人胰腺星状细胞分离方法改良

目的:探讨人胰腺星状细胞的两种新分离方法?方法:通过酶消化-密度梯度离心法进行静止态的人正常胰腺星状细胞的分离,分离获得的细胞在含10%FBS的DMEM/F12继续培养?通过组织块外植法获得激活态的人肿瘤相关胰腺星状细胞(CaPSCs),分离获得的细胞在含20%FBS的DMEM/F12继续培养?结果:通过方法改良,1 g人正常胰腺组织能够获得(0.5~5.0)×106个星状细胞,细胞活率约为90%?使用新的组织块外植法后,组织块不易掉落,细胞爬出时间显著缩短,约5~10 d即可获得CaPSCs?所有细胞贴壁良好,细胞倍增时间约为24 h?正常胰腺星状细胞(normal pancreatic stellate cells,NPSCs)培养早期形态符合典型静止态星状细胞特征,细胞为多边形或圆形,内含丰富脂滴,在荧光显微镜下可观察到320 nm激发波长下的蓝绿色自发荧光?NPSCs培养晚期和CaPSCs呈多触角状,胞内无脂滴,细胞增殖速度明显快于静止态细胞?激活态的细胞均表达α-SMA?Desmin?vimentin?GFAP等胰腺星状细胞特征性标记?结论:新的原代培养方法能够满足静止态和激活态两种状态胰腺星状细胞的分离培养,同时能够增加细胞得率?缩短分离培养时间,所获得细胞的活性和纯度符合进一步实验的要求,为胰腺星状细胞的相关研究提供了便利?     

胰腺实性假乳头状瘤的临床特点及预后分析

Objective To study the clinicopathological and immunohistochemical features, histogenesis and biological behavior, clinical treatment and pronosis of solid pseudopapillary tumor of the pancreas ( SPT). Methods Routine HE and immunohistochemical (SP) stainings were used in the pathological examination of 18 cases of SPT. Their clinical data were retrospectively analyzed. All the 18 postoperative patients were followed-up for 3 months to 10 years with an average of 29.2 months.Results There were 16 females and 2 males, age ranging from 9 to 65 years with mean age of 25.3 years. Abdominal pain and palpable mass were among the major complains. Tumors were encapsulated and mixed with solid and cystic tissues. Histological features were pseudopapillary structure with a fibrovascular core. Immunhistologically, most tumors were positive for α-AT, α-ACT and Vim, with a high percentage of 94.4%. The eighteen cases were followed-up from 3 to 120 months. Five cases received reoperation after recurence, and 14 cases were alive. Maximum survival time was 121 months and the minimum survival time was 3 months, with a median survival time of 23.0 months. The 5-year survival rate was 72.2%. A Kaplan-Meier analysis revealed that patient's age,tumor size, pathologic features, metastasis were major prognostic factors for SPT. Conclusion SPT is a tumor of low-grade malignancy and may be derived from multipotent stem cells. SPT most frequently affects young female, and has distinct clinicopathologic manifestation with excellent prognosis after surgical treatment.     

胰十二指肠切除术治疗远端胆管癌和胰头癌的临床效果分析

目的比较胰十二指肠切除术治疗远端胆管癌和胰头癌的临床效果。方法回顾性分析2016年1月至2020年12月于南京医科大学第一附属医院胰腺中心行胰十二指肠切除术且术后病理学检查结果为远端胆管癌或胰头癌的1 005例患者的临床和病理学资料。其中远端胆管癌组112例, 男性71例, 女性 41例, 年龄为[M(IQR)]65(15)岁(范围:40～87岁);胰头癌组893例, 男性534例, 女性359例, 年龄为64(13)岁(范围:16～91岁)。通过χ2检验、Fisher确切概率法、秩和检验或Log-rank检验分析两组患者临床病理学特征和术后生存时间之间的差异。采用倾向性评分匹配的方法, 按1∶1匹配后, 通过Kaplan-Meier法比较两组患者术后总体生存时间的差异。结果与胰头癌组相比, 远端胆管癌组手术时间短[240.0(134.0)min比261.0(97.0)min;Z=2.712, P=0.007], 联合静脉切除比例低[4.5%(5/112)比19.4%(173/893);χ2=15.177, P<0.01], 肿瘤最大径小[2.0(1.0)cm比3.0(1.5)c...     

基于Web of Science数据库胰瘘研究的文献计量与可视化分析

目的通过文献计量学方法对近二十年来胰瘘相关文献进行可视化分析,进而分析当前胰瘘的研究热点和发展趋势。方法利用Web of Science (WOS)数据库检索2001-01-01至2021-07-25有关"胰瘘"的SCI(科学引文索引)文献,通过CiteSpace(5.8.R1)软件及文献计量在线分析平台(Bibliometric.com)进行国家、机构、期刊发文量,国家、研究机构、作者合作网络,文献、作者、期刊共被引网络,以及关键词共现网络的分析,绘制相应可视化知识图谱。结果共有3507篇"Article(论著)"和483篇"Review(综述)"纳入分析,胰瘘相关SCI文献年发文量呈整体上升趋势,发文量前三位的国家分别是美国、日本、中国;海德堡大学(107篇)、四川大学(97篇)、阿姆斯特丹大学(96篇)占据研究机构发文量前三位;发文量最大的期刊为Journal of Gastrointestinal Surgery(233篇)、HPB(185篇)、World Journal of Surgery(144篇)。合作网络显示美国对外合作最多、最广泛;维罗纳大学、海德堡大学、浙江大学是对外合作最多的研究机构;合作频次较高的Bassi C(87次)、Malleo G(61次)、Salvia R(56次)等已形成一个关系密切的合作网络。共被引网络中高被引文献排名前三位的为:Bassi C(2017年)、Bassi C(2005年)、Callery MP(2013年);Bassi C(2446次)、Wente MN(909次)、Yeo CJ(893次)为该领域的高被引作者;Ann Surg(3313次)、Surgery(3141次)、J Gastrointest Surg(2667次)等为该领域高被引期刊。关键词共现网络中pancreaticoduodenectomy(1343次)、complication(1131次)、international study group(973次)等为高频词,是当前阶段的研究热点,ductal adenocarcinoma、laparoscopic pancreaticoduodenectomy等为研究新的趋势。结论近二十年,关于有关"胰瘘"的文献迅速增加,CiteSpace等可视化分析工具可以全面、直观地展示"胰瘘"的研究现状及发展趋势,为今后进一步研究提供参考依据。     

重症急性胰腺炎区域动脉灌注治疗的现状和应用

近年来 ,随着人们对重症急性胰腺炎 (SAP)发病机制的认识不断加深 ,以抑酶疗法等强调个体化的综合保守治疗日益受到重视 ,这种情况下 ,选择一个较好的给药途径 ,增强治疗效果 ,就显得甚为重要 ,区域动脉灌注 (localarterialinfusion ,LAI)疗法正是在这种要求下 ,伴随着介入放射     

胰腺癌术后局部复发再手术切除临床价值研究

目的 探讨胰腺癌术后局部复发再手术切除的临床价值。方法 回顾性分析2014年10月至2021年2月在南京医科大学第一附属医院胰腺中心施行的胰腺癌术后局部复发行再手术切除的20例病人临床资料（再手术切除组）,选取同期胰腺癌术后发现局部复发且复发时间≥9个月后未行手术治疗的20例病人作为对照组。分析再手术切除组术中、术后情况,比较分析两组病人生存时间的差异。结果 再手术切除组再手术方式为保留幽门的胰十二指肠切除术（PPPD）3例,标准胰十二指肠切除术（PD）2例,胰体尾切除术（DP）9例,复发灶局部切除术6例;手术时间为210.0（78.0）min（100.0～320.0 min）,术中出血量200（188）mL（50～600 mL）,术中输血率5.0%（1/20）。术后住院时间为12.5（9.5）d（7.0～49.0 d）,术后并发症发生率为30.0%（6/20）;无围手术期死亡;16例再次手术后行辅助化疗。再手术切除组术后病理学检查结果：复发肿瘤直径为2.6（1.1）cm（1.3～6.0 cm）;T分期：T1期 2例,T2期8例,T3期3例,T4期7例;N分期：N0期14例,N1期6例;肿瘤分化程度：中分化7例,低分化13例;环周切缘评估：R0切除9例,R1切除11例。术后生存：再手术切除组末次随访8例死亡,12例存活,首次术后中位总体生存时间为52.2个月,复发后中位生存时间为21.9个月。对照组20例病人末次随访18例死亡,2例存活,首次术后中位总体生存时间为21.9个月,复发后中位生存时间为10.5个月;再手术切除组首次术后总体生存时间（χ2=20.84,P<0.0001）和复发后生存时间（χ2=6.23,P=0.013）均优于对照组,差异均有统计学意义。结论 胰腺癌术后局部复发后再手术切除安全、有效,对术后9个月及以上的局部复发病例行再手术切除可能延长病人生存时间,值得进一步扩大样本量研究。     

缺氧微环境中胰腺星状细胞通过CCL7/CCR5轴促进胰腺癌侵袭

目的：探讨缺氧状态下胰腺星状细胞的单核细胞趋化因子7(C-C motif chemokine ligand 7,CCL7)表达情况及其对胰腺癌侵袭的影响。方法：通过组织块外植法获得人肿瘤相关胰腺星状细胞(pancreatic stellate cells,PSCs),于常氧(20% O2)、缺氧(1% O2)下培养,并通过人趋化因子抗体芯片技术分析其上清液中多种趋化因子的表达差异;通过加入不同浓度外源性人重组蛋白CCL7（0、1、10/100 ng/mL）研究趋化因子CCL7与胰腺癌细胞侵袭之间的浓度依赖关系;使用慢病毒转染、Transwell等技术着重分析缺氧PSCs过表达的CCL7促胰腺癌侵袭的作用。结果：相较于常氧培养PSCs,缺氧培养PSCs的条件培养基可显著增强胰腺癌侵袭能力（P＜0.05）;缺氧培养下PSCs上清液中CCL7相较于常氧培养显著高表达(fold change=2.38);外源性重组CCL7蛋白（0、1、10/100 ng/mL）可显著增加胰腺癌细胞(Miapaca-2、Colo357)侵袭能力,且呈浓度依赖关系。流式细胞术检测CCL7受体(CCR1、CCR2、CCR3、CCR5)表达,显示胰腺癌细胞(Miapaca-2、Colo357)仅有CCR5高表达。Western blot印迹显示,缺氧诱导PSCs高表达CCL7并促胰腺癌侵袭的过程中存在EMT改变,即E-cadherin表达下降,Vimentin、N-cadherin表达上升。结论：缺氧可诱导PSCs高表达CCL7,并通过CCL7/CCR5轴促进胰腺癌细胞迁移和侵袭,其机制可能与诱导胰腺癌上皮间质化有关。     

五聚体辅助胰腺癌黏蛋白4抗原HLA限制性CTL表位筛选

目的 筛选和验证黏蛋白4(MUC4)的有效抗原表位并证实MUC4抗原表位在体内的自然递呈作用.方法 采用生物信息学方法预测、T2细胞体外实验初步筛选后,通过人类组织相容性抗原(HLA)表位肽负载树突状细胞(DC)、酶联免疫斑点试验、细胞毒T淋巴细胞(CTL)试验验证相应表位的体外HLA限制性免疫效应;合成MUC4 HLA-A2限制性表位五聚体;采用该五聚体检测临床胰腺癌患者体内自然递呈的MUC4表位.结果 通过多参数表位预测得到了5个HLA-A*0201限制性表位并合成抗原肽,并经T2细胞稳定性试验初步验证;体外实验中,肽P1126诱导的CTL在不同的效靶比可特异性杀伤P1126负载的T2细胞和MUC4+、HLA-A2+的癌细胞株HCT-116;能够产生IFN-γ的细胞数(130.3±6.6)明显高于阴性对照组.五聚体检测发现,MUC4(+)患者外周血检出特异性CTL的频率显著高于MUC4(-)患者;但MUC4(+)患者中,HLA-A2(+)患者外周血检出特异性CTL的频率与HLA-A2(-)患者的差异无统计学意义.结论 肿瘤相关抗原MUC4的HLA-A*0201限制性CTL表位P1126,能诱导人外周血单核细胞的CTL反应,该活化的CTL能分泌免疫活性物质诱导特异性靶细胞的凋亡.P1126能在胰腺癌患者外周血中自然递呈,但HLA限制性不完全.     

胰腺恶性内分泌肿瘤的诊断和治疗经验

目的 总结胰腺恶性内分泌肿瘤的诊治经验.方法 回顾性分析1969年1月至2008年12月南京医科大学第一附属医院收治的38例胰腺恶性内分泌肿瘤患者的临床资料.其中胰岛素瘤6例,胰多肽瘤23例,胰高血糖素瘤4例和胰腺类癌5例.结果除1例胰岛素瘤外,所有患者经术前影像学检查发现胰腺占位;手术切除率87%(33/38),病理学检查提示肝转移7例,淋巴结转移5例,血管、淋巴管发现瘤栓1例,局部浸润28例.术后随访24例,1例胰岛素瘤局部复发再次手术切除,1例胰腺类癌肝转移再次射频治疗,其余无转移、复发表现.结论 影像学检查是胰腺内分泌肿瘤的主要诊断依据.其恶性程度应根据术前影像学表现、术中探查、术后病理检查并结合随访综合判定.恶性胰腺内分泌肿瘤恶性程度低,手术切除率高,预后良好.