普萘洛尔影响人脐静脉内皮细胞分泌血管内皮细胞生长因子的胞内信号机制研究

目的:通过研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)的胞内信号转导途径来初步探讨普萘洛尔治疗血管瘤的疗效机制。方法:以离体培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)-12为模型,用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)法检测VEGF促进HUVEC-12细胞增殖的最佳浓度,在其基础上用不同浓度的普萘洛尔干预后用Western blot测定磷酸化细胞外信号调节激酶(Jun激酶,JNK)和p38蛋白的变化。结果:不同浓度VEGF对HUVEC-12细胞有促进增殖作用,VEGF浓度为20μg/L时最为明显,其增殖率为16.6%(P0.001)。以此浓度为基础加入不同浓度的普萘洛尔干预后,与空白对照组相比,磷酸化JNK(p-JNK)和磷酸化p38(p-p38)表达随普萘洛尔浓度增高而降低,并且均在普萘洛尔浓度为16μg/m L时表达受到抑制。结论:普萘洛尔可能在高浓度时通过影响血管内皮细胞的胞内JNK和p38信号转导,而参与VEGF作用下的血管内皮细胞增殖。     

肝细胞癌中miR-942-5p的表达及其与患者恶性特征及不良预后的关系

目的:探讨微小RNA-942-5p(miR-942-5p)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其功能。方法:用实时定量PCR检测西安交通大学第一附属医院样本库保存的73例HCC组织和对应癌旁组织中miR-942-5p的表达。分析miR-942-5p表达与HCC患者临床病理资料的关系,同时分析TCGA数据库中miR-942-5p表达与HCC患者总生存率的关系。Transwell小室检测干扰miR-942-5p表达后HCC细胞迁移和侵袭能力的变化,StarBase V3.0网站和荧光素酶报告基因质粒预测分析miR-942-5p的下游靶点,并用Western blot验证。结果:miR-942-5p表达量在HCC组织中明显高于对应癌旁组织(2.390 vs. 1.764,P0.05)。miR-942-5p表达量与HCC患者肿瘤数目、血管浸润和临床分期明显有关(均P0.05)。miR-942-5p高表达HCC患者总生存率明显低于miR-942-5p低表达HCC患者(19.535%vs. 53.873%,P0.05)。沉默miR-942-5p表达后,肝癌HCCLM3和MHCC97H细胞迁移和侵袭能力明显减弱(均P0.05)。预测与分析结果显示,扣针蛋白5(FBLN5)是miR-942-5p的直接下游靶点(P0.05),沉默miR-942-5p表达导致HCCLM3和MHCC97H细胞中FBLN5表达增加。结论:miR-942-5p在HCC组织中表达异常升高并与恶性临床特征和不良预后密切相关,机制可能与miR-942-5p抑制FBLN5表达促进HCC细胞迁移和侵袭有关。     

一测多评法同时测定宁神定志丸中8种成分

目的建立一测多评法同时测定宁神定志丸(远志、党参、石菖蒲等)中远志口山酮Ⅲ、3,6′-二芥子酰基蔗糖、党参炔苷、β-细辛醚、α-细辛醚、去氢土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸的含有量。方法该药物70%甲醇提取液的分析采用Kromasil C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-0.05%磷酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长210、257、269、320 nm。以3,6′-二芥子酰基蔗糖为内标,计算其他7种成分的相对校正因子,测定其含有量。结果 8种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 1),平均加样回收率96.93%～100.04%,RSD 0.59%～1.44%,一测多评法所得结果与外标法接近。结论该方法简便、准确、可靠,可用于宁神定志丸的质量控制。     

淫羊藿总黄酮改善自然衰老大鼠睾丸支持细胞分泌功能衰退的作用

目的研究淫羊藿总黄酮(TFE)对衰老睾丸支持细胞(Sertoli细胞)分泌功能衰退的影响,并从肌醇需酶1α(IRE1α)/X盒结合蛋白1(XBP1)信号通路探讨其分子机制。方法将36只SPF级18月龄SD雄性大鼠随机分为自然衰老组和TFE 10及40 mg·kg~(-1)组,每组12只;另取10只2月龄大鼠作为壮龄对照组。每天定时ig给TFE 1次,每5 d间隔2 d再继续ig给药,给药共计4个月。计算睾丸指数;HE染色观察睾丸组织形态;实时定量PCR和Western印迹法检测睾丸组织中胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、骨形态形成蛋白4(BMP4)及干细胞因子(SCF)mRNA和蛋白表达水平;检测睾丸组织中磷酸化IRE1α(p-IRE1α)和XBP1蛋白表达水平;免疫荧光法检测睾丸组织内Sertoli细胞数量和p-IRE1α定位。结果与壮龄对照组比较,自然衰老组大鼠睾丸指数显著降低(P<0.01);与自然衰老组相比,TFE 40 mg·kg~(-1)组睾丸指数显著升高(P<0.05)。HE结果显示,自然衰老组睾丸曲细精管的形态结构紊乱,部分生精细胞发生脱落;TFE给药组能改善睾丸曲细精管的形态结构。实时定量PCR结果显示,与壮龄对照组比较,自然衰老组Sertoli细胞分泌因子GDNF和SCF mRNA表达水平均显著下调(P<0.01);Western印迹结果显示,GDNF,BMP4和SCF蛋白显著下调(P<0.01)。与自然衰老组相比,TFE给药组分泌因子mRNA和蛋白表达水平均显著上调(P<0.05,P<0.01)。Western印迹结果显示,与壮龄对照组比较,自然衰老组睾丸组织中p-IRE1α和XBP1蛋白表达均显著下调(P<0.01);与自然衰老组相比,TFE给药组p-IRE1α和XBP1蛋白表达显著上调(P<0.01)。免疫荧光结果显示,壮龄对照组、自然衰老组和TFE给药组Sertoli细胞数量无显著差异。不仅在生精细胞胞质广泛表达,在Sertoli细胞胞质亦有表达。结论 TFE可显著改善自然衰老所致大鼠睾丸Sertoli细胞分泌功能衰退,其机制可能与调节IRE1α/XBP1信号通路有关。     

TRPV1对H9c2心肌细胞缺氧复氧后凋亡的影响及机制

目的 探讨瞬时受体电位阳离子通道V亚族成员1(TRPV1)对H9c2心肌细胞缺氧复氧后凋亡的保护作用及可能机制。 方法 将H9c2心肌细胞随机分为对照组、模型组(缺氧/复氧组)、辣椒素(TRPV1激活剂)组(缺氧/复氧+辣椒素组)、辣椒素+LY组[缺氧/复氧+辣椒素+LY294002(PI3k抑制剂)组]。采用CCK-8法测定心肌细胞存活率，采用流式细胞仪测定各组心肌细胞凋亡率，采用Western blot法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定各组细胞caspase-3、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸化-蛋白激酶B(p-Akt)、蛋白激酶B(Akt)水平。 结果 与对照组比较，模型组、辣椒素组、辣椒素+LY组心肌细胞存活率和Bcl-2水平降低(均P<0.05)，细胞凋亡率和caspase-3、Bax、p-Akt水平升高(均P<0.05)；与模型组比较，辣椒素组心肌细胞存活率和Bcl-2、p-Akt水平升高(均P<0.05)，细胞凋亡率和caspase-3、Bax水平降低(均P<0.05)；模型组与辣椒素+LY组各指标比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。 结论 TRPV1可抑制缺氧复氧后H9c2心肌细胞凋亡，其机制可能与TRPV1激活磷脂酰肌醇3-激酶(PI3k)/Akt信号通路有关。      

宫颈癌组织中hPygo2蛋白与HR-HPV病毒定量的关系

目的 研究宫颈癌组织中hPygo2蛋白与高危型人乳头状瘤病毒(HR-HPV)病毒定量的关系。 方法 以2016年3月－2018年3月永康市妇幼保健院收治的宫颈癌患者79例为研究对象,作为宫颈癌组。另取同期于该院接受治疗的宫颈低度鳞状上皮内病变(LSIL)与宫颈高度鳞状上皮内病变(HSIL)患者各50例,作为LSIL组与HSIL组。再取同期于该院接受子宫切除术治疗的良性病变患者50例作为对照组。分别采用免疫组织化学法检测不同组织中hPygo2蛋白表达情况,采用第二代杂交捕获技术(HC2)法检测研究组、LSIL组与HSIL组HR-HPV病毒定量情况。并分析宫颈癌组织中hPygo2蛋白与HR-HPV病毒定量的相关性。 结果 宫颈癌组、HSIL组、LSIL组以及对照组的组织中hPygo2蛋白阳性表达率分别为87.34%(69/79)、72.00%(36/50)、28.00%(14/50)、12.00%(6/50),呈逐渐降低趋势,差异有统计学意义(χ²=91.144,P＜0.05)。宫颈癌组、HSIL组、LSIL组HR-HPV病毒阳性表达率分别为97.46%(77/79)、92.00%(46/50)、64%(32/50),呈逐渐降低趋势,差异有统计学意义(χ²=31.290,P＜0.05)。经Spearson秩相关性分析可得:宫颈癌组织中hPygo2蛋白和HR-HPV病毒定量存在正相关关系(r_s=0.683,P<0.01)。 结论 宫颈癌组织中hPygo2蛋白存在明显高表达,且与HR-HPV病毒定量存在正相关。临床工作中可通过对上述两项指标进行联合检测,从而有利于诊断宫颈癌。     

探讨多基因甲基化检测评估非小细胞肺癌的临床诊断价值

目的探讨多基因甲基化水平与非小细胞肺癌(NSCLC)发生相关性及其诊断价值。方法收集60例确诊的NSCLC患者并设置为实验组,另取60名健康人群作为对照组,采集所有患者清晨空腹血,通过甲基化特异PCR(MSP)技术,检测血清DAPK、P16、Runx3基因甲基化情况,并评估比较NSCLC患者临床病理特征与单基因甲基化检测和多基因甲基化联合检测的关系。结果 NSCLC患者血清DAPK、P16、Runx3基因甲基化率明显高于正常人群。基因甲基化联合检测呈现出更高的检出率、特异性和准确度。DAPK基因启动子甲基化与NSCLC患者分化程度有关(P=0.03);P16和Runx3基因启动子甲基化在年龄、病理分型和TNM分期差异有统计学意义(P<0.05),而多基因甲基化比例仅与NSCLC患者年龄相关(P=0.028)。结论 DAPK、P16、Runx3基因高甲基化水平为NSCLC发生的高危因素,且其基因甲基化检测能够更准确的应用于早期NSCLC诊断。     

中性粒细胞与淋巴细胞比值预测急性腔隙性脑梗死患者病情进展的临床价值

目的分析中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)对急性腔隙性脑梗死患者病情进展的预测价值。方法根据病情进展与否将2012年2月～2017年1月收治的230例急性腔隙性脑梗死患者分为进展组(40例)与非进展组(190例),记录各组中性粒细胞绝对值、淋巴细胞绝对值等指标,计算NLR。受试者工作特征(ROC)曲线分析NLR等对急性腔隙性脑梗死患者病情进展预测的特异度、敏感度,Pearson相关性分析NLR等指标与mRS评分的关系。结果进展组NLR、白细胞计数、中性粒细胞绝对值均显著高于非进展组(P 0. 05);淋巴细胞绝对值显著低于非进展组(P 0. 05)。NLR对进展性腔隙性脑梗死(PLI)预测曲线下面积(AUC)为0. 800,最佳临界值3. 25,敏感度85. 06%,特异度70. 68%;白细胞计数、中性粒细胞绝对值、淋巴细胞绝对值对PLI预测AUC分别为0. 650、0. 745、0. 615。进展组预后良好率显著低于非进展组(P 0. 05)。NLR、中性粒细胞绝对值、白细胞计数与mRS评分正相关(P 0. 05)。结论 NLR值对急性腔隙性脑梗死患者病情进展有一定的预测价值,有可能作为患者预后评估的有效指标。