非小细胞肺癌人群中c-MET基因的扩增检测

目的：c-MET基因扩增是非小细胞肺癌对EGFR TKIs（吉非替尼或厄罗替尼）产生耐药的主要机制之一。本研究探讨没有接受TKIs治疗与TKIs治疗后耐药的NSCLC中c-MET基因的扩增是否存在差异。方法:获得55例术后非小细胞肺癌（NSCLC）的肿瘤组织（基线组）以及23例对TKIs耐药的肿瘤组织（耐药组）后,通过激光显微切割筛选癌细胞后提取基因组DNA,实时荧光定量PCR TaqMan探针法检测所有标本的c-MET基因的拷贝数。 结果:1.基线组和耐药组的临床病理特征均与c-MET基因的扩增无关。2.基线组中c-MET基因扩增阳性率为5.5% (3/55);耐药组的c-MET基因扩增阳性率为21.7% (5/23)。两组之间有统计学差异（Fisher精确概率法,P=0.045）。3.在7例获得TKI治疗前后肿瘤组织的NSCLC中,TKI治疗前没有出现c-MET的基因扩增,TKI治疗后有2例患者出现了c-MET的基因扩增（2/7）。TKI治疗前后的c-MET基因扩增差异无统计学意义。结论:NSCLC的临床病理特征不能预测c-MET基因扩增;在没有接受EGFR TKIs治疗的NSCLC中,c-MET基因扩增仅为少见事件。但经过吉非替尼或厄罗替尼治疗后出现耐药情况NSCLC中,部分患者的c-MET基因出现扩增。     

利用SELDI-TOF-MS蛋白质指纹图谱技术建立肺腺癌诊断模型

目的:寻找肺腺癌患者血浆(清)蛋白特异性生物标志物,用最佳的标志蛋白组合建立肺腺癌诊断模型,并探讨其用于肺腺癌筛查的可行性.方法:应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术及CM10芯片,检测45例肺腺癌患者和40例正常人血清蛋白质指纹图谱,用Biomark Wizrd和Biomark Patterns Software软件对结果进行分析,建立肺腺癌诊断模型:双盲法分析另外19例肺腺癌和20例正常人血清的SELDI质谱数据,验证该模型诊断肺腺癌的准确度.结果:肺腺癌患者和正常人血清蛋白质指纹图谱间有31个差异蛋白(P<0.05),其中以分子量为11.66 kD的蛋白在两组血清中的差异最为显著(P<10-7),该蛋白对诊断肺腺癌有很强的敏感性和特异性;软件自动筛选出分子量为11.66 kD的标志蛋白为主根结点,联合3882.9、4673.2、3158.2和2047.2等4个标志蛋白建立了最佳的肺腺癌诊断模型,对肺腺癌诊断(盲法)的敏感性为84.2%(16/19),特异性为90.0%(18/20).结论:SELDI-TOF-MS技术建立的肺腺癌血清检测法,快速、简单、特异和敏感,为肺腺癌诊断和筛查提供了一个可行的途径和方法.     

HRM法检测结直肠癌组织KRAS基因密码子12和13点突变

目的 建立HRM法检测大肠癌患者肿瘤组织KRAS(v-Ki-ras2 Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog)基因突变的方法 .方法 采用HRM法对含不同比例KRAS基因突变型质粒的系列混合样本进行检测,以评价其灵敏度.应用HRM法检测60份大肠癌患者新鲜肿瘤组织KRAS基因密码子12和13的突变状况,并与直接测序法的结果 进行比较分析.结果 HRM法只需在PCR结束后直接运行高分辨熔解,即可获得检测结果 .HRM法可检出系列混合样本中突变型质粒比例为10%的突变,其检测灵敏度达10%.HRM法从60份大肠癌患者组织标本中,检出17份KRAS基因密码子12或13突变(28.3%);直接测序法检出15份(25.0%)突变,2份未检出KRAS基因突变.HRM法检测的敏感度为100%(15/15),特异度为96%(43/45).结论 HRM法在筛选大肠癌标本的KRAS基因突变类型时,具有操作简便、快速、灵敏,单管避免污染等优点,完全符合临床个体化治疗的要求,值得推广.     

XAGE-1b基因在非小细胞肺癌中的表达及与临床特点的相关性研究

目的 探讨XAGE-1b基因在非小细胞肺癌中的表达水平及与临床特点的相关性.方法 非小细胞肺癌患者30例,通过手术获得肺癌组织和癌旁正常肺组织,分别提取组织总RNA,RT-PCR反应扩增XAGE-1b基因全长,通过电泳和基因测序鉴定RT-PCR产物,确定基因表达阳性标本,分析基因表达阳性率及与临床特征相关性.结果 30例肺癌组织中,XAGE-1b基因表达阳性率为40%(12/30),30例癌旁正常肺组织不表达该基因;基因表达与患者年龄、性别、肿瘤分化程度无相关性,与病理类型有相关性,腺癌中基因表达阳性率明显高于其他病理类型(61.1%vs 8.3%,p=0.015);随着TNM分期的升高,基因表达阳性率略有增加,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 XAGE-1b基因在肺腺癌中高表达,可优先选择该基因作为肺腺癌免疫治疗靶点.     

MassARRAY 质谱分析肺癌多基因突变方法的建立与应用*

目的:以MassARRAY质谱iPLEX 分析技术为平台建立适合中国肺癌人群多基因同步检测的方法。方法:通过文献检索并结合国内外研究进展,确定与中国肺癌人群发病、耐药以及转移等密切相关的13个靶基因或相关传导通路基因（EGFR、KRAS、ALK 、FGFR1、FGFR2、FGFR3、PIK3CA、BRAF、PTEN、MET 、ERBB2、AKT 1、STK 11）。 对目的基因突变进行筛选并确定99个热点突变。按MassARRAY突变位点标示方法和引物设计固定格式,引物设计软件在线设计297 条引物（正、反向扩增引物和延伸引物各99条）。 以8 个肺癌细胞系以及6 例肿瘤组织样本建立检测方法,与LungCarta试剂盒对比验证。扩大检测100 例肺癌组织样本,与EGFR 和KRAS直接测序法比较敏感度与特异度。结果:使用本方法检测肺癌细胞系的基因突变,其中1 例肺癌组织新检测到FGFR2 基因突变,其他结果与LungCarta试剂盒一致。与直接测序法相比较灵敏度为100% ,特异度为96.3% 。结论:成功建立MassARRAY质谱分析肺癌多基因突变检测方法,适合中国肺癌人群且具有临床应用前景。      

肺癌筛查：中国准备好了没有？

由美国国立癌症研究所发起的“国家肺部筛查试验（National Lung Screening Trial,NLST）”,是一项肺癌筛查的多中心、前瞻性、随机对照临床研究。结果发现,与标准胸部x线检查相比,采用低剂量螺旋计算机断层扫描（10w—dose spiral computed tomography,LDCT）对吸烟者进行定期筛查可以使肺癌死亡率下降20．3％。