重组mOP-1原核细胞高效表达和纯化的研究

①目的 探讨重组mOP-1(rmOP-1)的克隆化、原核高效表达载体的构建以及rmOP-1制备和纯化简单有效方法。②方法 于胎龄为2周的CD-1小鼠胚胎组织中提取、纯化mRNA，应用ligo(dT)引物反转录酶合成cDNA，PCR筛选扩增OP-1全长开放读框，产物TA克隆人质粒载体pCR3．1-Uni；亚克隆人高效原核表达载体pTrcHis2B，经大肠杆菌JM109、IPTG诱导表达rmOP-1蛋白；经Ni-NTA树脂纯化，SDS-PAGE分析。③结果 限制性酶切分析、DNA测序确认mOP-1的全长开放读框，Ni—NTA亲和层析纯化重组蛋白PAGE分析满意。④结论 胚胎期约2周的CD-1小鼠有OP-1mRNA的高水平表达，RT—PCR筛选OP-1全部开放读框，产物TA克隆化方法便捷，原核高效表达质粒pTrcHis2B能够方便、快速回收和纯化重组蛋白。     

PAX-2基因的克隆化和在原核细胞中的表达

①目的　以RT PCR技术克隆PAX 2全长开放读框 ,构建重组原核表达载体 ,制备重组人PAX 2蛋白 ,为肾肿瘤免疫治疗打下基础。②方法　从肾癌手术标本中分离mRNA ,RT PCR扩增筛选PAX 2全长开放读框 ,扩增产物经过限制性酶切分析及DNA测序后 ,克隆入高效原核表达质粒 pTrcHis,构建重组载体 ,转化工程菌株JM10 9,经IPTG诱导表达及 6×His配体亲和层析制备原核表达重组人PAX 2蛋白。③结果　RT PCR扩增获得约 1.2kb大小的产物 ,经限制性酶切分析和DNA测序 ,证实为人PAX 2基因的完整开放读框。④结论　肿瘤组织总RNA经RT PCR一步法能够对PAX 2基因的开放读框进行完整有效的筛选。经重组技术及高效原核系统制备重组人PAX 2蛋白的效率和纯度满意。体外制备的重组人PAX 2蛋白对肾肿瘤特异性抗原的瘤苗制备和免疫治疗具有重要价值。     

原发性肾上腺髓质增生症的诊断与治疗

①目的:探讨原发性肾上腺髓质增生症(PAMH)的诊断方法和治疗原则。②方法:回顾总结11例PAMH病人的临床资料并结合文献进行分析。③结果:影像学检查发现7例为一侧肾上腺增大、增厚，4例为双侧增生，均未发现肾上腺和肾上腺外肿瘤；11例病人均进行手术治疗并经病理学检查证实，术后效果良好。④结论:PAMH可靠的影像学诊断手段是CT和^131I-MIBG肾上腺髓质显像，确诊依赖于病理学检查特别是电镜下的发现；行增生明显的一侧全切、对侧大部切除术是有效的治疗方法。     

女性尿道综合征患者膀胱镜及病理检查结果分析

女性尿道综合征（FUS）为临床常见病，但其病因和发病机制不清，治疗效果欠佳。2001年10月至2005年2月，我们对56例FUS患者进行了膀胱镜及组织病理检查。现将结果分析如下。     

闭合性肾外伤136例

1　临床资料　 1982 - 0 5 / 2 0 0 1- 0 6 ,我院收治闭合性肾脏外伤患者 136 (男 10 2 ,女 34 )例 .年龄 11～ 71(平均 43)岁 .孤立肾2例 ,合并肾结石 4例 ,肾盂输尿管连接部狭窄 1例 .左肾 94例 ,右肾 42例 .跌落伤 35例 ,撞击伤 17例 ,车祸伤 73例 ,其他原因 11例 .病理性肾外伤 8例 .肾挫裂伤 12 4例 ,肾粉碎伤 9例 ,肾蒂血管损伤 2例 .合并肋骨骨折 14例 ,血气胸 8例 ,肝破裂 5例 ,脾破裂 4例 ,肠破裂 1例 ,胰腺损伤 3例 ,颅脑损伤 5例 ,脾破裂 4例 ,肠破裂 1例 ,胰腺损伤 3例 ,颅脑损伤 5例 ,骨盆骨折 11例 ,合并休克 2 3例 .结合尿常…     

重组鼠骨形成蛋白-1的制备及其对肾脏缺血-再灌注损伤的保护作用

目的探讨鼠骨形成蛋白1(mOP1)对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)克隆化mOP1基因全长开放读框,制备重组mOP1(rmOP1),体外测定rmOP1成骨活性。建立Wistar大鼠肾脏缺血再灌注模型,随机分为预防组、治疗组和对照组,前两组分别于血流阻断前、血流阻断后开放血流即刻经肠系膜上静脉给予rmOP1,剂量为250μg/kg,对照组给予等量生理盐水,于血流再灌注后24h测定各组大鼠血液中尿素氮(BUN)及肌酐(Cr)浓度,观察肾脏组织学变化,并进行改良Miller评分。结果体外实验rmOP1表现出诱导成骨活性;大鼠肾脏缺血再灌注后,其血BUN、Cr值和Miller评分,预防组与治疗组间的差异无显著性(P>0.05),但均明显低于对照组(P<0.01),肾小管上皮细胞的坏死程度也明显轻于对照组。结论rmOP1对肾脏的缺血再灌注损伤具有保护作用。     

uPA与uPAR在肾细胞癌中的表达及其意义

①目的 探讨尿酸氧化酶(uPA)、尿酸氧化酶受体(uPAR)在肾细胞癌中的表达特征及其在肾癌恶性生长中的作用。②方法 选取40例不同分化程度及临床分期的肾细胞癌组织和10例正常肾组织，采用Supervision法进行免疫组织化学染色，检测uPA、uPAR的表达。③结果 uPA、uPAR的表达程度与肾癌细胞分化程度及临床分期有关，分化越差、临床分期越晚，则表达程度越高。在肿瘤细胞增殖密集区域，uPA、uPAR阳性的肿瘤细胞比例较低，而在肿瘤细胞生长稀疏、肿瘤血管增殖旺盛的区域，阳性细胞比例较高。正常肾组织未见uPA、uPAR的表达。④结论 uPA、uPAR的表达是浸润性生长的肾细胞癌的特征之一，其表达程度可作为判断肾癌浸润性的重要参考指标之一。uPA、uPAR的表达对肾细胞癌血管发生可能起重要作用。     

泌尿系上尿路肿瘤临床诊断方法的评价

①目的:总结泌尿系上尿路肿瘤的诊断情况。②方法:回顾性分析47例上尿路肿瘤病人的临床资料。③结果:62％的病人由静脉肾盂造影首先确诊肾盂肿瘤，19％病人由B超首先确诊占位，13％病人由CT首先确诊占位，2例病人由腔内B超诊断占位，2例病人由输尿管镜诊断占位，3例病人由磁共振水成像(MRU)检查发现占位。④结论:静脉肾盂造影仍为上尿路肿瘤的主要检查方法，其与逆行肾盂造影相结合，可基本完成对上尿路肿瘤的诊断。CT检查对肾盂占位的定性和定位诊断有良好的优越性。MRU、腔内B超和输尿管镜检查对疑难病例诊断有重要作用。     

短期应用单克隆抗体CD3预防肾移植术后早期排斥反应

①目的探讨短期应用单克隆抗体CD3(OKT3)预防肾移植术后早期严重排斥反应的效果和安全性.②方法对照组35例肾移植病人术后常规应用甲基泼尼松龙、环磷酰胺、泼尼松、骁悉和环孢霉素A;实验组33例在上述用药基础上,术后前5d连续应用OKT3 5mg静脉注射.③结果实验组除1例肾小管坏死的病人因发生急性排斥反应、自发性移植肾破裂而切除肾脏,无其他严重并发症.对照组2例发生加速排斥反应,应用OKT3后1例加速排斥反应逆转,1例死亡;4例发生急性排斥反应,应用OKT3后全部逆转.两组排斥反应发生率比较差异有显著性(χ2=4.725,P<0.05).④结论肾移植术后短期应用OKT3能有效地预防早期严重排斥反应,而未引起严重并发症.     

烧伤后早期前列腺素E_2的动态变化及其对淋巴细胞转化功能的影响

用BALB/C小鼠作为动物模型,应用放射免疫分析法对烧伤后早期小鼠腹腔液申的前列腺素E_2(PGE_2)进行动态测定,同时检测小鼠脾淋巴细胞对刀豆蛋白A刺激的反应性.结果表明,烧伤后7d内各期的PGE_2水平均明显高于正常对照值(67.2±36.8nmol/L,P<0.05～0.001);同时脾淋巴细胞对刀豆蛋白A刺激的反应性在烧伤后明显降低(P<0.05～0.001).体外实验也表明,烧伤鼠腹腔液提取物对正常鼠的淋巴细胞转化功能有抑制作用,与未烧伤鼠的腹腔液提取物的作用相比,具有明显差异(P<0.05).提示烧伤后体内的PGE_2生成明显增多,而且对淋巴细胞转化功能具有一定程度的抑制作用.说明烧伤后早期体内PGE_2的增高是介导免疫功能抑制的因素之一.