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目的 建立真核表达重组体pcDNA-BLC的稳定转染细胞株,为研究趋化因子BLC的抗肿瘤免疫作用机制奠定基础。方法 以小鼠脾脏组织总RNA为模板,通过RT-PCR扩增BLC全长cDNA,并将扩增的cDNA片段插入pcDNA3.1( )真核表达质粒,构建重组质粒pcDNA-BLC,重组子经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染技术导入Colon26细胞,经G418筛选建立稳定转染细胞株。用免疫印迹法(Western Blot)鉴定转染细胞表达的蛋白质,证实BLC存在。用趋化实验证实转染细胞株表达的BLC有生物学活性。结果 真核表达重组体pcDNA-BLC构建成功,pcDNA-BLC稳定转染细胞株表达有生物学活性的BLC。结论 成功建立了BLC的稳定转染细胞株,为研究BLC的抗肿瘤免疫作用机制继而发展肿瘤疫苗奠定了基础。 相似文献
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局部晚期食管癌不可切除率及根治术后复发率较高。新辅助放化疗联合手术切除是最常见的食管癌多学科综合治疗方法之一,具有以下优点:减少肿瘤负荷,降低肿瘤分期,提高R0切除率;控制微转移,提高肿瘤局部控制率,改善预后。传统开胸手术通常伴随较高的并发症发生率和死亡率,影响术后生活质量;而胸腔镜辅助微创手术可有效减少手术创伤,加快术后恢复,且具有与开胸手术相似的远期疗效。现介绍1例经天津医科大学肿瘤医院食管肿瘤科治疗的进展期食管癌新辅助放化疗结合胸腔镜微创手术治疗的病例,该患者经多学科协作诊疗后效果较好。通过报道该病例诊治以促进食管癌新辅助治疗及微创外科经验交流,推动多学科间的合作。 相似文献
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目的:构建趋化因子CCL21的真核表达载体并表达蛋白,初步检测其趋化活性.方法:RT-PCR方法扩增CCL21 cDNA片段,并将扩增的片段插入pcDNA3.1真核表达载体,构建重组载体pcDNA3.1-mCCL21,将其转染到小鼠前胃癌细胞(mouse forestomach carcinoma,MFC).利用趋化小室法,检测表达产物针对树突状细胞(DC)趋化活性.结果:基因测序结果证实克隆产物为CCL21基因scya21b型,pcDNA3.1-mCCL21载体构建成功,Western印迹法检测到CCL21蛋白表达,转基因细胞的培养上清对树突状细胞具有显著趋化活性.结论:成功构建真核表达载体pcDNA3.1-mCCL21,其表达产物具有针对DC的趋化活性. 相似文献
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刀豆素蛋白A诱导小鼠肝纤维化模型的建立 总被引:13,自引:2,他引:11
目的 建立小鼠的肝纤维化模型。方法 2 0只Balb c小鼠随机分 2组。实验组 (E组 )小鼠经尾静脉注射12 .5mg kg剂量的 1mol L刀豆素蛋白A(ConA) ,每周 1次 ,连续 6周 ;而对照组 (N组 )正常小鼠则相应地经尾静脉注射 2 5 0 μLPBS。每次注射ConA或PBS 2 4h后 ,经小鼠尾静脉取血检测ALT和AST。第 6次注射ConA一周后处死小鼠 ,取肝组织做HE染色及MassonTrichrome染色 ,显微镜下观察肝脏组织形态改变及胶原沉积情况。结果 与对照组比较 ,实验组小鼠的ALT和AST均明显升高 ,肝体积明显增大 ,表面不光滑 ,布满增生小结节。光镜下见肝组织结构紊乱 ,肝细胞坏死明显 ,有较多的淋巴细胞浸润。MassonTrichrome染色胶原明显增多。结论 反复静脉注射ConA可成功诱导建立小鼠肝纤维化模型。 相似文献
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目的:本研究旨在探讨化疗对胃癌SPARC (secreted protein,acidic and rich in cysteine)表型的影响。方法:免疫组织化学方法检测132 例胃癌组织中SPARC 的表达情况。132 例胃癌组织中,54例取自新辅助化疗后手术胃癌患者,78例取自无新辅助化疗手术的胃癌患者,以免疫组织化学方法检测各例组织标本中SPARC 的表达,分析化疗对SPARC 表型影响。结果:较正常胃组织及肿瘤细胞周围的间质组织,SPARC 在胃癌细胞中高表达;SPARC 高表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移和TNM 分期相关。新辅助化疗组的SPARC 高表达比例较无新辅助化疗的对照组低(P < 0.05)。 单因素分析表明大体类型、组织学类型、浸润深度、淋巴结转移、TNM 分期、新辅助化疗后SPARC 表型表达为新辅助化疗后手术组胃癌患者的预后影响因子;多因素分析表明淋巴结转移、组织学类型、新辅助化疗后SPARC 表型表达为独立的预后影响因子。结论:SPARC 表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM 分期及胃癌患者预后相关;新辅助化疗可改变胃癌SPARC 表型。 相似文献
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目的:探讨CCL21-exCD40L融合基因的抗肿瘤作用。 方法:构建CCL21-exCD40L真核表达载体,Western blot法检测CCL21-exCD40L融合蛋白的表达,Transwell法检测CCL21-exCD40L融合基因趋化活性,体外转染CCL21-exCD40L融合基因,观察其在小鼠结肠癌肿瘤模型中的抗肿瘤作用。 结果:成功构建真核表达载体pcDNA3.1+/CCL21-exCD40L,Transwell法验证融合蛋白对树突细胞具有较强趋化功能,其每高倍镜视野穿膜细胞数是空载体对照组的14.95倍。将融合基因原位转染肿瘤局部,荷瘤小鼠全部存活,肿瘤体积缩小。 结论:CCL21-exCD40L融合基因能通过真核细胞正常表达,CCL21-exCD40L融合蛋白能够趋化树突细胞,在体内发挥抗肿瘤作用。 相似文献