吗啡依赖模型大鼠脑cDNA文库的构建

目的:构建吗啡依赖模型大鼠脑cDNA文库.方法:建立大鼠吗啡躯体依赖模型后,取鼠脑进行总RNA的抽提、mRNA的纯化,以mRNA为模板合成第一链cDNA后用LD-PCR方法合成双链cDNA,用限制性内切酶SfiⅠA、B分别双酶切双链cDNA与pTRG载体,连接后的cDNA文库转化XL1-Blue MRF′ Kan 超级感受态并收菌,完成cDNA文库构建.结果与结论:PCR结果显示,cDNA片段连接效率＞90%,cDNA插入片段在1 kb左右.吗啡依赖大鼠脑cDNA文库总容量为3.05×106,满足下一步细菌双杂交文库筛选要求.     

癌胚抗原真核表达质粒的构建

目的 癌胚抗原（CEA）是1种国际上公认的肿瘤标志物，是某些肿瘤诊断和治疗的靶分子，为了增强表达CEA的重组质粒对肿瘤的免疫防治效果，我们构建了1套表达CEA的真核表达质粒。方法 运用基因工程技术将编码人CEA全长2.4kb cDNA片段插入到表达载体pCI-neo中，用限制性内切酶法对其进行鉴定。结果 构建的重组质粒含有2.4kb CEA cDNA片段，且正向插入。结论 这为更好地研究CEA的重组质粒对CEA阳性肿瘤的免疫效应打下基础。     

医学发育生物学课程的构建与实践

发育生物学已成为一门迅猛发展的重要学科。其作为21世纪的前沿学科之一已得到广泛认同，医学发育生物学则是发育生物学在医学领域的一个分支，然而，在我国大多数医学院校既没有开设医学发育生物学专业课程，也缺乏合适的教材。最近，我校尝试开设了医学发育生物学课程，通过对发育生物学的发展简史、一些基本概念和理论知识的了解和认识，特别是结合人体早期胚胎发育的过程和机制、畸形的发生及其机制等，使学员对医学发育生物学有了一些基本的了解。为培养医学领域中跨学科跨层次、适应新世纪需求的高素质医学人才打下良好的基础。     

数字化校园构建之理论基础探讨

从总结数字化建设的实际出发,从建构主义教学理论、教育传播理论和管理科学理论三个方面,较为全面地论述了构建数字化校园的理论基础,并探讨了在数字化校园建设中如何应用理论来指导实际工作.     

分步克隆法构建人拓扑异构酶Ⅲalph真核反义表达载体及鉴定

目的 应用分步克隆法构建人拓扑异构酶Ⅲ alpha(hTOP 3 alpha)真核反义表达载体，为进一步阐明其与控制细胞周期的相关基因ATM之间的相互作用，研究ATM的生物学功能奠定基础。方法 采用分步克隆法首先用Hind Ⅲ和EcoRI双酶切构建插入2．6kb的片段，再用EcoRI酶切插入另一1kb的片段，最终获得人拓扑异构酶Ⅲ真核反义表达的重组载体。结果 经酶切、测序鉴定，人拓扑异构酶Ⅲ真核反义表达载体构建成功。结论 为研究ATM基因与人拓扑异构酶Ⅲ的相互作用，阐明其生物学功能奠定了基础，同时为大片段的基因的表达载体构建探索了新的方法和途径。     

膜表达热休克蛋白70真核表达载体的构建及其对肿瘤细胞的转染

目的构建普遍适合性的膜表达热休克蛋白70(HSP70)的真核表达载体,修饰并建立HSP 70表达并结合在细胞膜表面的肿瘤细胞.方法RT-PCR法从人胚肾中获取HSP 70的cDNA,扩增成带酶切位点的目的基因.选择载体pDisplay,将目的基因插入载体多克隆酶位点中.DNA测序证实后,以脂质体转染的方法,将载体转染到黑色素瘤细胞.用G418抗性筛选获得阳性克隆.结果酶切电泳和DNA测序证实载体构建正确;目的基因的上游带信号肽序列,下游带跨膜序列.RT-PCR产物电泳、Westem Blotting、激光共聚焦显微镜和流式细胞术证实大量HSP 70表达并结合在转染的黑色素瘤细胞膜表面.结论成功地构建了膜表达HSP 70的真核表达载体;转染到黑色素瘤细胞后,细胞膜表面表达丰富的HSP70.转染细胞可以进一步制备新型瘤苗.     

体外构建组织工程心脏瓣膜动物实验初步研究

目的探讨应用去细胞猪主动脉支架(decellularized porcine aortic valve scaffold，APAVS)与兔骨髓干细胞(rabbit bone marrow stromal cells，RBMSCs)体外构建组织工程心脏瓣膜的可行性。方法采用去垢剂-核酸酶消化法处理，去除猪主动脉瓣细胞成分，并做去细胞前后的形态学检查和生物力学测定；在去细胞支架上种植兔骨髓干细胞，行形态学检查和免疫组化测定。结果光镜及电镜证实，猪主动脉瓣膜中的细胞成分可完全去除，获得完整无细胞的纤维网状支架；瓣叶去细胞前后的断裂强度和断裂伸长率无明显变化；种植的RBMSCs可在ACPAV表面形成一层连续的细胞层。结论种植RBMSCs于ACPAV上，可体外构造组织工程人工心脏瓣膜。     

通用腺相关病毒载体构建及表达报告基因GFP的研究

目的　构建基因治疗通用型 AAV载体并检测它转导外源基因作用。方法　使用限制性内切酶切出p SSV9int-质粒中的 AAV病毒 Rep和 Cap基因元件后 ,插入了重组腺病毒专用穿梭质粒 -p ACCMVp L p A的含有CMV启动子、多克隆位点 (MCS)和多聚腺苷酸信号 (Poly A)的表达盒 ,构建了重组 AAV通用载体质粒 p SSHG-CMV。在该质粒 MCS插入 GFP基因后 ,我们使用 p SSHG-CMV-GFP、p GF14 0和 p AAV/Ad 3种质粒共转染 2 93包装细胞 ,制备 GFP重组 AAV,应用斑点杂交实验检测重组病毒滴度度 ,并将该病毒感染新生大鼠星形胶质细胞 ,荧光显微镜观察 GFP表达。结果　重组 AAV的滴度在浓缩前可达 2× 10 11,浓缩后可达 2× 10 13 ,表明成功的构建了重组 AAV载体 ,插入外源基因 GFP后 ,在包装病毒和辅助质粒的联合作用下 ,能产生具有感染性的重组AAV。感染了重组 GFP-AAV的大鼠星形胶质细胞表达了明显的 GFP荧光。结论　本文构建的重组 AAV通用载体 p SSHG-CMV,可转导外源基因 ,用于基因治疗的研究     

云南个旧肺鳞癌YTMLC细胞cDNA文库构建和鉴定(摘要)

目的：进一步分离人肺癌组织特异表达基因和肺癌特异相关基因，构建人肺鳞癌YTMLCC90细胞cDNA文库，方法：从培养的人肺鳞癌YTMLC90细胞株中提取总RNA，     

HCV 5′非编码区和核心区重组真核表达质粒的构建及其细胞内定位

目的 :构建丙型肝炎病毒 (HCV)重组真核表达载体 ,为HCV感染基因免疫和基因治疗的研究奠定基础。方法 :构建含HCV 5′非编码区 (NCR)及编码核心蛋白C区基因片段的重组真核表达质粒pBBS2 12 HCV ,通过脂质体介导转染入人肝癌细胞株HepG2中 ,应用RT PCR及免疫组织化学方法鉴定HCV核心蛋白的表达及其在细胞内的定位。结果 :重组真核表达质粒在HepG2细胞中有稳定表达 ,HCV核心蛋白以胞浆内表达为主。结论 :成功构建了含HCV 5′NCR和核心C区基因片段的真核表达载体 ,明确核心抗原的细胞内定位主要在细胞胞浆内。