瘤内注射脂质体IL-2基因复合物治疗实验性肝癌

利用瘤内注射法将治疗基因直接转入体内的肿瘤细胞并获得表达，一方面可以提高治疗基因对肿瘤细胞的针对性，减少对非靶细胞可能带来的毒副作用，另一方面也较简便，更适应临床应用的需要。本文初步探讨了瘤内注射脂质体-IL-2基因复合物在实验性肝癌基因治疗中的应用将IL-2基因克隆人真核表达载体pME18S，     

用定量PCR技术分析人体肾癌浸润T淋巴细胞限制性取用TCR Vβ基因格局

T淋巴细胞在特异性抗肿瘤免疫应答中起关键作用。肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)中富含肿瘤反应性T细胞,体外培养TIL并回输给带瘤宿主,可提高临床免疫治疗效果。但是TIL仍具有高度的异质性,只有从中找到并分离出那些在肿瘤抗原驱动下发生寡克隆扩增T细胞,才有希望在特异并性治疗方面取得突破。国外九十年代起采用分子生物学技术确定TIL中发生寡克隆扩增T细胞的TCR V区基因的特定结构,为肿瘤特异性T细胞免疫治疗开拓了新的前景。本文即是跟踪国外的这一进展,应用定量PCR技术,分析人体肾细胞癌(RCC)TIL的TCR受体谱结构及相应的寡克隆偏移格局。     

携带lipocalin2基因溶瘤腺病毒治疗结肠癌移植瘤的实验研究

目的 探讨携带lipocalin 2基因的溶瘤腺病毒ZD55-lipocalin 2对结肠癌移植瘤的治疗作用.方法 选用SW620细胞构建结肠癌移植瘤模型,随机分为ZD-55组、Ad-lipocalin 2组、ZD55-lipocalin 2组及PBS对照组,瘤内注射相应病毒后观察移植瘤生长及裸鼠生存情况,计算移植瘤瘤重和抑瘤率.通过TUNEL调亡检测、免疫组化检测血管内皮细胞生成因子表达和微血管计数来观察ZD55-lipocalin 2对大肠癌的抑制作用.结果 ZD-55病毒组、Ad-lipocalin 2病毒组和ZD55-lipocalin 2病毒组抑瘤率分别为16.4%、18.9%、40.4%,凋亡指数分别为20.7%、19.3%、77.0%,微血管密度分别为34±6、30±6、11±4.ZD55-lipoealin 2组与其他各组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ZD55-lipocalin 2促进大肠癌细胞凋亡、抑制微血管生成,明显抑制大肠癌移植瘤生长.

Abstract：

Objective To investigate the antitumor activity of the oncolytic adenovirus expressing lipocalin 2 gene for colorectal cancer in vivo.Methods BALB/C nude mice subcutaneously inoculated by SW620 cells and grown tumors were treated with injection of ZD-55 virus, Ad-lipocalin 2 virus and ZD55- lipocalin 2 virus respectively.The weight of implanted tumors and the tumor inhibition rate were calculated to evaluate the anti-tumor effect.Cell apoptosis was determined by TUNEL and the protein expression of VEGF and MVD were determined with immunohistochemistry.Results ZD55-lipocalin 2 inhibited the growth of transplanted tumor more significantly than ZD-55 virus and Ad-lipocalin 2 virus ( P ＜ 0.05 ).Tumor cell apoptosis was upregulated and the MVD reduced significantly in ZD55-lipocalin 2 group in contrast to the other two groups (P ＜0.05).Conclusions ZD55-lipocalin 2 induces apoptosis of colorectal tumor cells and inhibits tumor microvascular formation, slowing down the growth of transplantation tumors.     

肿瘤休眠细胞：复发根源和治疗靶标

随着肿瘤早期诊断及治疗水平的提高,肿瘤患者的无病生存率得以提高,但仍面临着较高的肿瘤复发风险。越来越多的证据显示,这些长期无病生存的肿瘤患者(甚至某些所谓健康人)的机体内存在着一种肿瘤休眠细胞,这些细胞被认为是导致肿瘤复发的主要根源。肿瘤休眠细胞是一群存在于患者或健康人群体内的数量极少且难以检测的静止细胞,目前对其形成的机制及休眠活动的时相规律均不十分清楚。对于患者而言,骨髓和外周血取材比较容易,所以人们通常会针对骨髓及外周血中的肿瘤休眠细胞建立相对敏感的检测方法。有证据显示,免疫抑制、新生血管生成及外科手术等因素可使肿瘤休眠细胞激活,从而引发肿瘤的复发和转移。肿瘤休眠细胞已成为我们根治肿瘤及预防肿瘤发生或复发的重要靶标。然而,由于处于休眠期的肿瘤细胞不发生活跃增殖,因此传统放、化疗不能将其有效清除,从而对肿瘤的彻底治愈造成了极大的困难。研究表明,免疫监控与肿瘤休眠现象高度相关,因此,针对肿瘤休眠细胞的肿瘤免疫过继细胞治疗将给肿瘤防治带来根本性的变革。我们相信,随着对肿瘤休眠细胞研究的不断深入,将会出现高效清除肿瘤休眠细胞或使肿瘤细胞永远休眠的崭新治疗方案。     

2′—5′寡腺苷酸抗病毒作用的重要意义

2′—5′寡腺苷酸是干扰素作用于细胞后产生的物质,其中主要为PPPA_2′P_5′A_2′P_5′A(2′—5′P_3A_3)。干扰素有抗病毒作用,而2′—5′P_3A_3有否抗病毒作用呢?本研究用CaCl_22和2′—5′P_3A_3结合物引入胚皮肤肌肉纤维母细胞,发现它能广泛地抑制病毒的复制,从而对被病毒感染的许多细胞均有一定的保护作用。我们所用RNA病毒包括流感病毒A_3(77—38)、A_1(77—78)、仙台病毒、鼻病毒、人     

塞来昔布联合IL-24武装的溶瘤腺病毒抗膀胱癌作用的体外研究

 目的：评估塞来昔布联合ZD55-IL-24对尿路上皮细胞癌T24的选择性杀伤效能。 方法：荧光显微镜观察ZD55-EGFP对细胞的转染效率。RT-PCR法测IL-24 mRNA在细胞中的表达。MTT法测塞来昔布联合 ZD55-IL-24对肿瘤细胞选择性抑制作用。流式细胞术检测细胞凋亡。 结果： ZD55-EGFP感染细胞后,在相同时间下T24中的荧光强度明显高于正常细胞。ZD55-IL-24转然后在相同时间下T24中IL-24mRNA表达量均高于HUVEC（t=-12.54,P<0.01）。ZD55-IL-24与塞来昔布联合用药对T24的抑制率最高（P<0.01）。T24细胞各组的抑制率也明显高于HUVEC组（F＝251.35,P<0.01）。联合用药组的细胞凋亡率也明显高于单用药组;T24细胞组凋亡率明显高于HUVEC组（P<0.001）。 结论：塞来昔布与ZD55-IL-24联合用药能最大程度地抑制T24细胞的增殖而对正常细胞影响轻微。这种抑制作用可能与细胞凋亡有关。     

肝病生物治疗策略

1 慢性病毒性肝炎的治疗 对乙型肝炎和丙型肝炎的治疗均以干扰素为首选药物,干扰素分α、β、γ三大类,其抗病毒作用α、β较好,γ最差。常用的α干扰素分α1,α2……(即αD、αA……),虽然α1又分为1a、1b、1c,且α2也可分为2a、2b、2c,但常用者为2b及1b,不管哪一种亚型,其治疗效果均较接近。从比活性方面分析,人工合成的组合干扰素活性最高,但按产生抗体的程度和疗效来看,最好的是天然α干扰素(纯度在98％以上者),     

癌症靶向治疗的新趋势

靶向性是癌症治疗的关键所在，新的治疗方案必须在特异性作用于肿瘤的同时降低对正常细胞的损伤，目前已取得了许多成果：1）肿瘤的靶向基因一病毒治疗结合了基因治疗和病毒治疗的各自优势。所用的病毒载体具有特异性靶向肿瘤的作用并在肿瘤细胞中大量复制和高效表达抗癌基因，如果用2个特异性启动子严格控制病毒只在肿瘤中表达，并加上2个有协同效应的抗癌基因即可达到极好的抗癌效果。2）在抗体治疗方面，运用第1代腺病毒高效表达Herceptin或是Rituxan抗体基因已取得成功，它可以大大地降低目前昂贵的抗体治疗费用。3）RNA干扰技术可以沉默致病基因，选用质粒或是病毒做载体可以达到长期及高效的基因沉默效果。4）具有自我更新能力的肿瘤干细胞是肿瘤复发的关键。5）人们也逐渐意识到肿瘤的形成过程是癌细胞与基质细胞相互作用的结果，以肿瘤基质为靶标的药物也显示出了良好的效果。6）针对蛋白酪氨酸激酶或是抗凋亡蛋白而研制的小分子靶向药物也在肿瘤分子治疗上取得了成功。7）纳米技术正以其独特性而引起广泛关注。总之，在众多新型治疗方案研发的同时，我们必须认识到仅仅靠一种方法是难以成功根治肿瘤的，各种靶向治疗方案之间的相互结合将成为肿瘤治疗的主攻方向。     

人白细胞介素10 cDNA重组质粒在细胞和大鼠体内的转染和表达

目的研究人白细胞介素10（hIL-10）cDNA重组质粒的转染和表达,为以后的基因治疗研究奠定基础。方法构建hIL-10 cDNA真核表达重组质粒pcDNA3-hIL-10后进行酶切和测序鉴定。以SA脂质体介导对照质粒pcDNA3及重组质粒pcDNA3-hIL-10转染COS7细胞和SD大鼠,用ELISA方法检测COS7细胞培养液及大鼠胰腺、肺和肝脏组织中hIL-10的含量。结果用pcDNA3-hIL-10质粒转染COS7细胞48 h后,在培养液中检测到hIL-10蛋白浓度为38 000 pg／mL,而对照组仅为55 pg／mL。hIL-10基因转染24 h后大鼠胰腺、肺和肝脏组织hIL-10的产生量达到峰值,以后逐渐下降,至96 h仍显著高于对照组（P〈0．05）,1周后降至正常水平。结论本研究构建的pcDNA3-hIL-10重组质粒可以在真核细胞及大鼠体内高效表达。