circZBTB44通过调控AKT通路促进肾透明细胞癌增殖和迁移的研究

目的 探究circZBTB44在肾透明细胞癌中的表达情况及探讨circZBTB44在肾透明细胞癌中的生物学功能及促进肾透明细胞癌细胞进展的可能机制。方法 通过qRT-PCR法检测circZBTB44在我院21对肾透明细胞癌组织及细胞系786-O、ACHN中的表达水平;通过放线菌素D实验、RNase R实验、核浆分离实验鉴定circZBTB44的特征;通过siRNA下调circZBTB44的表达后,通过MTS细胞增殖实验、克隆形成实验及Transwell迁移实验来探究circZBTB44对肾透明细胞癌786-O、ACHN的生物学功能影响;通过蛋白免疫印迹实验来探究circZBTB44调控的下游通路。结果 circZBTB44在肾透明细胞癌组织和细胞株786-O和ACHN中明显高表达。下调circZBTB44的表达可明显抑制786-O和ACHN的增殖和迁移能力。下调circZBTB44可抑制肾透明细胞癌786-O和ACHN细胞中AKT的磷酸化。结论 circZBTB44在肾透明细胞癌中高表达。circZBTB44可能通过调控AKT信号通路促进肾透明细胞癌的增殖和迁移。     

microRNA-613调控CDK14来抑制老年胶质瘤患者瘤细胞的增殖和侵袭作用

目的 探讨microRNA-613调控细胞周期蛋白依赖性激酶14(CDK14)通路来抑制老年胶质瘤患者瘤细胞增殖和侵袭的机制。方法 购自上海北诺生物科技有限公司的人脑胶质瘤细胞株U251共24株,分为shNC组、shmicroRNA-613组、Vector组、microRNA-613组,每组各6株; Western Blotting法和qRT-PCR法检测敲减microRNA-613和过表达microRNA-613后的人脑胶质瘤细胞株U251中CDK14蛋白表达水平,CCK-8细胞增殖实验、Transwell小室实验验证敲除microRNA-613和过表达microRNA-613后U251细胞的增殖、侵袭能力。结果 人胶质瘤细胞株U251敲减microRNA-613后CDK14蛋白表达增加(P<0.05); 人胶质瘤细胞株U251过表达microRNA-613后CDK14蛋白表达减少(P<0.05); 转染第24、36、48 h microRNA-613组U251细胞增殖率P<0.05); microRNA-613组U251细胞侵袭能力>Vector组,shNC组>shmicroRNA-613组(P<0.05)。结论 microRNA-613可通过调控CDK14信号转导通路来抑制人脑胶质瘤细胞U251增殖、转移。     

启膈散对人食管癌EC9706细胞增殖、凋亡及miR-133a/Akt/mTOR信号通路的影响

目的 观察启膈散对EC9706细胞增殖、凋亡的影响和对微RNA-133a（miR-133a）/蛋白激酶B（Akt）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的影响。方法 采用乙酸乙酯法提取启膈散有效部位；噻唑蓝（MTT）比色法筛选启膈散细胞用药剂量及检测启膈散对EC9706细胞增殖的影响；流式细胞仪检测启膈散对EC9706细胞凋亡的影响；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测启膈散对miR-133a及胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）mRNA表达的影响；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测启膈散对miR-133a/Akt/mTOR通路靶蛋白Akt，mTOR的表达。结果 与空白组比较，启膈散可抑制EC9706细胞的增殖（P<0.01），并呈剂量依赖性，筛选30%抑制浓度（IC₃₀）40 mg·L^-1和半抑制浓度（IC₅₀）80 mg·L^-1进行后续实验；与空白组比较，抑制剂组、抑制剂+启膈散组均可抑制EC9706细胞增殖（P<0.01），筛选抑制剂0.25 μmol·L^-1进行后续实验；与空白组比较，启膈散80 mg·L^-1组可明显促进EC9706细胞晚期凋亡率及总凋亡率（P<0.05），启膈散40 mg·L^-1组可促进EC9706细胞晚期凋亡率（P<0.05），与Akt/mTOR抑制剂联合用药后，可协同增效。与空白组比较，各组均能提高miR-133a表达（P<0.05），其中抑制剂与中药抑制剂+启膈散组促进作用明显。与空白组比较，各组均能够均可明显降低Akt，mTOR蛋白表达（P<0.05），与单独用药比较，抑制剂与中药联合应用组Akt，mTOR的蛋白表达有所降低。结论 启膈散能够抑制食管癌EC9706细胞的生长，促进EC9706细胞的凋亡，其抑制机制可能与调控miR-133a的表达，影响其下游Akt/mTOR信号通路有关。     

促进乳腺癌增殖转移和肿瘤干细胞特征的研究

目的 研究Gankyrin在乳腺肿瘤中的表达及其促进肿瘤进展的分子机制。方法 利用数据库研究Gankyrin在乳腺癌中的表达情况,并分析其表达与患者生存的关系。在BT549和MDA-MB-231乳腺癌细胞系过表达和敲减Gankyrin基因后,利用CCK-8、Transwell和流式细胞实验分析细胞增殖、转移和肿瘤干细胞的比例。结果 通过数据库分析显示Gankyrin在乳腺癌组织表达较高(P＜0.01),其高表达与患者的不良预后有关(P＜0.01)。与正常乳腺组织相比,乳腺癌组织中Gankyrin启动子甲基化水平较低(P＜0.01)。通过在乳腺癌细胞中过表达和敲减Gankyrin基因后,表明Gankyrin具有促进乳腺肿瘤细胞增殖和转移的能力,可以维持乳腺癌细胞的肿瘤干细胞特征(P＜0.01)。结论 Gankyrin在乳腺癌高表达与患者的不良预后相关,其可能作为乳腺癌肿瘤标记物。     

肿瘤相关巨噬细胞CD163在乳腺癌组织中的表达及对乳腺癌细胞生物学特性的影响

目的分析CD163巨噬细胞在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌细胞增殖、侵袭能力的影响。方法收集2010年1月—2012年12月南京大学医学院附属鼓楼医院普外科收治的160例经病理学证实为乳腺癌患者的组织标本及其癌旁(距癌组织≥5 cm)正常组织标本,比较乳腺癌组织和癌旁正常组织CD163巨噬细胞表达情况,依据染色结果将CD163巨噬细胞分为高、低表达组,分析其与乳腺癌患者临床病理特征的关系,采用小分子干扰技术下调巨噬细胞MH-S中CD163的表达,与乳腺癌细胞MCF-7共培养,平板克隆实验观察细胞增殖能力,Transwell实验观察细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期。结果乳腺癌组织中CD163~+巨噬细胞浸润数量明显高于癌旁正常组织,差异具有统计学意义(t=134.273,P<0.01);CD163~+巨噬细胞在不同年龄及肿瘤直径中的浸润数量差异无统计学意义(P均>0.05),而在不同分化程度、TNM分期及淋巴结转移间差异有统计学意义(χ~2=23.498、13.965、9.753,P<0.01)。正常表达CD163的MH-S共培养MCF-7细胞的增殖能力和侵袭能力均明显高于低表达CD163的MH-S共培养的MCF-7细胞(t=11.960、18.397,P<0.01);与siRNA-NC组相比,siRNA-FAM组的G1期MCF-7细胞所占的比例明显增高,差异具有统计学意义(t=6.398,P<0.01),而G2期细胞所占的比例明显降低,差异亦具有统计学意义(t=9.542,P<0.01)。结论乳腺癌组织中CD163~+巨噬细胞数量明显升高,与临床分期、淋巴结转移、分化程度密切相关,且CD163能够增强乳腺癌细胞增殖、侵袭能力。     

CrkⅡ表达水平对喉癌细胞Hep-2增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨CrkⅡ表达水平对喉癌细胞Hep-2增殖、迁移及侵袭的影响。方法采用免疫组化法检测CrkⅡ在108例喉癌患者喉癌组织及癌旁正常组织中的表达情况,分析不同临床特征喉癌患者喉癌组织中CrkⅡ蛋白的阳性表达情况。构建并验证CrkⅡRNA干扰质粒,将培养后的Hep-2细胞分为空白对照组(未转染质粒)、阴性对照组(转染阴性对照质粒)和实验组(转染CrkⅡ干扰质粒),细胞转染后行实时聚合酶链反应(PCR)扩增。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测转染后Hep-2细胞中CrkⅡ的表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况,Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移能力,细胞划痕实验检测细胞的迁移情况。结果喉癌组织中CrkⅡ蛋白的阳性表达率明显高于癌旁正常组织(P﹤0.01)。临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、组织分化程度为中低分化、有淋巴结转移喉癌患者喉癌组织中CrkⅡ蛋白的阳性表达率均高于临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、组织分化程度为高分化、无淋巴结转移的喉癌患者(P﹤0.05)。实验组喉癌细胞Hep-2中CrkⅡmRNA和蛋白的相对表达量均低于阴性对照组、空白对照组(P﹤0.05)。实验组穿过基质膜至下室的细胞数目低于阴性对照组和空白对照组(P﹤0.05)。转染48 h时,实验组细胞的迁移率低于阴性对照组、空白对照组(P﹤0.05)。细胞培养24、48、72 h时,实验组Hep-2细胞的光密度(OD)值均低于空白对照组和阴性对照组(P﹤0.05)。结论喉癌细胞Hep-2中CrkⅡ的表达下调可降低细胞的增殖、迁移和侵袭能力,CrkⅡ有可能成为喉癌临床治疗的新靶点。     

TRIM21 通过Wnt/β-catenin信号通路调控卵巢癌细胞增殖及耐药

目的：探讨TRIM21 通过激活Wnt/β-catenin 信号通路调控卵巢癌细胞增殖以及PARP抑制剂耐药的相关机制。方法：收集2018 年1 月至2019 年1 月于延安市人民医院手术切除的8 例卵巢癌组织及宫颈上皮组织标本，并根据患者是否对PARP抑制剂尼拉帕尼耐药分为耐药组和非耐药组（4 例/组）；卵巢癌细胞系CAOV3、SKOV3、OVCAR3、ES-2、HO8910、A2780 和OV2008。用qPCR 法和Western blotting（WB）分别检测卵巢癌组织和细胞系中TRIM21 和β-catenin 表达水平。构建TRIM21 过表达及敲减细胞系，用CCK-8 法检测各组细胞的增殖活力，用TOP/FOP 双荧光素酶实验检测TRIM21 对Wnt信号通路激活的影响，qPCR法和WB检测TRIM21 对β-catenin mRNA和蛋白水平的影响，并通过Wnt通路抑制剂XAV-939 作进一步验证。结果：TRIM21 在卵巢癌组织中的表达水平显著高于宫颈上皮组织（P<0.01），且在耐药组织中表达水平较高（P<0.01）；TRIM21 在卵巢癌ES-2 细胞中表达水平相对最高，而在CAOV3 和A2780 中表达水平相对较低（均P<0.01）。敲减TRIM21 后，ES-2 细胞中TRIM21 的表达水平显著降低（P<0.01），细胞的增殖能力明显降低（P<0.01）；过表达TRIM21 后，CAOV3 细胞的增殖能力显著增强（P<0.01），并可抑制尼拉帕尼的抗肿瘤增殖活性，其可调控Wnt/catenin 通路的激活，而敲减β-catenin 或使用Wnt/β-catenin 抑制剂XAV-939 后，TRIM21 在卵巢癌中的作用被显著逆转。结论：TRIM21 可通过调控Wnt/β-catenin 信号通路增强卵巢癌细胞的增殖能力并在PARP抑制剂尼拉帕尼耐药过程中发挥一定的作用。     

肾母细胞瘤MIB-1（Ki-67增殖指数）和p27kip1表达及与预后的关系

目的:探讨肾母细胞瘤MIB-1（Ki-67增殖指数）和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p27kip1的表达及与预后的关系。方法:经医院伦理委员会批准，连续纳入2008年1月至2013年8月在我院就诊的肾母细胞瘤患者样本作为研究对象，观察p27kip1和MIB-1阳性表达与患者临床特征的关系。结果:肿瘤组织中MIB-1阳性表达率高于正常肾组织，p27kip1阳性表达率低于正常肾组织，差异均有统计学意义（P＜0.05）。MIB-1和p27kip1表达与性别、年龄、病理分型、发病部位等均无相关性（P＞0.05），与临床分期存在相关性（P＜0.05）。MIB-1表达阳性患者中位生存时间低于阴性患者，而p27kip1表达阴性患者中位生存时间低于阳性患者（χ2=6.979、15.247，P=0.008、0.000）。结论:MIB-1表达增加和p27kip1表达降低与肾母细胞瘤的发生、发展、预后密切相关，临床应根据其表达情况进行针对性干预，以改善患者的预后。