miR-145调控肝癌腹水模型Th9细胞升高的机制研究

目的:探讨miR-145调控肝癌腹水模型Th9细胞升高的作用机制。方法:构建小鼠H22肝癌腹水模型。造模两周后处死小鼠并分离出脾脏组织，流式细胞术分析肝癌腹水组（MA组）与正常对照组（Control 组）小鼠脾脏Th9细胞表达水平。ELISA法检测脾脏IL-9表达水平。RT-PCR法检测脾脏miR-145表达水平。Western Blot法检测脾脏中PI3K/Akt/mTOR/P70S6K/HIF-1α相关蛋白表达水平。分选小鼠脾脏CD4+T细胞，随机分为miR-145 mimics组和NC组，分别应用miR-145-5P mimics、阴性对照寡核苷酸（negative control，NC）进行转染，RT-PCR检测各组miR-145、HIF-1α mRNA及IL-9 mRNA表达水平。结果:与Control 组相比，MA组Th9细胞及其细胞因子IL-9表达均升高（P<0.05），miR-145表达降低（P<0.05），p-PI3K、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p-P70S6K、HIF-1α蛋白均升高（P<0.05）。与NC组相比，miR-145 mimics组miR-145显著升高，HIF-1α mRNA及IL-9 mRNA表达下降。结论:肝癌腹水中Th9细胞升高可能与miR-145下降导致的PI3K/Akt/mTOR/P70S6K/HIF-1α通路激活有关。     

针刺治疗肥大性下橄榄核变性1例报告

肥大性下橄榄核变性是齿状核-红核-下橄榄核环路区受损后引起的一种临床少见的、特殊的跨突触变性,多继发于中脑、脑桥或小脑的出血、梗死、肿瘤或创伤性病变后期,主要临床表现为眼肌震颤、腭肌阵挛、复视、肢体阵挛或共济失调等[1]。目前西医尚缺乏特异性治疗方法,仅对症治疗。笔者治疗脑干出血继发的肥大性下橄榄核变性1例,最初运用针刺配合西药治疗,并逐步停用西药,最后单用针刺治疗,临床疗效颇佳,现报告如下。     

H295R细胞系类固醇生成试验的研究进展

2011年新修订的经济合作与发展组织（OECD）化学品测试指南中增添了指南456——H295R细胞系类固醇生成试验，用来筛选和检测潜在的内分泌干扰物。H295R细胞能表达类固醇激素生成过程中涉及的所有酶类，已作为有效的体外筛选环境类固醇激素干扰物的模型，也可作为研究肾上腺皮质分化及其类固醇激素的分泌与调控以及雄激素产生的调节作用的模型。H295R试验已用于美国内分泌干扰物筛选项目（EDSP）的一级筛选，还发展了高通量H295R细胞系类固醇生成试验方法。本文主要就H295R细胞系的建立，在环境类固醇激素干扰中的应用，以及目前存在的问题作一综述。     

miRNA-325-3p通过下调细胞角蛋白13 的表达降低鼻咽癌细胞CNE1 的放疗敏感性

目的：探究miRNA-325-3p 及其靶基因细胞角蛋白13（cytokeratin 13，CK13）对鼻咽癌细胞CNE1 的放疗敏感性的影响。方法：通过miRBase、Targetscan 及Microcosm 三大数据库预测miRNA-325-3p 的潜在靶基因，并通过双荧光素酶活性检测实验进行验证，qPCR检测不同放射剂量下鼻咽癌细胞CNE1 中miRNA-325-3p 及其靶基因的表达水平变化，通过克隆形成实验观察不同放射剂量下过表达miRNA-325-3p 及敲低靶基因后CNE1 细胞克隆形成率的变化，流式细胞术验证过表达miRNA-325-3p及敲低靶基因后CNE1 在不同放射剂量下凋亡水平的变化，MTT法检测miRNA-325-3p 过表达和CK13 敲低组鼻咽癌细胞CNE1在不同放射剂量下的细胞存活率以验证其放疗敏感性的变化。结果：CK13 确认为miRNA-325-3p 的潜在靶基因，鼻咽癌细胞CNE1 经放射处理后，miRNA-325-3p 的表达水平显著升高、CK13 的表达水平显著降低（均P<0.05）。miRNA-325-3p 表达量上调和CK13 基因沉默均显著提高CNE1 细胞的存活率[miRNA上调时：（60.14±3.55）% vs（19.23±3.42）%，t=14.37、P<0.01；CK13 沉默时：（76.15±5.13）% vs（28.53±3.68）%，t=13.06、P<0.01]和克隆形成率，降低了凋亡率[miRNA 上调时：（27.95±2.67）% vs（51.68±3.47）%，t=9.39、P<0.01；CK13 沉默时：（20.31±2.62）% vs（38.14±3.83）%，t=6.66、P<0.01]。结论：miRNA-325-3p 能够通过下调靶基因CK13的表达降低鼻咽癌细胞CNE1 对放疗的敏感性。     

母系表达基因3对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响机制研究

目的探究长链非编码RNA母系表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)对卵巢癌细胞基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达和侵袭、迁移能力的影响。方法荧光定量聚合酶链反应检测卵巢上皮细胞和卵巢癌细胞MEG3表达情况。通过慢病毒转染携带MEG3全长序列的载体和空白载体于SKOV3人卵巢癌细胞中,分别作为实验组细胞和对照组细胞,通过Transwell侵袭实验检测两组细胞的侵袭能力,通过Transwell迁移实验检测两组细胞的迁移能力,通过蛋白质印迹法检测两组细胞MMP-2和MMP-9的表达情况。结果人卵巢癌细胞SKOV3、OVCAR3和A2780中MEG3的表达显著低于人卵巢上皮细胞IOSE80(均P<0.05)。通过慢病毒转染外源性上调SKOV3细胞MEG3的表达,实验组细胞MEG3表达显著高于对照组(P<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示实验组穿过基质胶的细胞数显著少于对照组(P<0.05);Transwell迁移实验结果显示实验组迁入下室的细胞数显著少于对照组(P<0.05)。蛋白质印迹法结果显示实验组细胞MMP-2和MMP-9表达水平均显著低于对照组(均P<0.05)。结论 MEG3低表达于人卵巢癌细胞系,并可下调MMP-2和MMP-9的表达,抑制卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力。     

急性乙型肝炎患者pDCs上CD86表达变化及意义

目的 探讨外周血浆细胞样树突状细胞(pDCs)在急性乙型肝炎(AHB）患者临床转归中的变化及作用。方法 纳入2015年6月至2017年5月收治的急性乙型肝炎(AHB组)患者40例， 给予退黄、降酶、保肝等药物，并加用恩替卡韦0．5 mg空腹口服，1次/d。另纳入健康体检者26例为健康对照组（ HC组）。HC组于体检当天、AHB组于治疗前及治疗后6周采集外周静脉全血，采用ELISA法检测2组血浆HBV DNA、HBsAg、HbeAg及肝功能指标水平，并应用流式细胞仪检测pDCs的频数及其功能分子CD86的表达水平。结果 治疗6周后，AHB组临床症状显著缓解，血清学指标和乙型肝炎标志物水平显著下降（P<0.01）。治疗6周后，AHB组HBV DNA转阴率为82.5%，HBsAg清除率为72.5%，HBeAg血清学转换率为75.0%，与治疗前比较差异均有统计学意义（P<0.01）, HC组pDCs频数显著高于AHB组治疗前。AHB组治疗后CD86+pDCs显著高于治疗前。HC组CD86ABC显著低于AHB组治疗前。结论 在急性乙型肝炎患者外周血pDCs的数量降低。急性乙型肝炎患者在治疗后CD86+pDCs增多。急性乙型肝炎患者pDCs上CD86表达上调。     

血清CYFRA21-1、MMP-9及TTF-1水平在诊断肺恶性肿瘤患者中的临床价值

目的 探讨血清细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、甲状腺转录因子-1(TTF-1)水平在诊断肺恶性肿瘤的临床价值。 方法 选择2016年5月—2018年3月浙江省丽水市人民医院收治的27例肺恶性肿瘤患者、45例肺良性肿瘤患者及30例体检健康者作为研究对象，分别设为肺恶性肿瘤组、肺良性肿瘤组及健康对照组，采用电化学发光方法检测入选患者血清CYFRA21-1水平，采用酶联免疫吸附试验入选患者血清检测TTF-1、MMP-9水平。应用统计学方法比较差异。 结果 肺恶性肿瘤组的血清CYFRA21-1、MMP-9、TTF-1水平均明显高于良性肿瘤组和健康对照组，有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示，CYFRA21-1、MMP-9、TTF-1与肺良性肿瘤均无相关性(P>0.01)，与肺恶性肿瘤有相关性(P＜0.01)。ROC曲线分析显示，血清CYFRA21-1诊断肺恶性肿瘤的AUC明显高于MMP-9和TTF-1，有统计学意义(P<0.05)，MMP-9与TTF-1之间的AUC比较差异无统计学意义(P>0.05)。血清CYFRA21-1诊断肺恶性肿瘤敏感性、特异性分别为67.8%、93.1%；MMP-9诊断肺恶性肿瘤分别为42.1%、87.2%；TTF-1分别为44.3%、95.7%。 结论 血清CYFRA21-1、MMP-9、TTF-1水平在诊断肺恶性肺肿瘤方面具有一定的潜在价值，其中以CYFRA21-1最高。      

中期因子和核转录因子免疫组化测定对甲状腺乳头状癌及转移灶的诊断价值

目的探讨中期因子(MK)和核转录因子Kappa B(NF-κB)免疫组化测定对甲状腺乳头状癌(PTC)及转移灶的诊断价值。方法选取2016年3月至2018年5月间北京市大兴区人民医院收治的70例行甲状腺全切除术的PTC患者,及行单侧腺叶切除或双叶大部切除的65例多发性结节性甲状腺肿(MNG)患者。根据是否有转移灶进一步分为PTC1组(有转移灶)和PTC2组(无转移灶),汇总和记录患者的病例资料,采用免疫组化染色法检测各组组织中MK、NF-κB p65和Ki-67的表达,计算并绘制三个指标的灵敏度、特异度、最大约登指数、曲线下面积和受试者工作特征(ROC)曲线,通过Western印迹测定证实免疫组化结果。结果 PTC患者术后组织MK、NF-κB和Ki-67的表达明显高于MNG患者,差异均有统计学意义(均P <0. 05); ROC结果显示三个指标对PTC的诊断效能较好,最大约登指数分别为0. 871、0. 816和0. 771。PTC亚组1病例的三个指标表达明显高于PTC亚组2病例,差异均有统计学意义(均P <0. 05); ROC结果显示三个指标对PTC转移灶的诊断效能较好,最大约登指数分别为0. 835、0. 684和0. 870;三组患者MK和NF-κB的蛋白水平比较,组间差异有统计学意义(均P <0. 05)。结论 MK和NF-κB对PTC的诊断效能较好,敏感度和特异度较高,并且MK和NF-κB对PTC患者手术时是否存在转移灶的判断具有一定的价值。     

结外NK/T细胞淋巴瘤患者鼻腔菌群失调与预后的关系

目的 探讨鼻腔菌群失调与结外NK/T细胞淋巴瘤（extranodal NK/T-cell lymphoma，ENKTCL）预后的相关性。方法 回顾性分析244例初治ENKTCL患者的临床资料及鼻拭子培养结果，根据是否存在鼻腔菌群失调将患者分为菌群正常组（n=114）和菌群失调组（n=130），并分析菌群失调与患者临床病理特征、治疗效果及预后的关系。结果  菌群失调组患者共培养出409株优势菌株，以金黄色葡萄球菌、草绿色链球菌、表皮葡萄球菌及铜绿假单胞菌为主。菌群失调组患者的乳酸脱氢酶升高比例高于菌群正常组（P=0.044），预后评分PINK≥1的中危或高危患者比例亦高于菌群正常组（P=0.003）。治疗结束时，菌群失调组患者的完全缓解率显著低于菌群正常组（45.5% vs 61.4%，P<0.05），5年无疾病进展生存率亦低于菌群正常组（48.4% vs 63.9%，P=0.048）。亚组分析显示，早期及PINK低危患者中，菌群失调与否与患者的无疾病进展生存期有关（P=0.022， 0.011）。结论 鼻腔菌群失调与ENKTCL患者预后密切相关，针对鼻腔菌群失调的措施可能进一步改善ENKTCL的治疗效果及预后。