干细胞白血病基因在再障和正常骨髓基质细胞中的表达

目的：了解白血病干细胞(SCL)基因在再生障碍性贫血(AA)骨髓基质细胞 (BMSC)及骨髓细胞中的表达情况。方法：收集9例AA和33例正常骨髓标本。体外长期培养扩增BMSC，并收集悬浮细胞。运用反转录聚合酶链反应酶联免疫吸附测定(RT-PCR-ELISA)检测SCL基因在BMSC和悬浮细胞中的表达，分析表达率，并以管家基因β2微球蛋白(β2M)为内参照进行半定量分析。结果：SCL基因在AA的BMSC中的表达率(22.2％)低于正常对照组(69.7％，P<0.05)。SCL基因在AA的悬浮细胞中的表达率(87.5％)高于其对应的BMSC(P<0.05)。PCR-ELISA半定量分析结果显示，SCL基因在正常对照组悬浮细胞中的表达水平高于其对应的BMSC(P<0.05)。结论：SCL基因在AA的BMSC中的相对低表达状态提示可能与AA造血调控异常有关。     

人促血液血管细胞生成素的原核表达及兔抗体的制备

目的:表达人促血液血管细胞生成素(hemangiopoi-etin,HAPO)蛋白并制备兔抗HAPO抗体。方法:利用硫氧还原蛋白TrxA融合表达载体(pET32c),表达可溶性HAPO。表达的HAPO融合蛋白经亲和层析快速纯化,并通过Westernblot进行鉴定。以纯化的人HAPO免疫新西兰大白兔,制备抗体并测定其效价。结果:获得高效表达并纯化的HAPO蛋白。制备的兔抗人HAPO抗体的免疫双扩散的效价为1∶8。结论:建立了HAPO基因的原核表达载体和快速纯化体系并制备出兔抗HAPO的抗体,为研制检测HAPO的ELISA试剂盒奠定了基础。     

人脐带间充质干细胞体外扩增和向神经元样细胞定向诱导分化的研究

目的探讨人脐带间充质干细胞(MSCs)的体外分离、纯化、扩增和向神经元样细胞的定向诱导分化,以期为脐带MSCs的神经移植提供理论依据。方法无菌条件下收集剖宫产新生儿脐带,酶消化法获取MSCs,进行培养。用流式细胞仪检测MSCs的表面标志。取扩增3,5,10代的MSCs分别向神经元样细胞诱导,用免疫组化和RT-PCR法检测神经元样细胞特异性标志。结果脐带富含MSCs,且脐带MSCs(UCMSCs)强表达CD13、29、CD44、CD105,弱表达CD106,不表达CD34、CD11a、CD14、CD33、CD45。神经条件培养基诱导后的细胞平均有70%左右呈现典型的神经元样表型。免疫组化法检测发现不同代数的MSCs经诱导后均表达nestin,NSE,NeuN,NF-M,弱表达GFAP。RT-PCR显示诱导后NSEmRNA表达增加。结论MSCs存在于人脐带中,并且在体外有较强的增殖能力,特定条件下能够分化为神经元样细胞。     

人脐带间充质干细胞向神经细胞分化的研究

目的研究人脐带分离的间充质干细胞向神经细胞分化的可能性。方法将剔除动静脉的新鲜人脐带组织切成小块培养,得到贴壁细胞;经传代培养、细胞周期分析、流式细胞检测后,再以不同方案诱导向其神经细胞分化,并以免疫荧光和RT-PCR方法进行鉴定。结果培养5-7d后,有细胞从组织块中游出。细胞传代培养达23代后无明显的形态和增殖能力改变。细胞周期分析表明80%以上的细胞都处于G0~G1期。流式细胞检测表明这些细胞表达CD13、CD29、CD44、CD90、CD105和CD166等MSCs标志物。经神经分化诱导后,部分细胞呈现出与神经元或神经胶质细胞类似的形态;免疫荧光检测表明,第二神经分化诱导方案优于第一方案,其NSE和MBP阳性细胞分别达80.8%±3.9%、4.2%±1.3%,但未能见到GFAP阳性细胞。RT-PCR进一步证实了这些神经标志物的表达。结论人脐带间充质干细胞具有向神经细胞分化的潜能,可作为神经系统疾病细胞移植治疗的备选来源。     

人骨髓巨核系祖细胞(CFU-M)体外半固体培养的方法探讨

为了探索一种较理想的人骨髓巨核系祖细胞CFU-M的体外半固体培养方法,本文对血浆凝块法和甲基纤维素法进行比较,证实血浆凝块法培养的CFU-M开始出现于第5天,集落高峰在第10～12天,消失于第16天。甲基纤维素法CFU-M开始出现于第5～6天,集落高峰在第14～16天,集落消失在20天以后。前者集落呈弥散状或紧密状不一,可原位固定染色计数,标本易保存;后者集落呈紧密状,不能原位固定,可在倒置镜下根据细胞形状计数,或吸出细胞涂片染色,培养皿不能保存。当两种培养体系中加入相同的条件培养基时,CFU-M数无显著性差别。本文还介绍一种改良的血浆凝块法,该方法以PHA-LCM为条件培养基,并用抗血小板糖蛋白单抗和ABC染色法来鉴别生长的巨核细胞。此法集落产率高,鉴别指标客观特异,不需要荧光显微镜。14例正常骨髓标本的CFU-M的产率为136.4～42.5/5×10_5((?)±SD)。当培养体系中加入不同的条件培养基CFU-M的产率不同,其中以PHA-TCM所得CFU-M数最高。本文结果提示:用PHA-TCM作条件培养基的血浆凝块法结合用抗血小板GPⅡa单抗的ABC染色,是研究CFU-M体外增殖分化和探讨血小板性疾病发病机制的理想方法。     

肿瘤转移与血小板

近年来研究表明,肿瘤转移与血小板关系密切,血小板可能有利于转移的发生,血小板功能抑制疗法有可能成为防治转移的一种很有前途的疗法。本文就此对有关文献作一综述。     

1.2干细胞技术与组织器官修复再造

干细胞(stem cells)对于大多数人来说还是一个陌生的名词,由于干细胞功能的阐明及其应用技术的进展使科学家和医生开始真正认识到,许多危及生命健康的难治性疾病的治疗需要从生命的源头-干细胞直接入手.     

凝血酶敏感蛋白1抗血管新生作用研究进展

凝血酶敏感蛋白 1(thrombospondin 1,TSP 1)是重要的多肽类内源性血管新生抑制物。TSP 1的抗血管新生活性主要由其第 2和第 3个备解素样 (type 1repeats)重复顺序承担 ;P5 3蛋白是TSP 1基因的关键转录调节因子 ;CD36分子介导的内皮细胞凋亡是TSP 1抑制血管新生作用的重要机制 ;TSP 1的编码序列可以作为有效的抗血管新生基因药物     

外周血干细胞治疗血管闭塞性脉管炎

早在一个世纪前就有人提出造血细胞和血管细胞可能有一个共同的干细胞——血液血管干细胞(hemangioblast)。血液血管干细胞可以发育分化成造血干细胞(HSC)和血管干细胞(angioblast)，后两者进一步分化增殖形成血细胞和血管两大系统。但直到近几年，才有实验研究证实了血液血管干细胞的存在，并可通过免疫磁珠或流式细胞仪等技术