TLR3的激活抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖

目的 Toll样受体(TLRs)在肿瘤的发生发展和肿瘤免疫中起到重要的作用,有报道称TLR3的激活能够促进某些肿瘤细胞的凋亡.本研究旨在探讨TLR3的特异性激动剂Poly(I:C)对恶性程度较强的乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖与凋亡的影响,并初步探讨其发挥作用的机制.方法 反转录PCR检测Toll样受体各个亚型在mRNA水平上的表达;CCK-8细胞活力试剂盒检测不同浓度Poly(I:C)对MDA-MB-231细胞增殖的影响;流式细胞术用Annexin V-FITC/PI染色检测Poly(I:C)对MDA-MB-231细胞凋亡作用的影响;实时定量反转录PCR检测相关细胞因子的表达变化.结果 在mRNA水平上,MDA-MB-231细胞TLRs各亚型中TLR3表达最高;CCK-8检测结果显示Poly(I:C)刺激以后,MDA-MB-231细胞的增殖受到抑制,凋亡试剂盒检测显示Poly(I:C)刺激以后对细胞凋亡没有影响;实时定量PCR显示TNF-α、IFN-β和IFN-γ在Poly(I:C)刺激6h后大约有20倍的升高.结论 Poly(I:C)刺激MDA-MB-231细胞后,细胞增殖受到抑制,但其凋亡并不受影响;TNF-α、IFN-β和IFN-γ可能在抑制增殖的过程中发挥一定的作用.     

血小板内皮细胞黏附分子的剪接体在胚胎干细胞血管形成过程中的表达

目的探讨血小板内皮细胞黏附分子(PECAM)1的剪接体在胚胎干细胞分化过程中的表达规律。方法体外培养胚胎干细胞,在细胞因子的作用下形成胚胎样小体(EB);然后将EB种植到胶原中,在细胞因子的作用下诱导出芽性血管新生。分别利用免疫组织化学、流式细胞术、逆转录聚合酶链反应等方法检测胚胎干细胞及其分化过程中PECAM1、Oct4及胚胎阶段特异性抗原(SSEA)1的表达。应用克隆分析的方法检测不同的PECAM1剪接体在EB形成和出芽性血管新生过程中的表达分布。     

人脐带间充质干细胞对NOD/SCID小鼠造血重建的影响

目的探讨脐带间充质干细胞(MSC)对NOD/SCID小鼠造血重建的影响。方法以足月胎儿脐带分离的MSC和脐血单个核细胞作为供体,化疗预处理后NOD/SCID小鼠作为受体。将小鼠随机分为以下3组(每组10只):单纯化疗组,仅做化疗预处理,不输注任何细胞;单移植组,化疗后输注单纯脐血单个核细胞(1×107/只);共移植组,化疗后输注脐血单个核细胞(1×107/只)和脐带MSC(1×106/只)。移植后第3、7、14、21、28天分别计数小鼠外周血白细胞,观察其变化;移植后第6周计算小鼠的生存率,并用流式细胞仪检测小鼠骨髓内人CD45 细胞的表达(即植入率)。结果共移植组小鼠移植后第14、21天外周血白细胞[分别为(5.73±0.38)×109/L、(5.90±0.42)×109/L]明显高于单移植组[分别为(3.30±0.58)×109/L、(4.83±0.41)×109/L],差异有显著性(P<0.05)。移植后第6周,共移植组小鼠骨髓人CD45 细胞表达明显高于单移植组(P<0.05),而两组小鼠生存率无显著性差异(P>0.05)。结论成功地建立了异种异基因小鼠脐血移植模型,脐带MSC作为一种新来源的MSC,能够促进造血重建,提高植入率,有望应用于临床共移植治疗中。     

核转录因子κB配体受体激动因子对脑缺血后骨髓间充质干细胞移植神经分化的影响

目的 观察核转录因子(NF)-κB配体受体激动因子(RANKL)在大鼠局灶性脑缺血后人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)移植中对神经功能恢复以及向神经细胞分化的影响.方法 制备SD大鼠左侧大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,24 h后行BrdU标记hBMSCs和RANKL协同移植,移植后1、7、14、21、28 d观察大鼠神经功能恢复情况,检测移植细胞在体内胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达情况.结果 移植7～21 d,RANKL和hBMSCs协同移植组神经功能恢复明显好于单纯hBMSCs组;21 d时,协同移植组中NSE(4.39%)和GFAP(9.06%)阳性率明显高于单纯hBMSCs组(2.93%和8.03%).结论 RANKL和人骨髓间充质干细胞协同移植可提高大鼠局灶性脑缺血后神经病学预后,提高hBMSCs在宿主体内向神经细胞的分化.     

成体干细胞与细胞心肌成形术

目前在心脏外科领域,虽然冠心病的治疗取得很大进展,但由于心肌梗死后无法再生或再生能力有限,心肌梗死及其导致的心力衰竭等心血管疾病仍是危害人类健康的头号疾病。对终末期心力衰竭者,心脏移植可能是唯一的治疗手段,但是,由于供体缺乏大大限制了其的临床应用,且大量免疫抑制剂的应用还可能降低病人生活质量。细胞治疗,又称细胞心肌成形术,即将细胞移植至心肌梗死区,增加或保持心肌细胞数量、促进局部血管新生,恢复局部血液供应,促进损伤心肌的功能恢复,可能成为治疗终末期缺血性心脏病的一种新方法。     

脐血血管内皮祖细胞的分离和诱导分化

目的 从脐血中分离内皮祖细胞，诱导其向内皮细胞分化，研究内皮祖细胞的生物学特性和诱导分化条件。方法 从新鲜脐血中纯化的CD133^ 细胞接种于添加了VEGF、bFGF、IGF—1的M199培养液中，观察梭形贴壁细胞的出现时间和特异性细胞标志。结果 培养3—4d可观察到梭形贴壁细胞，14d左右可形成索条状结构，贴壁细胞表达血管内皮细胞特异性标志VE-cadherin,vWF,UEA-1和VEGFR-2。结论 脐血中含有内皮祖细胞，在一定的条件下，可分化为内皮样细胞。     

人促血液血管细胞生成素的原核表达及兔抗体的制备

目的:表达人促血液血管细胞生成素(hemangiopoi-etin,HAPO)蛋白并制备兔抗HAPO抗体。方法:利用硫氧还原蛋白TrxA融合表达载体(pET32c),表达可溶性HAPO。表达的HAPO融合蛋白经亲和层析快速纯化,并通过Westernblot进行鉴定。以纯化的人HAPO免疫新西兰大白兔,制备抗体并测定其效价。结果:获得高效表达并纯化的HAPO蛋白。制备的兔抗人HAPO抗体的免疫双扩散的效价为1∶8。结论:建立了HAPO基因的原核表达载体和快速纯化体系并制备出兔抗HAPO的抗体,为研制检测HAPO的ELISA试剂盒奠定了基础。     

干细胞技术与组织器官修复再造

干细胞 (stemcells)对于大多数人来说还是一个陌生的名词 ,由于干细胞功能的阐明及其应用技术的进展使科学家和医生开始真正认识到 ,许多危及生命健康的难治性疾病的治疗需要从生命的源头—干细胞直接入手。1　什么是干细胞 ?干细胞是具有自我复制和多项分化潜能的原始细胞 ,是机体的起源细胞 ,是形成人体各种组织器官的祖宗细胞。从干细胞发育分化过程可以看出 ,精子与卵细胞结合先分化增殖形成若干个子代细胞 ,又称全能细胞 ,后者继续分化增殖形成囊胚。全能胚胎细胞和囊胚内细胞群的细胞统称胚胎干细胞 ,具有形成人体各种组织的全能性。…     

干细胞白血病基因在再障和正常骨髓基质细胞中的表达

目的：了解白血病干细胞(SCL)基因在再生障碍性贫血(AA)骨髓基质细胞 (BMSC)及骨髓细胞中的表达情况。方法：收集9例AA和33例正常骨髓标本。体外长期培养扩增BMSC，并收集悬浮细胞。运用反转录聚合酶链反应酶联免疫吸附测定(RT-PCR-ELISA)检测SCL基因在BMSC和悬浮细胞中的表达，分析表达率，并以管家基因β2微球蛋白(β2M)为内参照进行半定量分析。结果：SCL基因在AA的BMSC中的表达率(22.2％)低于正常对照组(69.7％，P<0.05)。SCL基因在AA的悬浮细胞中的表达率(87.5％)高于其对应的BMSC(P<0.05)。PCR-ELISA半定量分析结果显示，SCL基因在正常对照组悬浮细胞中的表达水平高于其对应的BMSC(P<0.05)。结论：SCL基因在AA的BMSC中的相对低表达状态提示可能与AA造血调控异常有关。