临床用间充质干细胞的质量控制研究

干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞.间充质干细胞(MSCs)是属于中胚层的一类多潜能干细胞,主要存在于结缔组织和器官间质中,如骨髓、脂肪、脐带、羊膜组织,间充质干细胞具有强大的增殖能力和免疫调节功能,在适宜的体内或体外环境下具有分化为肌细胞、肝细胞、成骨细胞、软骨细胞、基质细胞等多种细胞的能力.间充质干细胞由于具备多向分化和免疫调节功能,因此在治疗一些退行性和自身免疫性疾病等方面具有广阔的临床应用前景.     

人促血液血管细胞生成素的高效表达和快速纯化

目的 构建人促血液血管细胞生成素（HAPO）的表达载体，获得纯化的HAPO蛋白并研究其生物学功能。方法 通过PCR方法扩增人HAPO基因，克隆于不同的原核表达载体，ITPG诱导融合蛋白表达。NTA层析柱纯化融合蛋白，再经肠激酶裂解融合蛋白，阳离子交换层析纯化，得到纯化的重组蛋白。用培养的MO7e和ECV-304细胞检测蛋白活性。结果 HAPO可在pET32C中，获得稳定高效的可溶性表达。在Ecoli BL21（DE3）中，HAPO表达量可占菌体总蛋白的10％左右。重组蛋白80％是以可溶性蛋白形式存在。NTA层析柱纯化得到的HAPO融合蛋白，再经肠激酶裂解，阳离子交换层析纯化，得到90％以上纯度的重组HAPO蛋白，并且具有良好的生物学活性。结论 得到具有90％以上纯度的重组HAPO蛋白，而且，对MO7e和ECV-304细胞具有促增殖的作用。我们获得了纯化的人重组HAPO蛋白，为进一步研究其功能及临床应用打下基础。     

骨髓间充质干细胞对免疫介导再生障碍性贫血的治疗

背景：骨髓间充质干细胞具有免疫调节作用,可以影响淋巴细胞和其他免疫细胞的功能,同时其分泌的因子尚有支持造血的作用。而再生障碍性贫血的发生、发展与T细胞功能亢进引起的造血干、祖细胞凋亡密切相关。目的：比较骨髓间充质干细胞和全骨髓细胞治疗免疫介导再生障碍性贫血小鼠的疗效。方法：建立BALB/C小鼠免疫介导再生障碍性贫血模型。将BALB/C小鼠随机分成正常组、对照组、注射骨髓间充质干细胞和注射全骨髓细胞组。观察骨髓间充质干细胞和全骨髓细胞对实验动物的疗效及骨髓的造血组织容量、脂肪细胞和血窦结构。结果与结论：再生障碍性贫血模型小鼠至第20天,对照组全部死亡,骨髓间充质干细胞组4例死亡,全骨髓细胞组1例死亡。②骨髓间充质干细胞组和全骨髓细胞组存活小鼠,其体质量变化趋势、血细胞计数、骨髓造血功能恢复均无显著性差异。③检测骨髓间充质干细胞组和全骨髓细胞组脾脏CD4＋T细胞、CD8＋T细胞、CD4＋/CD8＋的比值示无差异,与正常小鼠相比,骨髓间充质干细胞组外周血CD4＋T细胞、CD8＋T细胞水平有下降趋势。全骨髓细胞组CD8＋T细胞水平明显下降。提示,单独使用骨髓间充质干细胞治疗能够使部分再生障碍性贫血模型小鼠症状改善、造血恢复。骨髓间充质干细胞治疗有效率不如全骨髓细胞,但两组无显著性差异。     

脐血造血干细胞移植抗白血病作用的研究

HLA匹配同胞供者造血干细胞移植 (HSCT)是治疗血液系统恶性疾病的有效方法之一 ,但由于供者来源的限制 ,约 2 /3的患者找不到匹配的同胞供者而不能进行HSCT ;而采用其他来源如HLA匹配相关供者及无关供者进行HSCT的成功率较低 ,而且配型时间长 ,无关供者HSCT易并发严重移植物抗宿主病 (GVHD)导致早期死亡、移植后生活质量下降和并发严重感染等。脐血干细胞由于来源广泛 ,寻找相合脐血花费时间短 ,故近年来脐血造血干细胞移植 (UCBSCT)逐渐成为外周血或骨髓造血干细胞移植的一种有效替代手段〔1〕。研究认为UCBSCT用于儿童和…     

CD151对人脐带来源间充质干细胞生物学特性的影响

 目的：探讨CD151对人脐带来源间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs）生物学性状的影响。方法：使用siRNA干扰hUC-MSCs 表面CD151,实验分为实验组（siRNA-CD151组）和对照组（siRNA-NC组）;流式细胞术检测干扰72 h后hUC-MSCs CD151及其它细胞表型,von Kossa和油红O染色检测体外成骨、成脂诱导分化情况;流式细胞术分析细胞周期变化;real-time PCR检测hUC-MSCs CD151、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）、转化生长因子β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）、环氧合酶2（cyclooxygenase 2,COX-2)和吲哚胺2,3-双加氧酶（indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO）mRNA的表达量;ELISA检测hUC-MSCs HGF分泌量。结果：(1) 流式细胞术检测发现干扰72 h hUC-MSCs实验组CD151（11.97±2.63 vs 95.66±1.56;P<0.01）和CD105（93.66±0.21 vs 83.37±0.71;P<0.05）较对照组显著降低;real-time PCR 检测hUC-MSCs CD151 mRNA变化和流式结果一致。(2)给予siRNA-CD151后能够减缓细胞周期进展,表现为细胞G1期增多,S期减少。(3)实验组hUC-MSCs HGF和TGF-β1表达量低于对照组（P<0.01）,而COX-2表达量升高（P<0.05）,IDO无明显改变;ELISA检测显示实验组hUC-MSCs HGF分泌量较对照组下降（P<0.01）。结论：体外干扰CD151后hUC-MSCs 仍保持干细胞表型,体外成脂诱导分化能力无明显变化,但成骨诱导分化能力、增殖能力和相关免疫调节因子表达发生改变。     

实体肿瘤的抗血管新生基因治疗现状及进展

实体肿瘤的抗血管新生基因治疗就是外源基因靶向血管内皮细胞，直接作用于肿瘤细胞生长所依赖的新生血管，而达到治愈肿瘤的目的，同时也最大程度地减少了抗血管新生物质的全身毒副作用，本文不实体肿瘤的抗血管新生基因治疗现状作一综述。     

餐后血脂,脂蛋白与凝血

餐后血浆脂代谢主要以富含甘油三酯的脂蛋白(TGRLP)及其残位升高为最明显,餐后阶段脂蛋白代谢又和动脉粥样硬化的发生发展以及动脉血栓的形成有潜在的联系。同时,血小板和血浆中的维生素K依赖性凝血因子直接或间接参与了动脉粥样硬化以及血栓形成的过程。本文就近年来在餐后血脂,脂蛋白与凝血相关性方面的研究成果作一综述。     

原血干细胞的发育和分化

原血干细胞是造血干细胞和血管干细胞的共同祖先。造血发生和内皮细胞发育相伴随。分离和诱导分化原血干细胞,研究其发育分化调控机制,进而阐明其生物学特性,将为原血干细胞的基础研究和临床应用铺平道路。     

脐带血巨核祖细胞的体外扩增

目的联合血小板生成素(TPO)、白细胞介素-11(IL-11)和肝素用脐带血CD34 细胞定向扩增巨核祖细胞。方法采用免疫磁珠法(MACS)分选CD34 细胞,用TPO、IL-11和肝素定向扩增巨核祖细胞,巨核祖细胞集落分析(CFU-MK)测定巨核祖细胞扩增倍数,流式细胞术检测巨核祖细胞分化过程中不同细胞组群(CD34 、CD41a 、CD61 、CD34 CD41a 和CD41a CD61 )的变化,免疫组织化学染色(CD41a)和透射电镜观察巨核细胞形态及趟微结构,血小板体外活化实验及非肥胖性糖尿病／严重联合免疫缺陷鼠异种体内移植实验评价扩增的巨核祖细胞功能。     

突变型人胰岛素原基因的克隆及其腺病毒载体的构建

目的:构建含有定点突变的人胰岛素原基因的腺病毒表达载体.方法:首先利用RT-PCR方法从正常流产胎儿胰腺组织获取野生型人胰岛素原eDNA;然后通过重叠延伸PCR方法在人胰岛素原cDNA上产生2个突变位点,使突变的eDNA编码的蛋白质含弗林蛋白酶的识别位点,该突变型胰岛素原cDNA片段命名为INS-M2;最后将INS-M2亚克隆至腺病毒载体系统的穿梭载体的多克隆位点上,并与骨架载体共转染至细菌内,通过细菌内同源重组得到重组载体.结果:HindⅢ和Xho I酶切、Poc I酶切及测序均证实载体pAd-INS-M2构建成功.结论:构建的含定点突变人胰岛素原基因腺病毒载体pAd-INS-M2为进一步转染非胰岛β细胞,对糖尿病进行基因治疗奠定了基础.