造血干细胞移植技术及其应用

造血干细胞（ＨＳＣ）移植技术主要包括干细胞的鉴别，活性测定，干细胞的采集，分离纯化，动员，扩增，干细胞保存，肿瘤细胞的净化，干细胞改造以及干细胞操作专用仪器、材料和试剂的开发生产等。１ＨＳＣ特征ＨＳＣ在体内多数处于Ｇ０期或休眠期，而祖细胞则比较活跃，...     

血管内皮细胞生长因子的放射性碘标记以及生物活性测定

目的探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)放射性碘标记的方法。方法采用肝素亲和层析的方法,纯化125I-VEGF。通过SDS-PAGE进行同质性分析。利用VEGP能够与内皮细胞特异性结合的特点,鉴定其生物学活性。结果125I-VEGF的比活性为(1．6～1．9)×105cpm／ng。12％SDS-PAGE表明在未还原和还原状态下125I-VEGF在42ku和21ku处显示单一带。125I-VEGF与内皮细胞能够特异地结合,并能够被TSP抑制。结论肝素亲和层析的方法能够有效地纯化125I-VEGF,并且具有生物学活性。     

脐带源间充质干细胞对异源性脐带血T淋巴细胞激活与增殖的抑制作用

目的：〖HT5"SS〗观察人脐带源间充质干细胞（hUCMSC）对异源性脐带血T淋巴细胞激活与增殖的影响,探讨其在免疫调控中的作用。〖HT5W〗方法： 〖HT5"SS〗建立分离、扩增hUCMSC的方法,检测其MHC表型;实验分3组：(1)单纯脐带血组（阴性组）;（2)脐带血+丝裂原刺激组（对照组）;（3）脐带血+丝裂原刺激 +MSC共培养组（实验组）;流式细胞术检测各组脐带血T细胞及其CD4＋和CD8＋亚型细胞共培养8 h后早期激活标志CD69的表达, MTT法检测各组脐带血T细胞共培养5 d后增殖情况。 〖HT5W〗结果： 〖HT5"SS〗成功建立分离、扩增hUCMSC的方法,免疫表型分析显示hUCMSC不表达HLAⅡ抗原,低表达HLAI抗原;流式细胞术检测示在hUCMSC共培养情况下,经丝裂原刺激后,脐带血T淋巴细胞CD69表达与对照组\[(22. 6±5.2)%\]的阳性率相比较,下降至(7.8±3.5)%（P<0.01）,而且这种抑制对不同亚型T细胞（CD4+/CD8+）均起作用;MTT检测显示在hUCMSC共培养条件下,丝裂原刺激T细胞增殖受到抑制,抑制的程度与hUCMSC的剂量呈依赖性。 〖HT5W〗结论： 〖HT5"SS〗hUCMSC对异源性脐带血T淋巴细胞激活和增殖具有抑制作用,而且这种作用为非选择性的,呈剂量依赖性。     

酶消化法分离脐带干细胞

目的 研究酶消化法从脐带组织中分离干细胞的可能性,为心血管组织工程研究提供一个新的种子细胞来源.方法 采用胶原酶胰酶消化新鲜脐带组织,将获得的细胞传代培养,观察基本生物学特性,流式细胞仪鉴定细胞表面分子,以不同方法将其向骨、脂肪和心肌细胞方向诱导,分别采用Von Kossa、油红O染色和免疫组织化学染色对分化的细胞进行鉴定.结果 新鲜分离的脐带细胞在培养72h后,开始贴壁,传代培养后,细胞逐渐纯化,流式细胞仪分析这些细胞表达CD13、CD29、CIN4、CD90、CD105、CD166和MHC-Ⅰ,而不表达CD31、CD34、CD45、CD106和MHC-Ⅱ.在成骨细胞和成脂肪细胞诱导培养后,Von Kossa染色和油红O染色阳性.在5-氮胞苷诱导4周后,免疫组织化学染色心肌特异性抗体肌动蛋白a-actin和肌钙蛋白T阳性.结论 脐带组织中含有丰富的干细胞,酶消化法能够成功分离出脐带干细胞.     

抗CD44抗体HI44a对白血病细胞分化与凋亡作用的体外研究

背景与目的探讨抗CD44抗体HI44a对新鲜白血病细胞分化及凋亡的作用。材料与方法从细胞形态学、四氮唑蓝(NBT)还原反应和细胞分化特异性抗原CD11b,CD14和CD15的变化,体外研究HI44a对31例急性髓系白血病患者白血病细胞的诱导分化作用。并利用Annexin-Ⅴ试剂盒检测HI44a对白血病细胞的凋亡诱导,RT-PCR方法检测其对细胞分化相关因子G-CSF,M-CSF及原癌基因c-myc表达的影响。结果经HI44a作用后,白血病细胞形态向成熟方向转变;M2~M5各亚型的NBT还原反应阳性率分别升高到31%(对照为9%)、55%(对照为10%)、25%(对照为12%)和32%(对照为11%),与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。CD11b,CD14和CD15表达分别由对照组的9.65%、27.40%、57.38%升高到19.29%、40.60%和66.82%(P均<0.01)。细胞的早期凋亡率由对照组的26.21%升高到41.18%。RT-PCR检测发现HI44a作用后,M-CSF表达增强,而原癌基因c-myc表达降低。结论HI44a能够有效的诱导白血病细胞分化及凋亡,为治疗急性髓性白血病提供了一条新思路。     

脐带来源间充质干细胞在成脂培养条件下骨形态发生蛋白2的表达

背景：脐带间充质干细胞在成脂培养条件下成脂相关信号因子过氧化物酶体增殖体激活受体Y的表达水平增高,同时成骨相关信号因子骨形态发生蛋白的表达水平也增高。目的：检测成脂诱导条件下脐带间充质干细胞的过氧化物酶体增殖体激活受体Y及骨形态发生蛋白2的表达水平变化,并对结果进行初步探讨。方法：取脐带来源的间充质干细胞,以成脂诱导体系对细胞进行诱导分化培养,倒置显微镜下观察细胞体外培养生长情况：油红O染色法观察成脂现象,茜素红及von kossa染色观察是否有沉淀形成：荧光定量PCR方法检测成脂相关因子过氧化物酶体增殖体激活受体Y及骨形态发生蛋白2的表达变化情况。结果与结论：获得脐带来源间充质干细胞,并成功进行了成脂诱导分化。荧光定量PCR检测发现在成脂诱导条件下脐带间充质干细胞的过氧化物酶休增殖体激活受体Y和骨形态发生蛋白2的表达水平令都呈升高趋势,但是前肯对分化方向的调控起主要作用。     

TLR3的激活抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖

目的 Toll样受体(TLRs)在肿瘤的发生发展和肿瘤免疫中起到重要的作用,有报道称TLR3的激活能够促进某些肿瘤细胞的凋亡.本研究旨在探讨TLR3的特异性激动剂Poly(I:C)对恶性程度较强的乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖与凋亡的影响,并初步探讨其发挥作用的机制.方法 反转录PCR检测Toll样受体各个亚型在mRNA水平上的表达;CCK-8细胞活力试剂盒检测不同浓度Poly(I:C)对MDA-MB-231细胞增殖的影响;流式细胞术用Annexin V-FITC/PI染色检测Poly(I:C)对MDA-MB-231细胞凋亡作用的影响;实时定量反转录PCR检测相关细胞因子的表达变化.结果 在mRNA水平上,MDA-MB-231细胞TLRs各亚型中TLR3表达最高;CCK-8检测结果显示Poly(I:C)刺激以后,MDA-MB-231细胞的增殖受到抑制,凋亡试剂盒检测显示Poly(I:C)刺激以后对细胞凋亡没有影响;实时定量PCR显示TNF-α、IFN-β和IFN-γ在Poly(I:C)刺激6h后大约有20倍的升高.结论 Poly(I:C)刺激MDA-MB-231细胞后,细胞增殖受到抑制,但其凋亡并不受影响;TNF-α、IFN-β和IFN-γ可能在抑制增殖的过程中发挥一定的作用.     

吲哚美辛对乳腺癌细胞体外迁移能力的影响研究

目的 观察吲哚美辛对乳腺癌细胞系MCF-7体外迁移能力的影响,探讨可能存在的机制.方法 采用Transwell实验方法检测吲哚美辛刺激后MCF-7细胞的迁移能力,运用流式细胞术、Real-timePCR及ELISA方法分别检测吲哚美辛刺激后MCF-7细胞中趋化因子受体(CXCR4)、环氧合酶(COX-2)、表皮生长因子受体( EGFR)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况.结果 吲哚美辛刺激组MCF-7细胞的迁移能力较未刺激组明显降低;吲哚美辛可呈时间-剂量依赖性地抑制MCF-7细胞表面CXCR4的表达,并显著下调细胞中CXCR4、COX-2和EGFR mRNA水平的表达,但对VEGF的产生并无明显的影响.结论MCF-7细胞中CXCR4、COX-2和EGFR表达的显著下调,可能是吲哚美辛抑制MCF-7细胞体外迁移能力的重要机制.     

血清叶酸、维生素B12及铁蛋白在四种血液病演变中的意义

目的 探讨造血原料在再生障碍性贫血(AA)、阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)、骨髓增生异常综合征(MDS)、急性白血病(AL)之间克隆演变的规律.方法 采用放射免疫法检测AA、PNH、MDS、AL患者治疗前后叶酸及维生素B12酶联法检测血清铁蛋白,比较每组患者治疗前后造血原料的差别,以健康志愿者为健康对照组,并比较各组患者与健康对照组之间的差别.结果 各组患者治疗前造血原料检测结果及与健康对照组比较:PNH组叶酸低于对照组(P<0.05);MDS患者维生素B12、血清铁蛋白显著高于健康对照组(P均<0.05);AL患者叶酸显著低于健康对照组(P<0.05),维生素B12、铁蛋白显著高于健康对照组(P均<0.01).与AA组治疗前比较:MDS患者维生素B12及铁蛋白均显著增高(P均<0.01);AL患者叶酸显著降低(P<0.05),维生素B12及铁蛋白均显著增高(P均<0.05).与MDS患者治疗前比较:AL患者叶酸显著降低(P<0.05),维生素B12、铁蛋白显著增高(P均<0.05).组内治疗前后比较:从患者治疗后铁蛋白增高(P<0.05);PNH患者治疗后较治疗前叶酸增高(P<0.05),维生紊B12及铁蛋白较治疗前差异无统计学意义(P均>0.05);MDS患者治疗后较治疗前叶酸差异无统计学意义(P>0.05),维生素B12及铁蛋白均显著降低(P均<0.05);AL患者治疗后较治疗前叶酸显著增高(P<0.05),维生素B12及铁蛋白均显著降低(P均<0.05).结论 血清叶酸、维生素B12及铁蛋白在AA、PNH、MDS、AL之间差异有统计学意义,对提示4种疾病之间的克隆演变、预后及治疗转归方面有一定意义.     

内镜冷光辐射对美蓝染色胃癌细胞SGC7901DNA损伤的研究

目的 探讨胃镜冷光源照射对美蓝(MB)染色后的胃癌细胞DNA的损伤情况,并探索损伤的发生机制和作用规律。方法 应用单细胞凝胶电泳技术,检测DNA损伤情况;Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞仪检测细胞凋亡;采用荧光探针 DCFH-DA,进行细胞内活性氧(ROS)检测。结果 冷光照射MB染色的SGC7901细胞后,其DNA损伤程度较未照射组增加( F =8.39, P<0.05),损伤严重程度与光照时间呈正相关,光照停止则有损伤修复,照射后细胞较未照射细胞出现明显凋亡(χ²=7.71, P<0.05);同时,经照射后的细胞内ROS高于未照射组( F=34.11, P<0.01)。结论 美蓝色素内镜的冷光辐射可造成SGC7901细胞的DNA损伤,并诱发细胞凋亡,其作用机制与光化学反应激发产生的过量ROS有关。