急性梗阻性化脓性胆管炎肝组织氧自由基动态变化初探

实验以急性梗阻性化脓性胆管炎兔模型为基映,动态观察了在急性梗阻性化脓性胆管炎情况下机体氧自由基的动态变化趋势。发现在急性梗阻性化脓性胆管炎的过程中,动物肝组织的部分氧自由基随时间推移呈持续上升的趋势。文章讨论了这种现象与急性梗阻性化脓性胆管炎对机体造成的巨大损害之间的可能关系。     

急性脑血管疾病后血糖升高的意义和机制

急性脑血管疾病后常发生高血糖。高血糖可提高脑组织内葡萄糖浓度，通过加重乳酸酸中毒、自由基损伤、抑制缺血脑组织ＡＴＰ的恢复、减少局部脑血流量等机制加重脑损伤。原因是中线结构受刺激和应激反应造成的皮质醇、生长素、胰高血糖素的升高和Ｔ３降低     

氧化应激及抗氧化物在年龄相关性黄斑变性中的作用

氧化应激反应直接参与了年龄相关性黄斑变性(aged-related macular degeneration,AMD)的病理过程,其中以抗氧化剂、抗氧化酶为主组成的抗氧化防御系统对预防AMD的发生发展极为重要.现就氧化应激及抗氧化物在AMD发生发展及防护中的作用机制作一综述.     

α-倒捻子素对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用

目的：研究α-倒捻子素对过氧化氢(H₂O₂)诱导的人视网膜色素上皮细胞株ARPE-19氧化损伤的保护作用。

方法：分别用不同浓度的α-倒捻子素和H₂O₂处理ARPE-19,CCK8法检测α-倒捻子素和H₂O₂对ARPE-19细胞毒性作用。不同浓度的α-倒捻子素预处理ARPE-19,再用200μmol/L H₂O₂处理24h,观察细胞活性变化。流式细胞仪检测细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平变化,免疫印迹法(Western blot)检测NF-κB蛋白表达变化。

结果：CCK8法检测结果显示：当α-倒捻子素浓度在0～12μmol/L时,ARPE-19活性无明显变化; 当浓度达到16μmol/L时,细胞活性开始下降(P<0.05)。H₂O₂诱导后,当α-倒捻子素浓度在0～16μmol/L之内时,α-倒捻子素预处理均可提高ARPE-19细胞活性。ROS结果表示：H₂O₂诱导后,ROS表达量增高(P<0.05); 8和12μmol/L α-倒捻子素预处理,均可有效清除H₂O₂诱导产生的ROS(P<0.05)。Western blot结果显示：H₂O₂诱导后NF-κB蛋白表达增高(P<0.05),12μmol/Lα-倒捻子素预处理可以继续上调H₂O₂诱导后ARPE-19的NF-κB蛋白表达(P<0.05)。

结论：H₂O₂诱导ARPE-19细胞氧化损伤,造成细胞活性下降,ROS表达量增加,经过α-倒捻子素预处理后,可有效提高细胞活性,清除ROS,活化NF-κB。     

灵芝多糖肽对培养乳大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的研究灵芝多糖肽(GLPP)对培养乳大鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用。方法用出生1~3 d的SD乳大鼠进行心肌细胞原代培养,取培养3~4 d的心肌细胞分为正常对照组、H/R组和GLPP给药组(12.5,25,50和100 mg·L-1)。MTT法检测细胞存活率;电镜检测细胞形态改变和线粒体损伤;用AnnexinⅤ-FITC/PI双标记细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡百分率;以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,用激光扫描共聚焦显微镜观察心肌细胞内钙离子荧光强度变化;以活性氧(ROS)敏感的荧光探针2,7-二氢二氯荧光素(DCFH-DA)标记细胞,激光共聚焦显微镜下观察ROS含量变化。结果与正常对照组比较,H/R组细胞存活率降低(P<0.05);GLPP 12.5,25,50和100 mg·L-1组细胞存活率与H/R组比较明显增加(P<0.01)。与正常对照组比较,H/R组可见线粒体损伤,GLPP给药组可以减轻线粒体损伤。流式细胞仪检测结果表明,与正常对照组比较,H/R组细胞凋亡率增加(P<0.01);GLPP组与H/R组比较细胞凋亡率明显减小(P<0.01)。与正常对照组比较,H/R组[Ca2+]i增加,细胞内ROS含量增高(P<0.01);与H/R组比较,GLPP给药组细胞[Ca2+]i减少,细胞内ROS含量降低(P<0.01)。结论GLPP对H/R损伤的乳大鼠心肌细胞具有保护作用,其作用机制可能与减少细胞内自由基含量和减轻细胞内钙超负荷有关。     

三氧化二砷对小鼠卵母细胞线粒体DNA氧化损伤作用及其机制

目的研究三氧化二砷(As2O3)对小鼠卵母细胞线粒体DNA(mt DNA)的氧化损伤作用及其作用机制。方法 1体外实验挤压正常小鼠卵巢获取卵母细胞,培养成熟后,分为As2O31和2μmol·L-1单独处理组、N-乙酰半胱氨酸(NAC)5 mmol·L-1处理组、2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基(Tempo)1 mmol·L-1处理组、As2O31或2μmol·L-1+NAC 5 mmol·L-1共处理组、As2O31或2μmol·L-1+Tempo 1 mmol·L-1共处理组,培养20 h后,收集成熟卵母细胞进行后续实验指标测定。2体内实验雌性昆明小鼠ip给药,分为As2O31和2 mg·kg-1染毒组、As2O31或2 mg·kg-1+NAC 200 mg·kg-1组,每日1次,连续60 d,椎脱臼处死取卵母细胞。2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐荧光染色检测细胞内活性氧(ROS)水平;8-羟基脱氧鸟苷酶(8-OHd G)联免疫反应检测提取mt DNA中8-OHd G含量;Western蛋白印迹法检测DNA聚合酶γ(Polγ)和线粒体转录因子A(mt TFA)的蛋白表达;β-半乳糖苷酶(β-Gal)报告基因检测试剂盒检测溶酶体活力。结果 1体外实验As2O3单独处理组小鼠卵母细胞中ROS和8-OHd G含量升高,Polγ和mt TFA蛋白表达水平降低(P<0.05);而As2O3与NAC或Tempo共处理组卵母细胞中ROS含量减少,8-OHd G水平降低,Polγ和mt TFA蛋白表达水平显著上调(P<0.05)。2体内实验As2O3单独处理组小鼠卵母细胞中ROS和8-OHd G含量升高,Polγ和mt TFA蛋白表达水平降低(P<0.05);As2O3与NAC共处理组小鼠卵母细胞中ROS含量减少,8-OHd G水平降低,Polγ和mt TFA蛋白表达水平提高(P<0.05)。As2O3单独处理组体外培养的卵母细胞,β-Gal活力显著提高(P<0.05),而As2O3与NAC或Tempo共处理组β-Gal活力显著下降(P<0.05)。体内实验各处理组β-Gal活力无显著差异。结论砷暴露可诱导小鼠卵母细胞大量生成ROS,抑制线粒体基因组修复与复制相关因子Polγ及mt TFA的表达,同时改变溶酶体活力,最终诱发mt DNA氧化损伤。     

扇贝糖胺聚糖对OX-LDL诱导血管内皮细胞氧化应激损伤的抑制作用机制研究

目的:研究扇贝糖胺聚糖(SS-GAG)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)损伤的抑制作用机制。方法:试验分为阴性对照组、模型组与SS-GAG高、中、低浓度(质量浓度分别为200、100、50 mg/L)组,后3组以不同质量浓度SS-GAG培养细胞12 h后,以50μmol/L氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)培养细胞24 h。以MTT法检测细胞活力;测定乳酸脱氢酶(LDH)活性;流式细胞仪测定活性氧(ROS)水平;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)测定氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)m RNA表达;Western blot测定NOX4蛋白表达。结果:与阴性对照组比较,模型组细胞活力减弱,LDH活性增强,ROS水平升高,LOX-1 m RNA表达增强,NOX4蛋白表达增强,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,SS-GAG高、中、低浓度组细胞活力增强,LDH活性减弱,ROS水平降低,LOX-1 m RNA表达减弱,NOX4蛋白表达减弱,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:SS-GAG有一定的保护血管内皮细胞作用,其机制可能与经LOX-1/NOX4途径抑制ROS产生、减轻氧化应激损伤有关。     

Salinomycin对乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/DOX的增殖抑制作用及机制

目的本研究旨在探讨Salinomycin对乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/DOX增殖和凋亡的影响及可能作用机制。方法 MTS实验检测Salinomycin对MCF-7/DOX细胞增殖的影响;Annexin V-FITC/PI染色检测Salinomycin对MCF-7/DOX耐药细胞凋亡的影响;DCFH-DA染色检测Salinomycin对MCF-7/DOX耐药细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生的影响;JC-1法测定细胞线粒体膜电位;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白BAX、BCL-2、caspase-3和caspase-9的表达变化。结果 Salinomycin能明显抑制MCF-7/DOX耐药细胞增殖,且具有浓度依赖性;流式分析发现Salinomycin能够诱导MCF-7/DOX细胞凋亡,增加细胞内ROS水平,降低细胞线粒体膜电位;与对照组相比较,Salinomycin处理明显抑制BCL-2的表达,上调BAX、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的蛋白表达;抗氧化剂N-acetylcysteine(NAC)则逆转上述作用。结论 Salinomycin能够诱导MCF-7/DOX细胞凋亡,其机制可能与Salinomycin诱导ROS的产生,激活线粒体凋亡途径有关。     

五味余甘子散对大鼠心肌缺血再灌损伤的保护作用

目的探讨藏方五味余甘子散对心肌缺血再灌损伤大鼠的保护作用。方法将96只SD大鼠随机均分成五味余甘子散高、中、低剂量组及伪手术组、模型组和阳性对照组,连续给药10 d,在末次给药24 h后,进行造模,结扎左冠前室间支30min,复灌40 min。测定血清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的含量及心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性和丙二醛(MDA)的含量,并比较各组心肌的超微结构变化。结果五味余甘子散能显著降低血清中LDH和CK的含量,同时能提高心肌组织中SOD、GSH-Px的活性,降低MDA的活性。结论五味余甘子散对大鼠心肌缺血再灌损伤有保护作用,其机制可能与抑制自由基相关酶有关。     

香烟烟雾可吸入微粒对大鼠支气管肺组织的氧化损伤研究

目的探讨香烟烟雾可吸入微粒对支气管肺组织的氧化损伤作用。方法采集并分析香烟可吸入微粒后,染毒大鼠,观察肺组织病理形态的变化,测定肺泡灌洗液中白细胞总数和分类计数及肺匀浆中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果香烟组的病理改变以炎症为主,各观察指标与对照组比较有差异。结论香烟烟雾可吸入微粒对大鼠气道及肺组织的刺激引发炎性反应,而活性氧介导的炎症反应是其致炎作用机制之一。