梅毒螺旋体Tp0751黏附蛋白的表达、纯化及免疫活性研究

目的 表达梅毒螺旋体黏附蛋白Tp0751,纯化表达产物并进行免疫活性分析,为探索Tp0751重组蛋白在梅毒致病过程中的作用奠定基础.方法 通过生物信息学分析,去除Tp0751信号肽序列,构建原核表达体进行诱导表达;Ni亲和层析柱纯化重组蛋白,Western blot检测其免疫反应性,用重组蛋白免疫新西兰家兔,评价其免疫原性.结果 成功构建了pET-28a(+)-0751原核表达载体,经表达、纯化后获得了相对分子质量约为26×103的融合蛋白;Western blot检测其能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应;利用纯化的Tp0751重组蛋白免疫新西兰家兔,能诱导家兔产生特异性免疫应答,ELISA法测定免疫血清中特异性抗体滴度在1∶10 240以上.结论 重组表达的Tp0751黏附蛋白具有良好的免疫活性,为进一步研究其在梅毒致病过程中的作用和生物学功能奠定了基础.     

股骨近端抗旋转髓内钉治疗骨质疏松性股骨粗隆间骨折疗效观察

目的观察使用股骨近端抗旋转髓内钉(PFNA)对骨质疏松性股骨粗隆间骨折进行内固定的疗效。方法2010年10月—2011年6月我院对确诊骨质疏松症的52例股骨粗隆间骨折患者使用PFNA进行治疗,术后用抗骨质疏松治疗。结果 52例均获得随访,时间6～14个月,平均10.3个月,骨折均骨性愈合,平均末次随访髋关节Harris评分90.2分。结论使用PFNA治疗骨质疏松性股骨粗隆间骨折能获得良好的固定,患者术后能早期进行肢体活动,尽快恢复功能,减少并发症的发生。     

耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的药物敏感性与耐药机制研究

目的 研究耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的药物敏感性及铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药机制,为指导临床用药提供试验依据.方法 应用琼脂稀释法检测耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的药物敏感性,采用重复序列聚合酶链反应进行菌株同源性分析;应用纸片增敏协同试验筛选产金属酶的菌株,设计外排泵抑制试验对耐药菌株的外排泵进行检测.结果 耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的耐药率以环丙沙星、多黏菌素E较低;同源性研究结果显示,共有8个型别;75株碳青霉烯类耐药株中,13株为金属酶阳性;外排泵抑制剂可以使34株美罗培南耐药株的MIC值较单药时降低≥4倍.结论 该院分离的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌以A、B型为主;严重感染患者可以考虑使用环丙沙星等抗菌药物;产金属酶和外排泵等耐药外排系统可能是导致铜绿假单胞菌对碳青霉烯类耐药的主要原因.     

IDO启动序列GAS和ISRE荧光素酶报告基因载体构建及其活性检测

目的构建pGL3-Enhancer-ISRE4和pGL3-Enhancer-GAS两个荧光素酶报告基因载体,并对其进行生物活性鉴定。方法通过人工合成调控吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）表达的启动序列ISRE4（4个串联的ISRE序列）和GAS7（7个串联的GAS序列）,与pGL3-Enhancer连接成重组体pGL3-Enhancer-ISRE4和pGL3-Enhancer-GAS7,通过转化扩增,筛选出阳性克隆,并通过酶切、测序及生物学活性检测鉴定构建好的荧光素酶报告基因载体。结果成功地构建了pGL3-Enhancer-ISRE4和pGL3-Enhancer-GAS7两个荧光素酶报告基因载体,在IFN-γ的诱导下,能启动细胞内荧光素酶的表达。结论 pGL3-Enhancer-ISRE4和pGL3-Enhancer-GAS7的荧光素酶报告基因载体的成功构建为研究IDO蛋白的表达调控机制和以IDO为靶标的抗肿瘤免疫耐受药物快速高通量的筛选提供了重要的研究工具。     

梅毒螺旋体Tp0821基因的克隆、表达、纯化及免疫活性研究

目的 构建梅毒螺旋体(Tp)膜脂蛋白Tp0821的重组质粒,表达、纯化其相应蛋白,研究其免疫活性.方法 构建重组质粒pQE32/Tp082l,诱导表达其相应蛋白,以纯化的重组蛋白免疫新西兰兔,制备多克隆抗体并测定其效价.建立间接ELISA法,检测80份梅毒参比血清、临床经FTA-ABS确诊的阳性血清各150份.结果 成功构建重组质粒pQE32/Tp0821,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白分子量与预期结果相符.将亲和层析后所获高纯度重组蛋白免疫新西兰兔,制备的多克隆抗体效价达1:6400.间接ELISA法检测梅毒参比血清、临床梅毒患者血清,与间接免疫荧光螺旋体抗体吸附试验(FTA-ABS)法比较,其灵敏度、特异度分别为92.6%和98.6%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 Tp0821重组蛋白具有较好的免疫活性,可用于梅毒血清学检测.     

2010年～2011年衡阳地区泌尿系感染病原菌调查和药敏谱分析

目的探讨衡阳地区泌尿系感染病原菌的分布及其对抗菌药物的耐药性,以指导临床合理用药。方法对2010年1月～2011年12月两年间泌尿系感染的中段尿进行细菌培养、分离鉴定,并进行药敏试验。结果共有尿培养5 013例,检出1 505株病原菌,检出率为30.0%。尿路感染中最常见的病原菌是大肠埃希氏菌,占52.1%,其次是肠球菌属,占11.5%,真菌占10.3%;泌尿系感染病原菌革兰阴性杆菌对亚胺培南、美罗培南较为敏感,葡萄球菌和肠球菌属对万古霉素、呋喃妥因较为敏感,其它菌株对常用抗菌药物均产生了一定的耐药性。结论泌尿系感染病原菌的耐药严重,临床应尽早进行细菌培养和药敏试验,合理选择抗菌药物。     

下呼吸道感染病原菌分布及耐药性监测

目的了解医院下呼吸道感染患者的病原学特点及病原菌耐药情况,为临床合理用药提供依据。方法回顾性分析2009年1月—2010年12月本院住院呼吸道感染患者痰培养结果。结果 4380例痰培养标本中检出1326株致病菌,阳性率为30.3%,其中G-菌占76.9%、G+菌占11.1%、真菌占12.0%。耐药性分析:革兰氏阴性杆菌对阿米卡星、头孢他啶、美洛培南耐药率较低。革兰氏阳性球菌对万古霉素、米诺环素、替考拉宁耐药率较低。结论下呼吸道感染的病原菌仍以G-为主,但多药耐药的细菌及真菌的分离率呈上升趋势。在治疗时应依据药敏试验结果合理使用抗生素,以减少耐药菌株的产生。     

白介素2与梅毒螺旋体膜蛋白Gpd双价核酸疫苗的免疫活性及保护作用研究

目的 探讨白介素2(IL-2)基因与梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)Gpd抗原编码基因融合构建双价核酸疫苗免疫新西兰兔后的免疫应答效果及感染Tp后的保护作用.方法 定向克隆构建真核表达重组体pcDNA3.1(+)/Gpd-IL-2,与先期构建的pcDNA3.1(+)/Gpd真核表达重组体分别设为两个疫苗实验组,同时设pcDNA3.1(+)空质粒对照组及PBS对照组,共4组,每组18只雄性新西兰兔,肌肉多点注射初次免疫,于初次免疫后第10周各实验组兔皮下接种Tp标准株进行感染实验,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测不同时间点免疫兔特异性抗体产生水平和脾细胞IL-2及干扰素γ(IFN-γ)诱导水平,噻唑蓝法检测兔脾淋巴细胞增殖水平.结果 用pcDNA3.1(+)/Gpd-IL-2融合双价疫苗和pcDNA3.1(+)/Gpd单基因疫苗在免疫期间和感染期间均能检测到高滴度的IgG特异性抗体,最高滴度分别可达1∶4096和1∶1024(P值均＜0.01);两疫苗组之间在免疫及感染期间不同时间点比较差异也有统计学意义(P值均＜ 0.01);免疫后第8周双价融合核酸疫苗组及单基因核酸疫苗组兔脾细胞培养上清中IFN-γ分别为(447±22.4)μg/L、(225±17.6)μg/L,IL-2分别为(167±15.7)μg/L、(110±12.6)μg/L,均高于空质粒对照组和空白对照组(P值均＜ 0.01);感染期间不同时间点兔脾细胞受相应蛋白刺激均有明显增殖反应,检测指标均显著高于空质粒对照组和空白对照组(P值均＜ 0.01).早期感染皮损观察显示双价融合核酸疫苗组较之单基因疫苗组有着更低的皮损Tp检测阳性率(17.5％)、溃疡病灶发生率(15％)以及更短的皮损愈合时间.结论 用pcDNA3.1(+)/Gpd-IL-2双基因融合疫苗在兔体内能更有效地诱导保护性体液免疫和细胞免疫应答.     

emeA基因的存在及表达与肠球菌属耐药的相关性研究

目的 研究肠球菌属临床株emeA基因的存在和表达与肠球菌属耐药的相关性.方法 用聚合酶链反应(PCR)法检测基因emeA在肠球菌属临床株中的分布,用RT-PCR法测定emeA基因阳性菌株中,emeA mRNA的表达水平;用琼脂稀释法检测5种抗菌药物,对肠球菌属的最低抑菌浓度(MIC).结果 112株肠球菌属中,emeA基因的阳性率为50.9％;左氧氟沙星、氨苄西林、庆大霉素和红霉素耐药的肠球菌属中emeA基因的阳性率分别为76.0％、58.3％、85.7％、55.7％;敏感株中分别为30.6％、50.0％、23.8％、33.3％;肠球菌属多药耐药组和单一耐药组emeA基因,与内参灰度比值的平均值分别为1.485和1.099,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 emeA基因的存在情况与肠球菌属对左氧氟沙星、庆大霉素和红霉素耐药有显著相关性,对氨苄西林耐药无明显相关性;多药耐药组的emeA基因mRNA表达水平显著高于单一耐药组.     

miR-145在原位结肠癌癌组织和癌旁组织中的表达研究

目的探讨miR-145在原位结肠癌癌组织和癌旁组织中的表达差异。方法利用miRNA表达谱芯片技术检测未发生转移原位结肠癌癌组织和癌旁组织标本中miR-145表达水平的差异,并运用Real-time PCR验证其结果。结果 miRNA表达芯片分析发现miR-145在结肠癌组织中表达显著下调（下调2.5倍）,并被Real-time PCR所证实。结论 miR-145在结肠癌组织中表达下调,可作为供研究的潜在结肠癌分子标记物。