铁叶绿酸钠对正常小鼠祖细胞集落和实验性贫血的影响

目的：探讨铁叶绿酸钠（ＳＩＣ）对骨髓造血细胞的作用和对鼠实验性贫血的疗效。方法：用体外小鼠骨髓细胞培养技术及失血性贫血大鼠与溶血性贫血小鼠模型，观察ＳＩＣ对骨髓造血祖细胞增殖及实验性贫血的影响。结果和结论：①ＳＩＣ能明显促进正常小鼠骨髓红系祖细胞（ＣＦＵ－Ｅ）和粒－单核细胞系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）的增殖反应；②ＳＩＣ能提高正常小鼠外周血网织红细胞的百分比；③对乙酰苯肼所致小鼠溶血性贫血，ＳＩＣ可减轻外周血红细胞和血红蛋白的降低程度；④ＳＩＣ可促进失血性贫血大鼠红细胞、血红蛋白和网织红细胞恢复正常，并提高血清铁水平和转铁蛋白饱和度。上述结果为ＳＩＣ用于治疗贫血提供了药理学基础。     

湿热证大鼠模型TLR4mRNA、NF-κBp65表达的对比研究

目的:通过多因素复合造模方法,观察模型大鼠内毒素特异性受体TLR4mRNA及NF-κBp65表达变化,探讨湿热致病机制。方法:将大鼠分为正常组、湿热模型组(高脂 高温高湿 大肠杆菌)、模型对照组(高脂 高温高湿)3组,每组8只;采用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测肝巨噬细胞TLR4mRNA,免疫组化技术检测肝巨噬细胞NF-κBp65活化。结果:在感染6h、12h、24h等不同时相点,湿热模型组TLR4mRNA、NF-κBp65表达与模型对照组、正常组比较均有非常显著增强(P<0.01);湿热模型组在6h、12h、24h等不同时相点,TLR4mRNA、NF-κBp65表达逐渐增强,且不同时相点之间比较均有显著性差异(P<0.05)。结论:靶细胞TLR4mRNA适量表达及NF-kB激活既是湿热病证的主要致病机理,又是湿热病证的相关性指标。     

PU.1与造血系统发育和造血系统疾病的关系

Ets家族的转录因子在造血细胞的生存、生长和分化方面起着重要的作用.而PU.1是Ets家族中最重要的转录因子.PU.1蛋白的C末端结合区域与Ets-1极其相似.与其他Ets家族转录因子一样,GGAA是PU.1的结合点.在体外,GAGGAA是PU.1的理想结合点.PU.1主要表达于造血细胞,包括CD34＋细胞、巨噬细胞、B淋巴细胞、中性粒细胞、肥大细胞和原始红细胞等.最近的研究表明,PU.1与中性粒细胞、巨噬细胞、巨核细胞、红细胞、成骨细胞、嗜酸细胞、树突细胞和肥大细胞等的发育、分化有着密切的关系,也与白血病、淋巴瘤的发生有关.对PU.1的研究是近年来的一个研究热点.     

抗登革病毒的天然免疫应答

登革热/登革出血热(DF/DHF)是热带地区最重要的蚊传播病毒性疾病,造成了非常严重的世界公共卫生问题.理解机体天然免疫应答对登革病毒感染的影响有重要意义.病毒入侵宿主细胞是感染过程的第一阶段,也是关键性的阶段,其过程所涉及的细胞蛋白鉴定与机制大部分仍然未知.间质性树突细胞(DCs)是登革病毒感染的靶细胞,也是机体天然免疫防御抗登革病毒入侵的第一道防线.在病毒感染早期.NK细胞分泌的Ⅰ型干扰素(IFN)非常重要.机体内有两个应答登革病毒感染的天然免疫通道,其中一个信号通道利用Toll样受体(TLR)家族成员,探测经细胞内吞作用进入的内涵体病毒,通过信号蛋白诱导IFN产生,并最终活化NF-κB,IRF7、IRF5等转录因子,另一个抗病毒通道则以维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)作为细胞内识别病毒dsRNA的受体.但RNAi天然免疫通道在人类是否存在还有待进一步研究.     

β2GP Ⅰ/抗β2GP Ⅰ抗体复合物抑制oxLDL介导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积和FAK活化

目的探讨β2糖蛋白Ⅰ/抗β2糖蛋白Ⅰ抗体复合物(β2/aβ2)对氧化低密度脂蛋白(oxLDL)介导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积和黏着斑激酶(FAK)活化的影响,以及Toll样受体4(TLR4)在该过程中的作用。方法用PMA(100 ng/mL)将THP-1细胞诱导为THP-1巨噬细胞。用RPMI 1640培养液、oxLDL、oxLDL+β2/aβ2和oxLDL+脂多糖(LPS)处理THP-1巨噬细胞,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测脂质转运相关分子ACAT1、ABCA1和ABCG1的mRNA水平;利用Trinder法检测THP-1巨噬细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)含量,并计算胆固醇酯(CE)含量和其占TC的比例;利用免疫荧光和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测FAK的蛋白质和mRNA表达并采用western blot检测其磷酸化;最后,利用TLR4阻断剂TAK-242(1μg/mL)预处理的方式,观察TLR4对上述过程的影响。结果β2/aβ2复合物能够抑制oxLDL引起的THP-1巨噬细胞脂质蓄积和FAK表达与磷酸化,阻断TLR4可以部分逆转这一现象。结论β2/aβ2可以抑制oxLDL引起的巨噬细胞的脂质蓄积和FAK活化,该过程与TLR4有关。     

人发角蛋白植入大鼠损伤脊髓部位的电镜观察

目的:脊髓外伤后的继发性病理改变,是影响脊髓神经组织再生修复的重要因素。采用人发角蛋白(humanhairkeratin,HHK)植入脊髓损伤(spinalcordinjury,SCI)部位,以期达到减轻继发性损害,诱导和促进损伤脊髓组织的再生。方法:采用改制Ⅱ型纽约大学(NewYorkUniversity,NYU)装置,在建立大鼠脊髓损伤模型基础上,将经过特殊处理后能在体内降解的HHK植入大鼠损伤脊髓部位,对植入后1,4,12,26周的损伤脊髓组织进行电镜观察。结果:第1周为急性炎症时期,HHK周围结构紊乱,集聚大量的炎症细胞,灰质出现坏死;第4周时,炎症细胞减少,巨噬细胞吞噬髓鞘,胶质细胞增生;第12周时,多核巨噬细胞出现在HHK周围,HHK开始崩解,崩解物被多核巨细胞所吞噬;第26周时,神经轴突沿HHK间隙排列生长,灰质中神经元数量增加,HHK周边细胞有序生长。结论:植入的人发角蛋白具有诱导神经胶质细胞增生,阻止脊髓空洞的形成,从而减轻了脊髓损伤组织的继发性伤害的程度,改善了神经元再生的外环境,并可以桥接诱导神经轴突定向再生的作用。     

巨噬细胞胞外诱捕网在类风湿关节炎患者滑膜中的表 达及其临床意义

摘要：目的 通过检测类风湿关节炎（ＲＡ）患者滑膜巨噬细胞胞外诱捕网（ＭＥＴｓ）形成情况，探讨 ＭＥＴｓ 在 ＲＡ 发病中的作用。 方法 收集 ＲＡ 及创伤手术患者的滑膜组织，采用苏木精－伊红（ＨＥ）染色检测炎症浸润情况，激光共聚焦显微镜观察巨噬细 胞（Ｆ４ ／ ８０＋ ）的表达、巨噬细胞极化（Ｆ４ ／ ８０＋ＣＤ８６＋ ，Ｆ４ ／ ８０＋ＣＤ２０６＋ ）情况、ＭＥＴｓ（Ｆ４ ／ ８０＋ Ｈ２Ａ＋ ）形成水平。 分离滑膜细胞，用蛋 白免疫印迹法检测滑膜细胞中 ＭＥＴｓ 瓜氨酸化组蛋白 Ｈ３（ＣＨ３）及肽酰基精氨酸脱亚胺酶 ４（ＰＡＤ４）的水平。 结果 与创伤手 术患者比较，ＲＡ 患者滑膜组织炎性浸润程度较重，炎性细胞增多，巨噬细胞总数和Ⅰ型巨噬细胞（Ｍ１）比例均显著增多（９８± ７．０９ ｖｓ １０±１．１５，０．７８±０．０２２ ｖｓ ０．１３±０．０１１，Ｐ＜０．００１），两组间 Ｍ２ 型巨噬细胞比例差异无统计学意义（０．２３±０．０１９ ｖｓ ０．１８± ０．０１２，Ｐ＞０．０５）。 ＲＡ 组 ＭＥＴｓ 形成显著高于对照组（０．６５±０．０２３ ｖｓ ０．１８±０．０１２，Ｐ＜０．００１）。 蛋白免疫印迹法显示 ＲＡ 患者滑膜 ＰＡＤ４ 和 ＣＨ３ 水平较创伤手术患者明显增多（０．８２±０．０１８ ｖｓ ０．２０±０．０１５，０．８３±０．０１３ ｖｓ ０．４０±０．０１２，Ｐ＜０．００１）。 结论 ＲＡ 患者 滑膜中巨噬细胞明显增多，且以 Ｍ１ 型巨噬细胞为主，ＭＥＴｓ 形成明显增多。     

炎性因子与血液透析患者贫血、营养不良的相关性分析

近年来，新的观点认为尿毒症是一种全身性的慢性炎性反应状态。这里所指的炎性反应已不限于一般意义上的感染，而是指机体在微生物、内毒素、各种化学物质、补体及免疫复合物等的刺激下，以单核巨噬细胞系统激活，IL-1、IL-6和TNF-α为主的促炎性反应细胞因子释放为中心的所有炎性反应。CRP作为一种炎性反应蛋白，是慢性炎性反应状态下细胞因子产生的标志，因而是慢性炎性反应状态的最敏感而特异的指标。炎性因子与ESRD患者许多病理生理改变和临床综合征的发生密切相关。蛋白能量营养不良（PEM）是维持性血液透析患者常见并发症，进入透析后营养状态得到部分改善，但仍有相当部分患者存在PEM，发生率约为23％-73％。TNF-α、IL-6、CRP与白蛋白明显负相关。尿毒症患者产生贫血的原因是多方面的，促红细胞生成素（EPO）的缺乏被公认为是最主要的原因。     

巨噬细胞集落刺激因子对巨噬细胞极化及卵巢癌细胞侵袭、转移的影响

目的探讨卵巢癌微环境中巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)促进M2型巨噬细胞的极化和浸润,及其对于癌细胞侵袭、转移的影响。方法选取卵巢癌细胞系A2780和SKOV3与THP-1来源巨噬细胞,在体外构建共培养模型,ELISA和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测培养基中M-CSF含量及其mRNA的表达水平。流式细胞术分析CD68~+CD163~+M2型巨噬细胞的极化比例。Transwell迁移试验检测2种卵巢癌细胞系与M2型巨噬细胞共培养后侵袭、转移能力的变化。免疫组化染色法检测卵巢癌(52例)及同期卵巢良性肿瘤(18例)石蜡组织切片中M-CSF、CD68~+、CD163~+和E-钙黏蛋白(E-cad)的表达及其相关性,并分析M-CSF与卵巢癌患者临床病理特征的关系。结果 A2780和SKOV3细胞与巨噬细胞共培养后,其上清中M-CSF浓度明显高于2种癌细胞单独培养组(t分别为14.315、12.338,P均0.01)。荧光定量PCR结果显示,升高的M-CSF来源于共培养后卵巢癌细胞的分泌(t分别为29.915、36.826,P均0.01)。CD68~+CD163~+M2型巨噬细胞在A2780和SKOV3共培养组的极化比例分别为(6.14±0.50)%和(7.32±0.67)%,明显高于单独培养组(1.82±0.34)%,差异有统计学意义(t分别为12.289、12.711,P均0.01)。Transwell试验结果显示,2种卵巢癌细胞共培养后其侵袭能力增强(24.00±4.81 vs 75.20±6.42,t=11.058;18.40±2.31 vs 61.60±9.66,t=7.537,P均0.01)。卵巢癌组织中M-CSF的表达与CD68~+、CD163~+阳性细胞数正相关且均高于对照组(r分别为0.690、0.596,P均0.01),而E-cad阳性表达则与之呈负相关且低于对照组(r=-0.566,P0.01)。M-CSF表达在不同肿瘤FIGO分期、分化程度和淋巴结转移情况组间差异有统计学意义(χ~2分别为6.240、6.612、4.544,P均0.05)。结论卵巢癌微环境中M-CSF的表达升高诱导CD68~+CD163~+M2型巨噬细胞的极化和浸润,进而促进癌细胞的侵袭、转移。     

白芍总苷对糖尿病大鼠肾组织巨噬细胞TLR2与TLR4表达调节的研究

目的探讨白芍总苷对糖尿病大鼠肾组织巨噬细胞Toll样受体2与4表达的影响。方法建立链脲佐菌素诱导的大鼠糖尿病模型,将大鼠随机分对照组、模型组、白芍总苷给药组（50,100,200mg／kg／d灌胃）。8周后选用免疫组化单染及双染方法检验大鼠。肾组织巨噬细胞Toll样受体2、Toll样受体4以及核因子-kB-p-p65的表达。结果白芍总苷给药组（50,100,200mg／kg）鼠肾重／体质量以及尿蛋白水平明显低于模型组。白芍总苷给药组（50mg／kg）大鼠肾小球平均容量明显低于模型组,白芍总苷给药组（100与200mg／kg）平均容量与肾小管-间质损伤指数均明显低于模型组。模型组肾组织ED-1’细胞数明显高于对照组,白芍总苷给药组（50,100,200mg／kg）ED-1’细胞数较模型组明显下降,模型组。肾组织ED-1’Toll样受体2’、ED-1’Toll样受体4’以及核因子-kB-p-p65’细胞表达明显高于对照组,白芍总苷给药组（50,100,200mg／kg）肾组织中ED-1’Toll样受体2’、ED-I’Toll样受体4‘以及核因子-kBp-p65’细胞明显低于模型组。结论白芍总苷对于减少糖尿病大鼠早期肾脏损害有明显作用,其中与抑制糖尿病大鼠肾组织巨噬细胞Toll样受体2与4表达可能部分相关。