注射用丹参多酚酸UPLC的指纹图谱与组分分析

目的建立注射用丹参多酚酸的UPLC指纹图谱分析方法,并结合Q-TOF-MS法及IT-TOFMS法对其化学成分进行定性分析。方法采用水(含体积分数0.2%甲酸)-乙腈(含体积分数2%甲醇)为流动相,梯度洗脱,采用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C_(18)(150 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱,同时采用LC-Q-TOF-MS法提供的化合物准确相对分子质量和LC-Q-TOF-MS法分析获得的化合物多级质谱信息对注射用丹参多酚酸进行成分分析。建立了注射用丹参多酚酸的UPLC指纹图谱集与共有模式,并以夹角余弦与相关系数对21批注射用丹参多酚酸样品进行相似度评级。结果鉴定酚酸类化合物23个;21批样品的相似度均大于0.960,确立了指纹图谱共有模式中的23个特征吸收峰。结论本方法可用于注射用丹参多酚酸的质量控制。     

去氢毛钩藤碱在大鼠体外肠道菌群中代谢产物的鉴定

目的研究去氢毛钩藤碱在大鼠体外肠道菌群中的代谢途径,阐明肠道菌群对去氢毛钩藤碱吸收和代谢的影响。方法采用UPLC/Q-TOF MS技术,鉴定并推测了去氢毛钩藤碱在大鼠体外肠道菌群培养液中的代谢产物。采用HSS C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),以乙腈(A)-体积分数0.2%甲酸水溶液(B)为流动相梯度洗脱,流速为0.5 m L·min-1,采用ESI离子源,正离子模式下检测。结果通过色谱保留时间及质谱碎片等信息,在大鼠肠道菌群中鉴定了原型化合物去氢毛钩藤碱,以及经还原、氮氧化和羟基化反应后得到的3个微量代谢产物。结论建立了采用UPLC/Q-TOF MS技术鉴定去氢毛钩藤碱在大鼠体外肠道菌群中代谢产物的方法,为吲哚类生物碱在体内吸收和代谢机制的研究提供试验依据。     

QuEChERS-气相色谱法测定果蔬中7种拟除虫菊酯类农药残留量的研究

目的建立应用QuEChERS前处理法处理样品,采用气相色谱电子捕获检测器测定蔬菜水果中7种拟除虫菊酯类农药残留量的分析方法。方法样品经乙腈均质提取,氮吹浓缩至近干,加入丙酮定容至3.0 mL后,过QuEChERS柱进行分散固相萃取,净化液用GC-ECD进行分析测定。结果 7种拟除虫菊酯类农药在0.10~1.00μg/mL浓度范围内,标准曲线线性关系良好,相关系数r为0.9985~0.9995,最低检出质量浓度0.0010~0.0023mg/kg,在3个浓度水平上对方法的回收率进行测定,回收率78.1%~97.4%,相对标准偏差(RSD)1.9%~8.4%。结论该方法具有净化效果好、选择性好、精密度和准确好等优点,且操作简单、快捷,适合对蔬菜水果中7种拟除虫菊酯类农药残留量定性定量分析。     

梯度淋洗离子色谱法测定乳与乳制品中硫氰酸根

目的采用Ionpac AS19色谱柱,建立一种大体积进样,电导检测乳制品中硫氰酸根的梯度淋洗离子色谱法。方法样品加入乙腈沉淀蛋白,冷冻离心,上清液通过RP柱去脂肪,经0.22μm微孔滤膜净化后直接进样。结果低浓度样品检测方法的线性范围0.025~0.50 mg/L,r=0.9999;高浓度样品检测方法的线性范围0.50~5.0 mg/L,r=0.9996。相对标准偏差0.25%~3.40%,平均加标回收率91.3%~97.6%。方法的检出限为0.003 mg/L(0.06 mg/kg),定量限为0.01 mg/L(0.20 mg/kg)。结论该方法灵敏度好、检出限低,适用于乳与乳制品中硫氰酸根含量的测定。     

HPV、TCT 及 DNA 检测对早期宫颈癌诊断的意义

〔摘 要〕 目的：分析人乳头状瘤病毒（HPV）基因分型、液基薄层细胞学检查（TCT）及脱氧核糖核酸（DNA）倍体 定量检测对早期宫颈癌诊断的意义。方法：回顾性分析江门市妇幼保健院 2019 年 1 月至 2020 年 10 月期间收治的疑似宫 颈癌患者 257 例，各患者均接受导流杂交 HPV 基因分型、TCT、DNA 倍体定量检测以及病理检查，以病理检查为金标准 分析结果。结果：三者联合检测的灵敏度、特异度均高于任一方法单独检测，差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。结论： 临床检测早期宫颈癌可考虑采用 HPV 基因分型、TCT、DNA 倍体定量检测三者联合的方式，所得检测效果理想，可提升 筛查准确性。     

阴离子交换树脂对人参皂苷的吸附/洗脱特性考察及LC-MS分析

目的 比较不同阴离子交换树脂对人参总皂苷的吸附和洗脱性能，阐明其吸附/洗脱机制，建立适合人参总皂苷纯化的阴离子交换树脂方法。方法 以比吸附量、比洗脱量、洗脱率和回收率为指标，考察5种大孔树脂（D301，D315，D312，D330，D201）的吸附/洗脱特性。利用拟一级、拟二级动力学模型，以及Langmuir和Freundlich等温吸附模型对优选树脂和D101型大孔树脂的吸附动力学和热力学过程进行研究，阐明阴离子交换树脂与常规大孔树脂之间的吸附机制差异。通过动态吸附/洗脱试验优选阴离子交换树脂柱色谱纯化工艺参数并进行验证试验，通过液质联用法（LC-MS）对纯化前后9种单体人参皂苷类成分进行定性和定量分析。结果 D301型阴离子交换树脂明显优于其他4种阴离子交换树脂，最佳工艺条件为上样液pH 8，上样体积2 BV，上样流速4 BV·h^-1，用水和20%乙醇各3 BV洗脱杂质，加80%乙醇8 BV洗脱，洗脱流速4 BV·h^-1。经D301型树脂纯化后，9种单体人参皂苷类成分的富集系数均得到了不同程度的提高，整体富集系数达5.3，整体回收率80.9%，人参总皂苷纯度也从粗提物的17.07%提高至91.19%。结论 D301型阴离子交换树脂纯化人参总皂苷的方法简便可行，实现了从人参药材中一维柱色谱富集高纯度人参总皂苷的目的。     

清热化痰通腑方干预卒中相关性肺炎大鼠的血清代谢组学研究

目的基于超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱（UPLC-Q-TOF/MS）技术探讨清热化痰通腑方 （HTF）对卒中相关性肺炎（SAP）大鼠血清代谢组的影响，旨在寻找血清中的内源性差异代谢物及其相关代谢通 路，以阐释HTF 治疗SAP 的作用机制。方法将雄性SD 大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组，每组 7 只。采用改良线栓法结合气管注射铜绿假单胞菌法复制SAP 模型。造模同时给予大鼠HTF 药液38 g·kg-1·d-1 灌肠，给药体积为38 mL·kg-1，每天1 次，连续7 d。应用UPLC-Q-TOF/MS 技术进行血清样品的分离和数据 采集，通过主成分分析（PCA）及正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）法分析HTF 对内源性差异代谢物的影 响，并通过MetaboAnalyst 3.0 数据库分析其代谢通路。结果在正、负离子模式下共筛选鉴定出22 种内源性 差异代谢物。与模型组比较，HTF 治疗组大鼠血清中的N-乙酰谷氨酸、顺乌头酸、雌激素、癸二酸、维生素 E、酪氨酸、脱氧胞苷、莽草酸及胞苷含量显著升高（P < 0.01），3-甲氧基- L-酪氨酸、白三烯B4、苯乙酰甘 氨酸、磷酸丝氨酸、前列腺素E2、前列腺素F2α、血栓素B2、11-脱氧皮质酮、19-氧睾酮、前列腺素E3、 前列腺素F1α、油酸以及棕榈酸含量显著降低（P < 0.01）。22 个潜在生物标志物主要涉及15 条异常代谢通 路，其中与苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成，花生四烯酸代谢，柠檬酸循环（TCA 循环），脂肪酸生物合 成，类固醇激素生物合成，嘧啶代谢以及甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢等7 条代谢通路密切相关。结论HTF 对SAP 大鼠的治疗作用可能与其改善血清中内源性代谢物的水平，调节花生四烯酸代谢、脂质代谢以及能量 代谢等有关。     

基于新型住宿方舱的弥散供氧对移居高原人员生理学效应的影响

目的 研究弥散吸氧对移居高原人员缺氧应激、血氧饱和度以及人体代谢过程的影响,阐明新型供氧方式的抗缺氧作用及其可能的分子机制.方法 以移居海拔3 540 m高原某地1年以上的10名高原人员为研究对象,以新研发的弥散供氧住宿方舱为实验场所,研究对象在住宿方舱内连续弥散吸氧3d,2 h/d.采用自身对照研究方法,检测研究对象吸氧前后生理指标、血常规指标及血浆代谢谱的变化.结果 ①研究对象在住宿方舱内弥散吸氧期间,第1天舱内氧浓度为(22.85±0.36)％、第2天为(22.52±0.76)％、第3天为(22.57±1.05)％.②研究对象吸氧后血氧饱和度显著提高、脉率明显下降(P＜0.01);血压吸氧前后比较差异无统计学意义.③研究对象吸氧后共有44种代谢物发生了显著改变(VIP＞1,P＜0.05).其中,正离子模式下鉴定出18种,负离子模式下鉴定出26种.发现主要有4条代谢通路发生了明显变化[impact＞0.05,-log1o(P) ＞1.3].结论 通过弥散供氧方式吸氧能显著提高机体的心肺供氧能力,有效缓解高原缺氧寒冷环境对人体代谢的影响.     

LC-MS/MS同时测定人血浆中14种胆汁酸及其在环孢素肝毒性研究中的应用

目的建立UPLC-MS/MS同时定量检测人血浆中14种胆汁酸的浓度,探索环孢素肝毒性与胆汁酸的关系。方法采用蛋白沉淀法处理血浆样本,使用ACQUITY UPLC? HSS T3(2. 1 mm×150 mm,1. 8μm)色谱柱,流动相为水(4mmol·L^-1乙酸铵)-95%乙腈,梯度洗脱,流速0. 3 mL·min-1,检测时间15 min。检测系统采用电喷雾离子源,负离子模式。结果 14种胆汁酸的线性范围良好,批内和批间RSD均<15%,准确度均在87%~116%之间,提取回收率在101%~120%之间。以胆酸(CA)为主的胆汁酸与环孢素的浓度相关性良好,提示环孢素改变患者的肝毒性可能与胆汁酸相关。结论该方法方便准确、灵敏度高,能够满足人血浆中多种胆汁酸的含量测定,可以用于环孢素引起肝毒性的进一步基础研究。     

利胆软坚方降脂减肥作用及其对胆汁酸代谢轮廓谱的影响

目的:基于肥胖“从胆论治”的学术观点,研究利胆软坚方对高脂饮食诱导肥胖大鼠的降脂减肥作用及其对血清胆汁酸轮廓谱的影响,探讨其作用机制。方法:42只大鼠高脂饲料喂养9周建立肥胖大鼠模型,取24只造模成功大鼠随机分为模型组、利胆软坚方高、低剂量组(30,15 g·kg^-1),每组8只,另取8只正常大鼠作为正常组,模型组和正常组给予生理盐水,给药组给予相应剂量药物,灌胃4周。测定大鼠体质量、肝脏质量、脂肪质量等肥胖指标;胆管插管术引流监测2 h内胆汁流量;全自动生化仪测定血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS/MS)法测定大鼠血清胆汁酸代谢轮廓谱中各胆汁酸的含量。结果:与正常组比较,模型组体质量、肝脏质量、脂肪质量均显著升高(P<0.01),血清TC,TG,LDL-C水平明显上升(P<0.05,P<0.01),2 h内胆汁总分泌量及各测试点胆汁流量均降低,初级胆汁酸占比明显下降(P<0.05),血清总胆汁酸含量显著降低(P<0.01),血清胆汁酸轮廓谱中胆酸(CA),脱氧胆酸(DCA),鹅去氧胆酸(CDCA),猪去氧胆酸(HDCA),牛磺胆酸(TCA),牛磺去氧胆酸(TDCA),牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA),牛磺猪去氧胆酸(THDCA),甘氨去氧胆酸(GDCA)含量明显降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,利胆软坚方高、低剂量组体质量、肝脏质量明显降低(P<0.05,P<0.01),利胆软坚方高剂量组血清TC,TG,LDL-C水平明显下降(P<0.05,P<0.01),低剂量组TG水平明显下降(P<0.05),高剂量组在给药后1~1.5 h胆汁流量明显增加(P<0.05),高、低剂量组初级胆汁酸占比明显升高(P<0.05),利胆软坚方高剂量组TCA,DCA,甘氨胆酸(GCA),GDCA水平明显升高(P<0.05,P<0.01),低剂量组仅TCA,TCDCA水平明显升高(P<0.05)。结论:利胆软坚方具有降脂减肥作用,其机制可能与其增加胆汁分泌量,增加初级胆汁酸合成及调节胆汁酸轮廓谱有关。