不同组织来源临床肿瘤主要细胞周期素表达类型的研究

目的观察人类主要细胞周期素（Cyclin D1、E、A、B1）在临床肿瘤细胞中表达特征并进行分类，探讨其对临床肿瘤分类的可行性及潜在意义。方法用流式细胞术（FCM）双参数法半定量检测161例恶性肿瘤手术切除标本细胞中Cyclin D1、E、A、B1表达，根据不同Cyclin在细胞周期中的作用及其异常表达特征，将肿瘤细胞主要Cyclin表达分为不同类型。结果细胞周期外Cyclin（D1）及周期内Cyclins（E、A、B1）在临床肿瘤细胞中表达无组织差异性（P〉0．05）。其异常表达大致可归为5种类型：Ⅰ型Cyclin（D1、E、A、B1）均高表达；Ⅱ型Cyclin D1低表达，Cyclin（E、A、B1）不同形式高表达；Ⅲ型Cyclin D1不表达，Cyclin（E、A、B1）不同形式高表达；Ⅳ型Cyclin D1不表达，Cyclin（E、A、B1）不同形式低表达；V型Cyclin（D1、E、A、B1）均不表达；再根据各型中不同周期内Cyclin的优势表达分为相应不同的亚型。a亚型：Cyclin（E、B1）表达为主；b亚型：CyclinE表达为主；c亚型：Cyclin B1表达为主；d亚型：Cyclin（E、A、B1）表达为主。肿瘤细胞主要Cyclin表达类型及相应亚型分布无组织来源的差异性（P〉0．05）。结论主要Cyclins表达类型可以作为不同组织来源肿瘤分类的依据，可能是体现不同肿瘤细胞周期破坏共同特征较为客观分类方法。     

胫骨平台骨折非解剖复位对膝关节功能影响的研究

目的分析随访病例关节移位的类型、部位、程度对膝关节功能的影响,探讨影响胫骨平台骨折治疗效果的关键因素。方法对1991年6月～2004年6月间在我院治疗的不同类型胫骨平台骨折进行回顾性分析,对有良好随访的29例未达解剖复位或术后出现复位丢失的病例的X线片进行分析,并进行膝关节功能评分。结果随访6个月～13年,平均3.5年,膝关节功能参照Rasmussen评分法,优11例,良13例,可4例,差1例,优良率达82.75%。结论胫骨平台骨折获得良好治疗效果首先要恢复膝关节的稳定性,其次要恢复膝关节良好的力线,再者要在保护膝关节周围软组织情况下恢复关节面的解剖复位,并要有完善、合理的康复计划。     

一种新的双向电泳蛋白样品制备方法

目的探讨双向凝胶电泳（2-DE）样品裂解液对蛋白质分离和双向凝胶电泳结果的影响。方法以MOLT-4细胞为例，采用3种溶解性能不同的裂解液提取细胞中的蛋白质组，并分别进行双向聚丙烯酰胺凝胶电泳。结果通过对2-DPAGE图谱的比较分析，发现采用8mol／L Urea，2mol／L Thiourea，4％CHAPS，1％NP-40.4％Triton X-100，65mmol／LDTT，0．5mmol／LPMSF，0．5％pharmalyte3-10，能获得质量较高的2-DE图谱。结论采用高浓度脲、三去污裂解液有利于获得优质的蛋白质样品，从而提高蛋白质提取率和双向电泳分辨率等。     

人髓核间充质干细胞的分离提纯方式及生物学活性鉴定

目的 :探索人髓核间充质干细胞(nucleus pulposus mesenchymal stem cells,NPMSCs)的提纯方法并鉴定其生物学活性。方法:收集3例腰椎间盘突出症患者的退变髓核组织(Pfirrmann分级均为Ⅳ级),利用酶消化法分离细胞。采用两种方法分离提纯NPMSCs,一组细胞采用贴壁法培养(贴壁组),另一组通过流式细胞分选技术利用NPMSCs表面阳性标志物CD73、CD90、CD105获得NPMSCs(流式组)。将两种方法获得的NPMSCs进行体外培养扩增,分别进行形态学观察,细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit,CCK-8)检测增殖能力。贴壁组NPMSCs采用流式细胞分选仪在进行分选之前检测免疫表型,流式组NPMSCs在生长达80%~90%融合时进行免疫表型的检测。向成骨、成脂、成软骨诱导分化,诱导28d后分别进行茜素红染色观察其成骨能力、油红O染色观察其成脂能力、甲苯胺蓝染色观察其成软骨能力,利用Imag J软件计算染色区域所占的面积百分比。比较两组NPMSCs在形态学、免疫表型及增殖和分化能力的差异。结果:形态学观察发现,两组NPMSCs均呈漩涡状生长,贴壁组NPMSCs可见散在的单个细胞生长;流式组NPMSCs长梭形形态更长,排列更加紧密,少见散在的单个贴壁生长细胞。流式细胞分选后所得的NPMSCs占细胞总数的(89.67±2.52)%,可以进行体外培养扩增,细胞为典型的长梭形特征,漩涡状生长,在接种后12~15d达80%~90%融合,增殖能力在接种后5~13d明显高于贴壁组NPMSCs(P0.05)。流式组NPMSCs的CD73、CD90、CD105的表达率明显高于贴壁组NPMSCs(P0.05),并且低表达CD34、CD45及HLA-DR。两种方法获得的NPMSCs均能完成三系诱导分化,流式组成骨、成脂、成软骨染色区域百分比均明显高于贴壁组(P0.05)。结论:利用流式细胞分选技术从人退变髓核组织中可获得较高纯度的NPMSCs,并能进行后续培养扩增。与贴壁法获得的NPMSCs相比,流式细胞分选的NPMSCs具有更强的增殖与分化能力。     

组织工程化同种异体椎间盘移植的动物实验研究

目的观察组织工程技术的运用能否延缓椎间盘移植后的退行性改变。方法将髓中受细胞复合至同种异体椎间盘,体外培养后植入犬L4／k椎间隙作为实验组（A组）,对照组（B组）行同种异体椎间髓移植。使用影像学、生物力学及组织学分析评估植入椎间盘的转归并行组间比较。结果移植椎间盘可与宿主椎体实现骨性融合。对照组椎间盘术后退变明显,12周时其椎间盘高度及髓核信号比灰度值明显低于实验组,稳定性丧失明显;组织学观察发现实验组移植椎间盘结构保持较好,髓核细胞数量较多,排列规则;对照组髓核形态保持欠佳,结构紊乱,髓核细胞数量减少,退行性改变明显。结论通过复合种子细胞实现异体椎间盘的组织工程化可有效延缓椎间盘移植后的退行性改变。     

肝癌介入治疗后肝细胞凋亡和再生的研究

目的　研究肝癌介入治疗后 ,周围正常肝脏细胞是否存在肝细胞凋亡及再生及其特点。方法　VX2肝癌动物模型兔 50只 ,分别行肝叶切除术 (PH)与经动脉化疗栓塞术 (TACE) ,流式细胞术检测术后 2 4、72h的周围正常肝细胞周期 ,测定S期细胞比率 (SPF) ,增殖指数 (PI)的变化并测定是否有肝细胞凋亡。结果　TACE术后 2 4hSPF、PI较对照组均明显升高 (P <0 .0 0 1 ) ,并且术后第 1天 ,TACE术后肝细胞增殖弱于肝叶切除术 ,各项指标差异有显著性 (P <0 .0 5) ,术后 72h ,两组出现较小的亚二倍体峰 (Sub G1 ) ,较对照组有所升高 (P <0 .0 5) ,但它们之间差异无显著性 (P >0 .0 5)。结论　TACE术后肝组织存在一定程度的再生和肝细胞凋亡 ,这可能与碘油的选择性栓塞 ,化疗药物的诱导和自由基的损伤有关     

改善成骨微环境促进间充质干细胞成骨分化研究进展

间充质干细胞(MSC)具有多向分化潜能,适宜的成骨微环境可促进MSC的成骨分化。因此,改善成骨微环境,促进MSC成骨分化在骨组织工程及再生医学领域拥有广阔的应用前景。该文主要从调节细胞因子及支架支持从而改善细胞外基质(ECM),调节血管生成因子、基因重组细胞移植及人工支架预血管化从而改善局部血液循环,改善MSC与其他细胞间的相互作用3个方面对改善成骨微环境促进MSC成骨分化的研究进展进行综述。     

K562和SiHA细胞株经γ-射线照射后细胞周期阻滞与ATM表达量的关系研究

共济失调毛细血管扩张症（ataxia telangiectasis,A-T）是由ATM（ataxia telangiectasis mutant）基因突变所致,其突出特点是对放射线敏感.为探讨K562和SiHA两种肿瘤细胞株ATM表达量与γ-射线照射后细胞周期阻滞即自我保护功能之间的关系,应用半定量RT-PCR测量它们的ATM mRNA表达,同时以6、10和15 Gy 60Co γ射线分别照射细胞,并于照射后6、12、24、48及60小时观察细胞周期阻滞现象和凋亡率的变化.结果显示,K562细胞株ATM RNA相对表达量为0.04,而在SiHA细胞株为0.80,SiHA的ATM RNA表达量约为K562的20倍.结论：照射后K562和SiHA细胞株均表现G2/M期阻滞,K562细胞周期阻滞即自我保护机制明显比SiHA差.     

我院开展药物咨询工作的实践与意义

目的:推动医院药学服务工作开展,促进临床合理用药。方法:收集和整理我院2003年7月-2011年6月共4335例药物咨询记录,从药物咨询人群、内容等方面进行统计,并分析药物咨询工作开展的意义。结果与结论:患者及其家属是药物咨询的主要群体,咨询内容以药物的使用最为常见,共1575例(59.59%);其次为药物使用注意事项共334例(12.64%)。药物咨询工作的开展可达到促进医-药、药-护、药-患的交流,提高药师学习相关知识的积极性,收集药品不良反应,宣传科学用药的目的。     

慢性阻塞性肺疾病急性加重1例药学监护

目的探讨药学监护对慢性阻塞性肺疾病急性加重期治疗的临床价值,提出合理用药建议,提高药学服务质量。方法针对具体病例,结合全程诊疗用药和患者个体特点,重点关注抗菌药物、祛痰镇咳平喘药物、糖皮质激素和循环系统等药物的使用情况,拟定药学监护的具体方案。结果通过个体化治疗及药学监护,患者各项生理指标均得到明显改善,有效提高了患者的生活质量。结论临床药师必须深入临床,积极参与诊疗的全过程,这是提升专业技能和提高药学服务质量的必由之路。