支原体感染与儿童哮喘相关性认识进展

肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae,MP）肺炎是学龄儿童常见的一种肺炎,MP感染是诱发哮喘急性发作的重要因素,有研究指出,MP感染经常会加重哮喘,MP是仅次于病毒而被认为与哮喘急性发作或长期难以缓解以及哮喘恶化有关的病原,但是MP是否能引起哮喘首次发作的病因尚不确切。近年来探讨哮喘的发病与支原体感染之间的关系越来越受到重视,现就此做一综述。     

基于共享系统研究血小板聚集率对针刺治疗中风偏瘫疗效的影响

目的基于中医药临床科研信息共享系统采集的临床病例资料,探讨血小板聚集率水平对中风偏瘫患者针刺疗效的影响。方法依据入院时第一次血小板聚集率将患者分为血小板聚集率降低组、血小板聚集率正常组和血小板聚集率升高组,观察3组患者入院第一天、第一周、第二周的卒中患者运动功能评估量表(motor assessment scale,MAS)、美国国立卫生研究院卒中量表(national institutes of health stroke scale,NIHSS)、日常生活能力评定量表(barthel index,BI)评分。结果采用重复测量方差分析三组针刺治疗前后MAS、NIHSS、BI量表评分变化,各组均较治疗前有所改善,差异有统计学意义(P<0.05)。非参数检验对各组治疗前后量表评分差值进行分析,结果显示血小板聚集率正常组的运动功能和神经功能改善均优于其他两组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血小板聚集率正常有利于提高针刺疗效。     

小鼠MafB基因重组腺病毒载体的构建及其对破骨细胞分化的影响

目的: 构建小鼠肌腱膜纤维肉瘤癌基因B型(MafB)基因重组腺病毒表达载体,阐明MafB对小鼠破骨细胞分化的影响。方法: 提取小鼠RAW264.7细胞总RNA,逆转录为cDNA,以cDNA为模板PCR获得目的基因MafB,连接入穿梭质粒pAdTrack-CMV,经酶切鉴定正确的穿梭质粒用PmeⅠ线性化后转化到含pAdEasy-1 的大肠杆菌BJ5183菌株中,经PacⅠ线性化后,在HEK 293细胞中包装腺病毒 Ad-MafB,感染小鼠RAW264.7细胞,实验分为空白对照组、空载体组(Ad-GFP组)和过表达组(Ad-MafB组),经RT-PCR和Western blotting法检测MafB的表达水平,经抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、RT-PCR和Western blotting法观察MafB对小鼠可溶性核因子κB受体活化因子配体诱导的破骨细胞分化的影响。结果: 与空白对照组和Ad-GFP组比较,Ad-MafB组RAW264.7细胞MafB mRNA表达水平明显升高且蛋白相对表达水平明显增加(P<0.05);TRAP染色,Ad-MafB组TRAP阳性细胞明显少于空白对照组和Ad-GFP组;与空白对照组和Ad-GFP组比较,Ad-MafB组TRAP和组织蛋白酶K(CTSK) mRNA表达降低且蛋白相对表达水平显著降低(P<0.05)。结论: 成功构建可在小鼠RAW264.7细胞中过表达MafB的重组腺病毒Ad-MafB,证实MafB可抑制破骨细胞的分化。     

Hsp90抑制剂槚如酸对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的探讨热休克蛋白90 (Hsp90) 抑制剂槚如酸对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭、迁移的影响。方法采用体外
malachite green-molybdate 显色反应和ATP-琼脂糖凝胶结合实验检测槚如酸对Hsp90 抑制活性;MTT 法检测药物对
MDA-MB-231增殖抑制效应;Transwell小室法检测药物对细胞侵袭和迁移影响;免疫印迹法检测药物对相关蛋白基质金属蛋
白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）、Hsp90、热休克蛋白70（Hsp70）表达的影响。结果槚如酸为特异性
的Hsp90抑制剂,其抑制IC50值为82.5 μmol/L。MTT结果显示,槚如酸具有明显抑制细胞增殖的作用,且呈现浓度依赖关系,其
IC50值为29.3 μmol/L。不同浓度的槚如酸（12.5,25.0,50.0 μmol/L）处理36 h后,与对照组相比,药物对细胞侵袭抑制率分别为：
23.6%、56.6%、67.0%,P<0.05。槚如酸（12.5,25.0,50.0 μmol/L）处理24 h 后,与对照组相比,药物对细胞迁移抑制率分别为：
30.0%、45.5%、77.5%,P<0.05。免疫印迹法结果显示,槚如酸随着浓度的增加,诱导MMP-9降解越明显,而对Hsp90和Hsp70蛋
白表达均没有影响。结论槚如酸能明显抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力,其机制可能是通过抑制Hsp90 ATPase活性以
及导致下游的顾客蛋白的MMP-9表达下调有关。
     

2008-2013年南京市手足口病流行病学分析

摘要:目的　分析南京市2008-2013年手足口病的流行病学特征,为制定科学有效的防控策略提供依据。方法　运用描述性流行病学研究,对南京市2008-2013年手足口病疫情资料及病原学监测资料进行分析。结果　2008-2013年南京市共报告手足口病77452例,年平均发病率178.09/10万,其中重症患者939例,占病例总数的1.21%。发病数在时间的分布上呈现双峰模式,4-7月为全年主高峰,11-12月为全年次高峰。主城区、近郊和远郊的发病率不同（χ2＝3066.01,P＜0.001）,主城区发病率低于近郊和远郊。男性发病率高于女性发病率（χ2＝2019.23,P＜0.001）。0～5岁儿童发病数最多,占病例总数的92.92%。病例的职业分布以散居儿童最多,其次为幼托儿童,二者共占总病例数的95.75%。2008-2013年共报告诊断病例1673例,病原体以EV71和Cox A16感染为主。结论　南京市手足口病在时间、地区、性别、年龄以及职业分布上具有一定的特征,对于低年龄、男性儿童、散居儿童以及幼托儿童这类重点人群的防控应该着重关注。进一步深入开展流行病学和病原学研究,也将为手足口病的防治工作提供更加有力的依据。     

顺铂诱导直肠癌HCT116细胞凋亡及其作用机制的研究

目的 研究顺铂诱导直肠癌HCT116细胞凋亡及其作用机制.方法 采用酶联免疫吸附法M30-ApoptosisTM-ELISA-kits、流式细胞仪测定不同浓度顺铂作用不同时间HCT116细胞的凋亡情况;West-ern-Blotting测定p53、p21、Bcl-2蛋白水平的表达.结果 顺铂可抑制直肠癌HCT116细胞生长,并呈时效(F=1129.383,P=0.000)和量效(F=125.267,P=0.000)关系;2.5、5.0、10.0、15.0 μmol/L顺铂分别作用直肠癌HCT116细胞0、12、24、48、72 h,通过亚G1峰检测其凋亡率,顺铂作用24、48、72 h细胞凋亡率与对照组比较差异有统计学意义(χ2值分别为5.669、14.110、12.221,P值分别为0.010、0.003、0.000),不同时间顺铂抑制HCT116细胞生长率的差异有统计学意义(χ2=14.008,P=0.003);不同时间顺铂诱导HCT116细胞释放CK18-Asp237-Asp396含量的比较,不同药物浓度结果差异有统计学意义(F=48.667,P=0.000),同时间结果差异有统计学意义(F=1194.394,P=0.000),Western-Blotting结果提示顺铂作用直肠癌HCT116细胞后p53、p21蛋白水平表达随着12、24、48、72 h与0 h比较逐步升高,p53蛋白(t值分别为9.873、-2.906、7.229、2.776,P值分别为0.000、0.007、0.000、0.011);p21蛋白(t值分别为-10.692、-8.867、-15.063、-16.281,P值分别为0.000、0.001、0.000、0.000);Bcl-2蛋白的表达无变化(t值分别为1.429、2.011、2.247、2.001,P值分别为0.178、0.069、0.053、0.062).结论 顺铂通过恢复pS3的功能,诱导肿瘤细胞凋亡,起到抑制肿瘤生长的作用.     

血清淀粉酶及血清IgA检测在儿童腹型过敏性紫癜诊断中的价值

目的探讨血清淀粉酶及血清IgA和总IgE在腹型过敏性紫癜（又称腹型紫癜）中的诊断价值。方法检测52例腹型过敏性紫癜患儿和69例无腹型过敏性紫癜患儿入院时的血清淀粉酶、血清IgA和总IgE水平,并与47例急性腹痛（胃、肠炎）组患儿进行比较。结果腹型组血清淀粉酶含量平均值为180.3±15.8IU,明显高于非腹型组和急性腹痛组（F=32.214,P=0.009）;腹型组血清IgA增高病例占44.2%,与非腹型组无明显差异,但两组均高于急性腹痛组（χ^2=13.73,P=0.001）;腹型组总IgE增高病例占40.4%,三组差异无统计意义（χ^2=1.80,P=0.41）。结论血清淀粉酶增高结合血清IgA增高可作为以腹痛起病的儿童过敏性紫癜诊断的参考指标,而血清总IgE意义不大。     

地黄饮子对能量障碍致SH-SY5Y细胞内质网应激的保护作用

目的:以葡萄糖剥夺致能量代谢障碍SH-SY5Y细胞为模型,探讨地黄饮子药物血清通过调节蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase r-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)/真核细胞起始因子2α(eukaryotic initiation factor 2α,e IF2α)通路改善能量代谢障碍致SH-SY5Y细胞内质网应激的作用机制。方法:以成人临床用药量10倍剂量对SD大鼠灌胃给药,制备地黄饮子药物血清。SH-SY5Y细胞葡萄糖剥夺处理6 h后,分别以0,1.25%,2.5%,5%,10%地黄饮子含药血清孵育。噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PERK,e IF2α磷酸化水平,B淋巴细胞瘤-2(Bcell lymphoma-2,Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)表达水平。Annexin V/碘化丙啶(PI)双染流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:与模型组比较,地黄饮子药物血清能显著提高葡萄糖剥夺SH-SY5Y细胞的存活率(P0.01),明显减少PERK和e IF2α磷酸化激活(P0.05,P0.01),提高Bcl-2水平和降低Bax表达量(P0.05,P0.01)。抑制能量代谢障碍SH-SY5Y细胞凋亡率(P0.01)。结论:地黄饮子可以减少PERK/e IF2α通路的激活,抑制能量代谢障碍致内质网应激造成的细胞凋亡。     

地黄饮子对AD大鼠中枢神经线粒体结构及功能的保护作用

目的:以侧脑室注射β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)致痴呆大鼠为阿尔茨海默病(AD)模型,探讨地黄饮子对AD大鼠中枢神经线粒体结构功能损伤的保护机制。方法:120只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,阳性药(安理申,0.5 mg·kg~(-1))组,地黄饮子高、中、低剂量组(3,1.5,0.75 g·kg~(-1))。除假手术组外,其他大鼠均在左侧脑室注射老化的Aβ1-42建立AD大鼠模型。经灌胃给予地黄饮子30 d后,采用Morris水迷宫和跳台实验检测地黄饮子对AD大鼠学习记忆能力的影响,高效液相色谱法检测AD大鼠脑组织中三磷酸腺苷(ATP),二磷酸腺苷(ADP),单磷酸腺苷(AMP),磷酸肌酸(PCr),并计算能荷(EC)水平,光吸收法检测线粒体中丙酮酸脱氢酶(PDH)和α-酮戊二酸脱氢酶(KGDH)活性、线粒体肿胀度、膜电位等。结果:地黄饮子可以显著改善AD大鼠学习记忆能力,与模型组比较,地黄饮子升高大鼠脑组织ATP,ADP,PCr及EC水平(P0.05,P0.01),升高三羧酸循环关键酶PDH和KGDH活性(P0.05,P0.01),降低线粒体肿胀程度(P0.05,P0.01),升高线粒体膜电位(P0.05,P0.01)。结论:地黄饮子药能通过保护线粒体结构功能,改善能量代谢,提高AD大鼠学习记忆能力。     

地黄饮子调节PERK/elF2α通路抑制能量代谢障碍AD小鼠脑内β淀粉样蛋白累积的作用机制

目的:以能量代谢障碍淀粉样前体蛋白(APP)/早老素基因1(PS1)转基因小鼠为阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型,探讨地黄饮子通过调控蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase r-like endoplasmic reticulum kinase,PERK),真核细胞起始因子2α(eukaryotic initiation factor 2α,eI F2α)通路抑制内质网应激导致的β-淀粉样蛋白(Aβ)累积的作用机制。方法:4月龄APP/PS1转基因小鼠随机分为正常组、模型组、阳性药(安理申)组、地黄饮子低、中、高剂量组。除正常组小鼠腹腔注射无菌生理盐水外,其余各组小鼠均腹腔注射100 mg·kg-13-硝基丙酸(3-nitropropionic acid,3-NP) 1次。小鼠造模后,立即给药。灌胃给药1周后,Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,高效液相色谱法检测小鼠脑内三磷酸腺苷(ATP),二磷酸腺苷(ADP),一磷酸腺苷(AMP)含量,并计算脑能荷(energy charge,EC)。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠脑内PERK,eI F2α磷酸化水平,β-淀粉样前体蛋白水解酶1(BACE1)表达水平。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测BACE1 mRNA表达水平。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠脑内Aβ含量。结果:与正常组比较,Morris水迷宫实验结果显示,在定位巡航实验中,地黄饮子可以明显缩短模型小鼠的逃避潜伏期(P 0. 05,P 0. 01);空间探索实验中,地黄饮子可以增加模型小鼠穿越目标区域的次数(P 0. 05,P 0. 01)和在目标象限的停留时间(P 0. 01),减少相对象限的停留时间(P 0. 05,P 0. 01)。地黄饮子可以显著降低AMP水平,明显升高ATP,ADP水平,显著提高模型小鼠脑内EC水平(P 0. 05,P 0. 01),抑制PERK,eI F2α的磷酸化(P 0. 01)和BACE1的蛋白水平(P 0. 01),但对BACE1 mRNA转录没有显著影响。地黄饮子能够减少模型小鼠脑内Aβ的含量(P 0. 01)。结论:地黄饮子可以通过阻止能量代谢障碍导致的内质网应激通路PERK/eI F2α激活,抑制BACE1的翻译,从而减少能量代谢障碍APP/PS1小鼠脑内Aβ的累积。