统计学意义（P<0.01）。两组小鼠在0、10、25、100 mg/mL的乙酰甲胆碱浓度下的气道阻力的差异无统计学意义（P>0.05）。结论 ACE2参与臭氧暴露导致的小鼠肺部炎症及气道重塑。     

新型冠状病毒肺炎聚集性疫情特征初步分析

新型冠状病毒肺炎作为新发传染病，自2019年12月发现以来，全球27个国家和地区已有病例报告。随着疫情的发展，聚集性疫情所占的发病数比例不断增加，尤其是武汉市和湖北省以外地区，暴露来源发生很大变化。本研究收集2020年1月1日至2月20日期间非医疗机构新型冠状病毒肺炎聚集性疫情377起（涉及病例1 719例）进行分析。其中，家庭聚集性疫情297起（占79%），确诊病例中位数为4例；聚餐39起（占10%），确诊病例中位数为5例；商场或超市23起（占6%），确诊病例中位数为13例；工作单位12起（占3%），确诊病例中位数为6例；交通工具6起（占2%），确诊病例中位数为6例。依聚集性病例潜伏期估计所需条件，选出325例，推测潜伏期为1~20 d，中位数为7 d，众数为4 d。此外，对国内某百货大楼聚集疫情分析结果提示本次疫情潜伏期患者可能成为传染源。"钻石公主"号邮轮聚集疫情从2月5-21日共634人被确诊感染，各类人群（国籍、年龄、性别）均易感，提示乘客年龄、无症状感染及邮轮内封闭环境可能是导致邮轮后续病例出现间歇同源暴露和人传人增殖模式的主要原因，两起典型疫情的进展清晰地展现了武汉早期病例的播散情况。因此，在疫情防控中，除隔离患者外，追踪、排查和隔离密切接触者及次级接触者至关重要；尤其对于疫区的健康人群，自我隔离是防控关键。     

湖北以外省份新型冠状病毒肺炎病例谱特征和扩散强度初步分析

目的 分析湖北以外省份新型冠状病毒肺炎（COVID-19）病例谱特征和扩散强度。方法 从各省级卫生健康委员会官方网站获得每日疫情数据和病例信息，计算发病率、重症比例、病死率和扩散比。结果 截至2020年3月20日，累计确诊12 941例，死亡116例，各省份平均发病率为0.97/10万，平均重症比例为13.5%，平均病死率为0.90%。发病率前三省份是浙江（2.12/10万）、江西（2.01/10万）和北京（1.93/10万）。各地区病例谱特征不一致，重症比例前三省份是天津（45.6%）、新疆（35.5%）和黑龙江（29.5%）；病死率前三省份是新疆（3.95%）、海南（3.57%）和黑龙江（2.70%）。各地区扩散情况也不一致，平均扩散比为0.98，扩散比最低的3个省份分别为西藏（0）、青海（0.20）和广东（0.23）。结论 各地区采取的疫情防控措施卓有成效，遏制了COVID-19在中国进一步蔓延，提高了救治成效，但不同地区间的重症比例、病死率、扩散比存在明显差异。