血清巨噬细胞迁移抑制因子与创伤性脑损伤患者损伤程度及预后的相关性分析

目的 探讨血清巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)与创伤性脑损伤(trau-matic brain injury,TBI)患者损伤程度及预后的相关性.方法 根据格拉斯哥昏迷评分(Glasgow coma scale,GCS)将2019-01/2019-12月作者医院收治的108例TBI患者分为轻度组(n=39、中度组(n=32)和重度组(n=37),选取同期35例在作者医院健康体检者作为对照组.检测入选对象的血清MIF、白细胞计数(white blood cell count,WBC)、白细胞介素6(interleu kin 6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor a,TNF-α)和C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)水平,并对TBI患者进行6个月随访.结果 轻度组、中度组和重度组TBI患者受伤后各时点血清MIF和第二天WBC、IL-6、TNF-α、CRP均高于对照组(P＜0.05);中度组和重度组TBI患者受伤后各时点血清MIF和第二天WBC、IL-6、TNF-α、CRP均高于轻度组(P＜0.05),格拉斯哥预后评分(Glasgow outcome scale,GOS)低于轻度组(P＜0.05);重度组TBI患者受伤后各时点血清MIF和第二天WBC、IL-6、TNFα、CRP均高于中度组(P＜0.05),GOS低于中度组(P＜0.05).预后不良组TBI患者受伤后第二天血清MIF水平高于预后良好组(P＜0.05);MIF与WBC、IL-6、TNF-α、CRP和GOS呈正相关(P＜0.05).预后影响因素logisitic回归分析显示:MIF是TBI患者不良预后的独立危险因素(OR=1.366,P＜0.05);血清MIF水平预测TBI患者不良预后的截止值为28.61 ng/ml,曲线下面积(area under curve,AUC)为0.849 (95％CI:0.766～0.904;P＜0.05),敏感度为77.48％,特异度为65.12％.结论 TBI患者血清MIF水平增高,并与患者炎症、病情严重程度密切相关,血清MIF水平增高是TBI患者预后的独立危险因素,有望作为TBI的临床生物标志物.     

缺氧对内毒素耐受的THP-1细胞免疫功能的影响

目的 观察缺氧对发生内毒素耐受(endotoxin tolerance,ET)的人单核巨噬细胞(human mononuclear mac-rophages,T HP-1)免疫功能的影响并探讨其可能机制.方法 T HP-1细胞接受革兰氏阴性菌脂多糖(lipopolysaccha-ride,LPS)一次打击后分为四组.空白组:去除干预因素后继续培养,缺氧组:在空白组基础上予以氯化钴(CoCl2)处理,对照组:在空白组基础上予以LPS二次打击以形成ET,实验组:在空白组基础上给与缺氧及LPS二次打击.收集各组细胞总核糖核酸(ribonucleic acid,RNA),实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time-polymerase chain reac-tion,qPCR)检测白细胞介素1β(interleukin-1 beta,IL-1β)、白细胞介素12(interleukin-12,IL-12)、白细胞介素10(inter-leukin-10,IL-10)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、CD80、CD40、胶原结构巨噬细胞受体(macrophage receptor with collagenous structure,MARCO)及缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1 alpha,HIF-1α).收集各组细胞上清液,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞因子IL-1β、IL-12、IL-10及TGF-β1表达;蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞因子CD80、CD40、MARCO及HIF-1α蛋白表达.结果 qPCR结果显示,与对照组相比,实验组IL-1β、IL-12、CD80及CD40转录上调(P<0.05);但IL-10、TGF-β1及MARCO的转录下调(P<0.05).ELISA结果显示,与对照组相比,实验组IL-1β及IL-12分泌增加、IL-10及TGF-β1减少(P<0.05).Western blot结果显示,与对照组相比,实验组CD80及CD40蛋白表达增加、MARCO蛋白表达减少(P<0.05).与空白组和缺氧组相比,实验组及对照组的HIF-1α基因转录及蛋白表达均增加(P<0.05);但与对照组相比,实验组HIF-1α基因转录及蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 缺氧可破坏LPS诱导的THP-1细胞ET状态,从而加重炎症反应,该现象可能未通过影响HIF-1α而实现.     

小白菊内酯对巨噬细胞抗氧化能力的影响研究

目的 探讨小白菊内酯(PTN)对炎症模型小鼠的巨噬细胞抗氧化能力的影响.方法 对15只8周Balb/c小鼠灌服大肠杆菌脂多糖构建炎症模型动物,对成功获取的15只炎症模型动物进行腹腔冲击收集巨噬细胞进行编号和体外共培养,然后体外培养巨噬细胞,随机分为对照组、A组、B组、C组、D组,每组3只,分别对应为空白对照、7.5μmol/L PTN+1 mg/L LPS、15μmol/L PTN+1 mg/L LPS、30μmol/L PTN+1 mg/L LPS及200μmol/L维生素C+1 mg/L LPS.上述各组细胞在相同的培养条件下实施体外共培养试验,在培养第24、48及72小时收集细胞上清液进行炎性因子(IL-1β、TNF-α、IL-6)酶联免疫吸附试验检测,同时对细胞抗氧化能力指标(SOD、MDA、GSH-Px)水平进行检测.结果 炎症模型动物的体外分离获得的巨噬细胞墨汁吞噬染色的吞噬率为95.5％,碱性磷酸酶染色阳性率为91.5％;在与PNT共培养24 h,C组TNF-α均显著高于其他各组(P<0.05);共培养24、48 h,C组IL-1β显著低于其他各组(P<0.05),C组GSH-Px水平显著高于其他各组(P<0.05),C组MDA水平显著低于其他各组(P<0.05);共培养72 h,对照组IL-1β、TNF-α水平均显著高于其他各组(P<0.05),且对照组SOD水平均显著低于其他各组(P<0.05),C组TNF-α、MDA均显著低于其他各组(P<0.05),且C组GSH-Px水平均显著高于其他各组(P<0.05).各组在与PNT共培养第24、48及72小时期间的IL-6水平比较差异均无统计学意义.结论 小白菊内脂可提升巨噬细胞的抗氧化活力,抑制炎性因子分泌,以30μmol/L PTN+1 mg/L LPS进行体外抗氧化效果最佳.     

ox-LDL刺激的巨噬细胞中circRNAs差异表达及功能预测

目的：探究环状RNAs（circRNAs）在氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）刺激的巨噬细胞中的差异表达情况及功能预测。方法：采用人单核细胞系THP-1,用佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯（PMA）预处理细胞48 h,随后给予ox-LDL 50 µg/mL刺激单核源巨噬细胞24 h构建巨噬细胞炎症模型。利用microarray芯片筛选出差异表达的circRNAs。通过qRT-PCR实验检测芯片中差异表达的circRNAs。利用CircInteractome、TargetScan和miRecords数据库预测circRNA_0007478潜在的靶基因。结果：芯片筛选结果提示在ox-LDL刺激的巨噬细胞中有5条circRNAs表达显著上调,2条circRNAs表达显著下调。qRT-PCR证实其中4条表达显著上调,2条表达显著下调。生物信息学分析推测,circRNA_0007478可通过结合miRNA-765进而影响下游蛋白的表达,发挥潜在的调控作用。结论：在ox-LDL刺激的巨噬细胞中存在circRNAs的差异性表达,circRNA_0007478可能通过结合miRNA-765调控下游基因参与动脉粥样硬化进程。     

去甲斑蝥素致大鼠腹腔炎症与多脏器功能失常综合征

目的：探讨去甲斑蝥素致大鼠失控炎症在多脏器功能失常综合征（ＭＯＤＳ）发病中的作用。方法：将去甲斑蝥素（一种能刺激皮肤发泡以收集巨噬细胞的致炎物质，１５ｍｇ／ｋｇ）注入６０只Ｗｉｓｔａｒ大白鼠腹腔，动态观察其对炎性介质以及器官形态和功能的影响。结果：与对照组比较，实验组动脉血氧分压（ＰａＯ２）和血小板计数明显下降，谷丙转氨酶（ＧＰＴ）和血肌酐（ＳＣｒ）明显升高，１２０小时后上述指标均接近对照组；１２小时和２４小时大鼠死亡率分别为１５％和２０％；肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）和磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）在注射后２４小时和１２小时达最高值；肺、心、肝、肾、肠等器官出现病理改变。结论：去甲斑蝥素可能通过激活巨噬细胞、释放ＴＮＦ等炎性介质诱发全身炎症和ＭＯＤＳ。     

双歧杆菌对裸鼠腹腔巨噬细胞产生细胞毒性效应分子的影响

目的 了解青春型双歧杆菌刺激裸鼠腹腔巨噬细胞后产生的IL－6、IL－12及TNF－α的水平。方法 以青春型双歧杆菌注射于裸鼠腹腔，体外获取腹腔巨噬细胞，分别滴加兔抗鼠IL－6、IL－12及TNF-α单抗，然后以FITC标羊抗兔IgG孵育，最后用激光共聚焦显微镜测定巨噬细胞发出的荧光强度。结果 双歧杆菌注射组裸鼠腹腔巨噬细胞产生的IL－6、IL－12及TNF－α水平均显高于对照组（P＜0．01）。结论 青春型双歧杆菌能激活巨噬细胞，使之分泌多量的IL－6、IL－12及TNF－α。     

粒细胞巨噬细胞集落刺激因子在创面愈合中的应用进展

粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte／macmphage colony—stimulating factor，GM—CSF）是近几十年来医学研究的一热门细胞因子。1977年它由Burgess等在鼠的肺条件培养液中首次发现。因能刺激造血前体细胞形成粒细胞巨噬细胞集落．故而得名。1985年，人类GM．CSF基因（human GM—CSF．hGM．CSF）被首次克隆表达．此后重组人GM—CSF（recombinant human GM—CSF，rhGM—CSF）渐应用于临床。GM．CSF有多种功能，可刺激造血前体细胞增殖、分化及促进其向外周转移，又可诱导多种细胞如巨噬细胞、角质细胞等的分化、增殖．并活化、增强其功能。rhGM．CSF已成功应用于多个临床领域，如改善放化疗、严重感染等原因导致的骨髓抑制．增强疫苗的免疫原性，促进创面愈合等     

脂蛋白（a）对鼠腹腔巨噬细胞的细胞毒性作用

目的探讨脂蛋白（a）对巨噬细胞释放一氧化氮的影响，进一步了解脂蛋白（a）在动脉粥样硬化发生发展中的作用。方法将脂蛋白（a）（终浓度为2．5～40mg／L）与鼠腹腔巨噬细胞共孵，检测上清液中乳酸脱氢酶活性、一氧化氮含量和细胞一氧化氮合酶活性。结果在基础及脂多糖诱导状态下，细胞上清液中一氧化氮（NO）含量与脂蛋白（a）呈显著的剂量依赖性降低，并呈时间效应。而细胞一氧化氮合酶活性则不受脂蛋白（a）刺激的影响。结论脂蛋白（a）对巨噬细胞释放NO有明显抑制作用。