食管癌高、低发区食管鳞癌患者生存及其影响因素分析

目的 探讨食管癌高、低发区食管鳞癌患者的生存状况及其影响因素。方法 收集38 741例经病理学证实为食管鳞癌患者的资料，其中，高发区患者23 273例（60.1%），低发区15 468例（39.9%）。所有患者均行食管癌根治术。运用卡方检验分析不同临床病理特征患者的组间差异，Kaplan-Meier法绘制不同临床病理特征患者的生存曲线并用Log rank进行检验。多因素Cox比例风险回归模型法分析影响生存的主要因素。结果 低发区男性患者所占比例高于高发区（P<0.001），低发区诊断年龄≥50岁食管癌患者所占比例高于高发区（P<0.001）。高发区食管鳞癌患者的整体生存优于低发区患者（P<0.001）。Cox比例风险回归模型综合分析结果表明：高低发区、性别、确诊年龄、肿瘤部位、分化程度、TNM分期和肿瘤家族史均是影响食管鳞癌患者生存的独立因素。结论 高发区食管鳞癌患者整体生存优于低发区；低发区是食管鳞癌患者预后差的独立危险因素。     

深静脉血栓形成患者凝血因子ⅩⅢ Val34Leu基因多态性检测

目的:探讨凝血因子ⅩⅢ(FⅩⅢ)Val34Leu基因多态性与中国人群深静脉血栓形成(DVT)发病的相关性.方法:利用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,检测了103例DVT患者与106例正常对照的FⅩⅢVal34Leu基因多态,并加以对照分析.结果:103例DVT患者FⅩⅢVa134Leu基因型均为野生型V/V,未见突变类型;106例对照组中发现1例突变杂合子V/L.2组基因型频率、等位基因频率相互比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:FⅩⅢVal34Leu对中国人群DVT有保护作用的可能性极小.     

N-myc下游调节基因家族成员3在胃癌细胞增殖和侵袭中的作用

目的探讨N-myc下游调节基因家族成员3(NDRG3)对胃癌细胞生物学行为的影响及其机制。方法实验分NDRG3敲减组和对照组,AGS-NDRG3小发夹状RNA(shRNA)组采用shRNA技术干扰AGS细胞中NDRG3表达,同时设置AGS-Vector对照组转染空白对照病毒;通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测两组细胞中NDRG3 mRNA和蛋白表达以检查AGS-NDRG3 shRNA组中NDRG3敲减效果,利用细胞计数试剂盒(CCK-8)法和Transwell实验分别检测两组细胞中细胞增殖和侵袭能力,利用流式细胞仪分析两组细胞中细胞周期分布情况,并通过Western blot检测敲减两组细胞中细胞核增殖抗原(Ki-67)和p53蛋白表达水平,组间比较采用单因素方差分析。结果AGS-NDRG3 shRNA组NDRG3 mRNA和蛋白表达水平均显著低于对照组(NDRG3 mRNA,0.220±0.035比1.020±0.078,t=14.713,P<0.01;NDRG3蛋白,0.140±0.018比0.820±0.025,t=7.892,P<0.01),差异均有统计学意义。CCK-8实验结果显示,在培养24、48、72 h后,AGS-NDRG3 shRNA组细胞的增殖水平(0.388±0.025、0.576±0.044、0.873±0.051)明显低于对照组(0.457±0.033、0.674±0.047、1.125±0.062),差异均有统计学意义(t=4.983、5.852、8.082,P<0.01);Transwell迁移实验结果表明,AGS-NDRG3 shRNA组侵袭穿过Transwell小室膜的细胞数[(474.5±27.6)个]明显低于对照组[(1127.0±48.8)个],差异有统计学意义(t=12.380,P<0.01);细胞周期分析显示,敲减NDRG3表达的AGS细胞周期阻滞于S期,其S期占49.33%,对照组S期占30.29%(t=4.634,P<0.01),差异均有统计学意义;Western blot检测结果显示,敲减NDRG3表达后AGS细胞中Ki-67蛋白表达低于对照组(0.380±0.021比0.860±0.036,t=5.163,P<0.01)、野生型p53蛋白表达高于对照组(0.720±0.018比0.160±0.013,t=11.354,P<0.01),差异均有统计学意义。结论NDRG3可能通过调控p53通路促进AGS细胞增殖及侵袭能力。     

组蛋白去甲基化酶含有Jumonji结构域的蛋白质2D在胃癌组织的表达及其临床意义

目的观察含有Jumonji结构域的蛋白质2D(JMJD2D)在胃癌组织的表达并探讨其临床意义。方法收集2013年1月至2014年12月期间来自中国科学院大学附属肿瘤医院(浙江省肿瘤医院)手术治疗并经病理诊断证实的133例胃腺癌标本。采用免疫组织化学法检测133例胃癌组织及其配对的癌旁正常组织中JMJD2D的表达,应用SPSS-22统计软件分析其临床意义及与预后的关系,采用比例风险回归模型(proportional hazards model,Cox模型)多因素回归分析JMJD2D蛋白表达及其他病理参数对胃癌患者预后的预测价值。结果胃癌组织中JMJD2D的高表达率为75.9%(101/133),显著高于癌旁正常胃组织(高表达率2.3%,3/133,χ²=64.821,P<0.01),差异有统计学意义。肿瘤组织中JMJD2D高表达与患者幽门螺杆菌感染状态(χ²=22.163,P<0.01)、肿瘤分化程度(χ²=7.022,P<0.05)、浸润深度(χ²=5.061,P<0.05)、淋巴结转移状态(χ²=14.123,P<0.01)、临床TNM分期(χ²=23.194,P<0.01)显著相关,而与患者性别、肿瘤诊断时年龄、肿瘤部位和大小无相关(χ²=0.072、1.451、2.562、1.383,P值均>0.05)。普兰-迈耶(Kaplan-Meier)生存分析显示,JMJD2D高表达的胃癌患者与正常/低表达患者中位生存时间分别为34个月和65个月,两者差异有统计学意义(P<0.05)。比例风险回归模型(proportional hazards model,Cox模型)多因素回归分析表明JMJD2D高表达是胃癌患者独立预后因素[危险比(HR)=2.38,P<0.01]。结论JMJD2D在胃癌组织中高表达,且与胃癌进展及患者预后显著相关。     

转染癌胚抗原基因的人树突状细胞疫苗表达的研究

目的　探索使用质粒转导制备转基因DCs疫苗的方法。方法　采用细胞因子rhIL 4和rhGM CSF诱导培养法制备人外周血树突状细胞 ,用Lipofectine向人DCs转染含人CEA真核表达质粒。结果　转染组DCs培养上清CEA含量明显高于未转染组培养上清CEA含量。结论　人CEA真核表达质粒转染DCs可内源性表达CEA     

高压氧综合治疗对非动脉炎性前部缺血性视神经病变患者的临床疗效

目的探讨高压氧综合治疗非动脉炎性前部缺血性视神经病变(non-arteritic anterior ischemic optic neuropathy,NAION)患者的临床疗效。方法选取2017年1月至2019年1月郑州市第二人民医院收治的NAION患者110例,采用随机数字表法将患者分为对照组(55例)和高压氧组(55例)。对照组给予激素冲击、改善微循环、营养神经等常规治疗;高压氧组在对照组基础上给予高压氧治疗,舱压0.2 MPa(2.0 ATA),每日1次,10次为1个疗程,共治疗30 d。观察并分析2组患者治疗前后的视力、视野平均敏感度(mean sensitivity, MS)、视野平均缺损(mean defect, MD)、图形视觉诱发电位(pattern visual evoked potential, PVEP)振幅、潜伏期,评定治疗有效率。观察高压氧综合治疗对NAION患者血清人软骨糖蛋白-39 (又称几丁质酶-3样蛋白-1,chtinase-3-like-1 protein, YKL-40)的影响。结果 2组患者治疗前的视力、视野MS、视野MD、PVEP振幅、潜伏期比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。高压氧组治疗后视野MD低于对照组及本组治疗前,视力和视野MS高于对照组及本组治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05)。高压氧组患者的PVEP振幅高于本组治疗前及对照组,潜伏期短于本组治疗前及对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗7 d时2组血清YKL-40达到峰值,高压氧组治疗3、7、15、30 d时均低于同时间点对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。高压氧组患者的总有效率(83.63%)高于对照组(74.55%),组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论高压氧综合治疗可以明显提高NAION患者的视力、视野MS,改善患者视野MD、PVEP振幅、潜伏期,减轻炎性反应,有利于提高临床疗效。     

"环境-遗传-基因互作"模式中磷脂酶Cε1对食管癌易感性的影响

随着全基因组关联分析( genome-wide associa-tion study,GWAS)和后GWAS研究的深入,越来越多的疾病相关单核苷酸多态性( single nucleotide polymorphism,SNP)被发现.近年的研究[1-3]提示,部分疾病相关SNP可导致其所在基因以及相关基因转录和蛋白表达水平发生变化,进一步影响肿瘤的发生和发展,甚至影响肿瘤的转归(预后),这些发现极大丰富了"环境-遗传-基因互作"模式对肿瘤发生、发展和转归影响的新理论;这些SNP可分为增加疾病易感性的SNP和致病性SNP两大类.推测致病性SNP不但影响相关基因的转录和蛋白表达,并且也可能影响驱动基因突变.     

siRNA沉默DNA聚合酶β基因对胃癌BGC-823细胞增殖的影响

目的:观察siRNA沉默DNA聚合酶β(DNA polymerase β,pol β)基因后对胃癌BGC-823细胞增殖的影响.方法:用实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)和Western印迹法检测先前构建好的转染不同siRNA载体的各组细胞中pol β mRNA和蛋白质表达水平,用FCM法和裸鼠体内成瘤实验检测各组细胞的增殖情况.结果:转染pol β靶向siRNA的BGC-823细胞中pol β mRNA和蛋白质表达水平均明显降低,且siRNA载体pRNAT-U6.1-sipolβ2(抑制程度83%)的沉默抑制作用强于siRNA载体pRNAT-U6.1-sipolβ1(抑制程度56%);与无关siRNA对照组、空载体对照组和空白对照组相比,转染pRNAT-U6.1-sipolβ1组细胞的S期比例及细胞增殖速度明显下降,而转染pRNAT-U6.1-sipolβ2组细胞的S期比例以及细胞增殖则明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:DNA pol β高表达和近乎完全抑制的超低水平表达都不利于维持细胞的生理状态;BGC-823细胞中pol β表达通过siRNA沉默到合适的低水平,对肿瘤的生长可以起到抑制作用.     

RNA干扰人胃癌BGC-823细胞中DNA聚合酶β基因表达的初步研究

目的 研究RNA干扰DNA聚合酶β(polβ)基因对人胃癌BGC-823细胞生物学行为的影响.方法 针对DNA polβ基因序列构建小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,用脂质体介导转染人胃癌BGC-823细胞,G418筛选出稳定细胞株;采用荧光定量PCR和Western blot测定各组细胞的DNA polB mRNA和蛋白表达水平;用流式细胞术和裸鼠体内成瘤检测各组细胞的增殖情况.结果 成功构建了针对polβ基因的siRNA表达载体.转染pol β靶向siRNA的BGC-823细胞,其polβmRNA和蛋白表达水平均明显降低,且载体pRNAT-U6.l-sipoβ2(抑制程度83%)的沉默抑制作用强于载体pRNAT-U6.l-sipolβl(抑制程度56%);与无关siRNA对照组、空载体对照组和空白对照组相比,转染pRNAT-U6.1-sipellM的细胞G0/G1期比例显著升高,S期比例及细胞增殖速度显著下降(P<0.05);转染pRNAT-U6.l-sipolβ2的细胞C0/C1期比例显著降低,S期比例及细胞增殖率显著升高(P<0.05).结论 靶向DNA polβ的siRNA可以显著抑制polβ的表达;polβ的高表达和近乎完全抑制的超低水平表达都不利于维持细胞的生理状态;通过siRNA将BGC-823细胞中polβ表达沉默到合适的低水平,可能对肿瘤的生长起到抑制作用.