脐带源间充质干细胞对异源性脐带血T淋巴细胞激活与增殖的抑制作用

目的：〖HT5"SS〗观察人脐带源间充质干细胞（hUCMSC）对异源性脐带血T淋巴细胞激活与增殖的影响,探讨其在免疫调控中的作用。〖HT5W〗方法： 〖HT5"SS〗建立分离、扩增hUCMSC的方法,检测其MHC表型;实验分3组：(1)单纯脐带血组（阴性组）;（2)脐带血+丝裂原刺激组（对照组）;（3）脐带血+丝裂原刺激 +MSC共培养组（实验组）;流式细胞术检测各组脐带血T细胞及其CD4＋和CD8＋亚型细胞共培养8 h后早期激活标志CD69的表达, MTT法检测各组脐带血T细胞共培养5 d后增殖情况。 〖HT5W〗结果： 〖HT5"SS〗成功建立分离、扩增hUCMSC的方法,免疫表型分析显示hUCMSC不表达HLAⅡ抗原,低表达HLAI抗原;流式细胞术检测示在hUCMSC共培养情况下,经丝裂原刺激后,脐带血T淋巴细胞CD69表达与对照组\[(22. 6±5.2)%\]的阳性率相比较,下降至(7.8±3.5)%（P<0.01）,而且这种抑制对不同亚型T细胞（CD4+/CD8+）均起作用;MTT检测显示在hUCMSC共培养条件下,丝裂原刺激T细胞增殖受到抑制,抑制的程度与hUCMSC的剂量呈依赖性。 〖HT5W〗结论： 〖HT5"SS〗hUCMSC对异源性脐带血T淋巴细胞激活和增殖具有抑制作用,而且这种作用为非选择性的,呈剂量依赖性。     

血小板第4因子对脐血CD34+细胞黏附功能的影响

目的研究血小板第4因子(PF4)对新鲜脐血CD34+细胞及扩增后脐血CD34+细胞黏附功能的影响;PF4对脐血CD34+细胞上的黏附分子CD49d及基质细胞趋化因子(SDF-1)受体CXCR4的作用.方法采用免疫磁珠法(MACS)分选CD34+细胞,结晶紫染色测定细胞总黏附性,免疫荧光标记流式细胞仪测定CD49d及CXCR4的表达.结果①PF4 可使新鲜脐血CD34+细胞总黏附性提高,且与剂量相关.②SDF-1 100 ng/ml可使脐血CD34+细胞总黏附性提高.③脐血CD34+细胞扩增10 d后未加PF4刺激的自发以及经SDF-1诱导的黏附功能开始下降,在扩增脐血CD34+细胞不同时间段加入100ng/ml PF4,脐血CD34+细胞对基质层的黏附能力始终保持较高水平,以0天时脐血CD34+细胞黏附性为100%,扩增14 d时脐血CD34+细胞黏附性PF4组为(262.04±64.81)%,同期对照组为(64.35±8.29)%,经SDF-1诱导下扩增14 d的CD34+细胞的总黏附性PF4组为(138.31±32.39)%,同期对照组为(67.66±12.44)%.④PF4 100 ng/ml作用于CD34+细胞时,CD49d表达增长13.02%,CXCR4表达增长17.33%.结论 PF4可使新鲜及扩增后的脐血CD34+细胞黏附功能增强,并促进CD49d及CXCR4的表达,提示PF4可能有助于脐血干细胞的归巢.     

脐血造血干细胞生物学特征与临床应用研究

本文综述了脐血造血干细胞(UCBSC)的生物学特性,具有不同于骨髓造血干细胞的表型特征,增殖潜能强,免疫系统相对不成熟,但存在T、NK前体细胞,可经细胞因子体外扩增产生免疫活性细胞。临床应用表明进行脐血造血干细胞移植(UCBSCT)后,造血植入的成功率稍低干骨髓移植(BMT),尤其血小板恢复慢,故大部分用于儿童患者,但是尽管进行HLA配型1～3个位点不合的UCBSCT,造血植入后发生移植物抗宿主病(GVHD)轻;UCBSC可经体外CD34~+细胞扩增或免疫细胞的定向扩增,从而提高其造血植入和移植物抗白血病作用(GVL),均已试用于临床取得成功。这些研究提示UCBSCT有广阔的临床应用价值和前景。     

造血干细胞移植技术及其应用

造血干细胞（ＨＳＣ）移植技术主要包括干细胞的鉴别，活性测定，干细胞的采集，分离纯化，动员，扩增，干细胞保存，肿瘤细胞的净化，干细胞改造以及干细胞操作专用仪器、材料和试剂的开发生产等。１ＨＳＣ特征ＨＳＣ在体内多数处于Ｇ０期或休眠期，而祖细胞则比较活跃，...     

血管内皮细胞生长因子的放射性碘标记以及生物活性测定

目的探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)放射性碘标记的方法。方法采用肝素亲和层析的方法,纯化125I-VEGF。通过SDS-PAGE进行同质性分析。利用VEGP能够与内皮细胞特异性结合的特点,鉴定其生物学活性。结果125I-VEGF的比活性为(1．6～1．9)×105cpm／ng。12％SDS-PAGE表明在未还原和还原状态下125I-VEGF在42ku和21ku处显示单一带。125I-VEGF与内皮细胞能够特异地结合,并能够被TSP抑制。结论肝素亲和层析的方法能够有效地纯化125I-VEGF,并且具有生物学活性。     

间充质干细胞通过诱导髓系来源CD11b~+Gr1~+细胞的抑制功能促进小鼠乳腺癌进展

目的探讨间充质干细胞(MSC)诱导骨髓来源的CD11b+Gr1+细胞免疫抑制功能对肿瘤的影响。方法将骨髓中CD11b+Gr1+细胞与MSC共培养后,通过流式细胞术测定CD11b+Gr1+细胞免疫表型,通过T细胞抑制性实验分析T细胞活化情况,采用小鼠4T1乳腺癌模型观察MSC通过CD11b+Gr1+细胞对肿瘤生长的影响。结果 MSC能够促进骨髓中CD11b+Gr1+细胞的存活和生成,同时可诱导正常小鼠骨髓中CD11b+Gr1+细胞对T细胞的抑制作用。动物实验结果显示,MSC处理后的骨髓CD11b+Gr1+细胞可以促进肿瘤的生长,加速小鼠的死亡。结论 MSC可以通过促进骨髓来源的CD11b+Gr1+细胞的抑制作用加速肿瘤的生长进程。     

人脐带间充质干细胞注射液的长期稳定性研究

近年来随着干细胞研究的快速发展,干细胞逐渐在医学领域得到广泛应用.为适应临床使用的需要,各种干细胞制品制剂诸如新鲜制剂、冻存制剂、凝胶剂、组织工程细胞装置相继被开发.美国、加拿大、韩国的一些干细胞药物相继完成临床前研究进入临床试验阶段,这些都标志着干细胞从实验室技术向着药物的方向发展.干细胞向药物转化过程中的药学研究是药物安全性和有效性的基础,参照药物研发技术规范进行干细胞药物制剂稳定性的研究是非常重要的一部分[1].     

TNF-α增强人脐带间充质干细胞条件培养基的体外造血支持功能

 目的：研究肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α, TNF-α）刺激后所得的脐带间充质干细胞条件培养基对脐血CD34+细胞在半固体培养基中集落形成个数及种类的影响。方法：将3~6代人脐带来源间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUC-MSCs）以2×106接种到75cm2培养瓶中,其中刺激组加入TNF-α（10 g/L）,48 h后收集上清作为条件培养基。Real-time PCR检测hUC-MSCs中各类造血因子mRNA的表达量。密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,磁珠分选CD34+细胞,流式细胞术检测细胞纯度后分5组接种到6孔板内：TNF-α刺激hUC-MSC上清+不完全甲基纤维素培养基;hUC-MSC上清+不完全甲基纤维素培养基;TNF-α+DMEM/F12完全培养基+不完全甲基纤维素培养基;完全甲基纤维素培养基;DMEM/F12完全培养基+不完全甲基纤维素培养基。10 d后显微镜下计数各类集落形成单位（colony-forming unit, CFU）的数目,收集集落形成细胞,流式细胞术检测其表型特征。结果：（1）TNF-α刺激后hUC-MSCs中粒细胞集落刺激因子（granulocyte colony-stimulating factor, G-CSF）和白细胞介素6（interleukin-6, IL-6）mRNA表达上调。（2）两种条件培养组均可见粒系CFU（granulocyte CFU, CFU-G）、巨噬系CFU（macrophage CFU, CFU-M）和粒巨噬系CFU（granulocyte-macrophage CFU, CFU-GM）,但TNF-α刺激组CFU-G和CFU-M的数目约为未刺激组的1.5倍,CFU-GM约为未刺激组的2倍;阳性对照组中除粒系、巨噬系集落外还可见红系集落;而DMEM/F12完全培养基加或不加TNF-α组10 d后均未见集落形成。（3）流式细胞术检测TNF-α刺激组与未刺激组集落细胞表型CD14、CD45和CD11b,未见明显差异。结论：hUC-MSC上清作为条件培养基可在体外促进CD34+细胞分化增殖为髓系细胞,具有造血支持作用,TNF-α刺激后此作用增强。     

不同类型干细胞移植治疗神经损伤的新进展

近年来细胞疗法已成为治疗各种疾病的新方法,本文就神经干细胞,骨髓基质干细胞和造血干细胞及胚胎干细胞移植在治疗神经损伤中的研究进展进行综述。     

血小板第4因子对脐血CD_(34)~+细胞黏附功能的影响

目的　研究血小板第 4因子 (PF4 )对新鲜脐血CD34+ 细胞及扩增后脐血CD34+ 细胞黏附功能的影响 ;PF4对脐血CD34+ 细胞上的黏附分子CD4 9d及基质细胞趋化因子 (SDF 1)受体CXCR4的作用。方法　采用免疫磁珠法 (MACS)分选CD34+ 细胞 ,结晶紫染色测定细胞总黏附性 ,免疫荧光标记流式细胞仪测定CD4 9d及CXCR4的表达。结果　①PF4可使新鲜脐血CD34 + 细胞总黏附性提高 ,且与剂量相关。②SDF 110 0ng ml可使脐血CD34+ 细胞总黏附性提高。③脐血CD34+ 细胞扩增 10d后未加PF4刺激的自发以及经SDF 1诱导的黏附功能开始下降 ,在扩增脐血CD34+ 细胞不同时间段加入 10 0ng mlPF4 ,脐血CD34 + 细胞对基质层的黏附能力始终保持较高水平 ,以 0天时脐血CD34 + 细胞黏附性为10 0 % ,扩增 14d时脐血CD34+ 细胞黏附性PF4组为 (2 6 2 .0 4± 6 4 .81) % ,同期对照组为 (6 4 .35±8 2 9) % ,经SDF 1诱导下扩增 14d的CD34+ 细胞的总黏附性PF4组为 (138.31± 32 .39) % ,同期对照组为 (6 7.6 6± 12 .4 4 ) %。④PF4 10 0ng ml作用于CD34 + 细胞时 ,CD4 9d 表达增长 13.0 2 % ,CXCR4表达增长17 33%。结论　PF4可使新鲜及扩增后的脐血CD34+ 细胞黏附功能增强 ,并促进CD4 9d及CXCR4的表达 ,提示PF4可能有助于脐血干细胞的归巢。