降钙素原化学发光免疫定量检测方法的建立及临床应用价值

目的 应用化学发光免疫分析技术建立人血清中降钙素原定量检测方法,并分析其临床应用价值.方法 采用固相包被降钙素原单克隆抗体,生物素标记另一降钙素原单克隆抗体,结合鲁米诺化学发光底物系统,建立人血清中降钙素原的双抗体夹心化学发光免疫定量检测方法.应用所建立的方法及罗氏化学发光试剂同时检测临床血清样本142份,比较检测结果.结果 所建立方法的灵敏度为0.02 g/mL,检测范围为0.02～10 ng/mL,批内和批间的变异系数分别为6.8%和9.1%,回收率为90%～110%,与罗氏试剂盒检测结果具有良好相关性（r=0.979）.结论 建立了简捷、敏感、特异和准确的人血清降钙素原化学发光免疫定量检测方法,与进口同类试剂比较,成本低廉,适合临床检验推广应用.     

7个肾上腺脑白质营养不良家系的基因突变分析

目的对7个肾上腺脑白质营养不良家系进行基因突变分析。方法应用RT-PCR技术，对7位患者的ABcDl基因编码区分4个片段进行扩增并对PCR产物直接测序。应用PCR-限制性酶切或DNA测序等方法分析相应的基因组DNA，进一步确证ABCD1基因的突变位点。结果在7位患者的ABCD1基因上存在6个不同的碱基置换（709C→A、807G→A、1161C→T、2065C→T、2113T→C和2235C→T）、1个碱基缺失（1801delAG）和1个碱基插人（1126insCCATCG），分别造成5个错义突变（A141T、R259W、P560L、L76P和R617C）、2个移码突变（fs I246和fs E471）和1个无义突变（S108X）。结论在中国人肾上腺脑白质营养不良患者中发现4个新的ABCD1基因突变，即S108X、fs I246、R259W和IA76P突变。不同家系具有不同的突变位点，且突变类型和表型之间无特殊的相关性。     

NADH-细胞色素b5还原酶突变型蛋白的结构与功能研究

目的 探讨NADH-细胞色素b5还原酶基因突变引起遗传性高铁血红蛋白血症的分子病理机制。研究突变型（b5R）蛋白结构和功能的关系。方法 用基因重组技术将野生型和突变型（L72P）b5R cDNA克隆于pGEX-2T载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达。Western印迹鉴定表达的蛋白为CST-b5R融合蛋白。应用谷胱甘肽-Sepharose 4B亲扫层析,还原型谷胱甘肽洗脱得到纯化的GST-b5R和GST-b5R L72P融合蛋白,比较GST-b5R和GST-b5R L72P酶活性。结果 突变型酶活性低,为野生型的3％。结论 L72P突变可引起蛋白质二级结构改变从而导致酶的活性下降。     

日本脑炎病毒基因疫苗的研究进展

日本脑炎 (Ｊａｐａｎｅｓｅｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ,ＪＥ)是一种由蚊虫传播引起的人类和马中枢神经系统感染性疾病。人类每年的发病总例数约 3.5万以上 ,其中约有 1万例患者死亡。日本脑炎病毒 (ＪＥＶ)为黄病毒科黄病毒属的成员之一。其他重要的人类病原性黄病毒包括 :黄热病、登革热 1～ 4型、蜱传脑炎和圣路易脑炎病毒等。疫苗是预防黄病毒感染的有效手段。目前用于预防ＪＥＶ感染的疫苗有 3种 ,两种为灭活疫苗 (分别由感染的鼠脑和原代仓鼠肾细胞培养制备 ) ,一种为减毒活疫苗 (ＳＡ14 14 2株 )。国外采用的为感染鼠脑制备的灭活疫…     

人精子特异性乳酸脱氢酶DNA疫苗的构建及其免疫效果的初步鉴定

人精子特异性乳酸脱氢酶（hLDH—C4）具有组织器官特异性及较强的免疫原性。多项研究表明其诱导的免疫反应在多种哺乳动物具有抗生育性：在血清中都检测到抗LDH—C4的抗体。动物的生育率明显降低。且作用可逆。LDH—C4作为疫苗用于免疫生育调节一直受到关注。作者构建了精子特异性乳酸脱氢酶真核表达载体pVAX1-hLDHC4，并用该载体免疫BAIB/c小鼠，观察了其诱导的体液免疫反应，现报告如下。     

遗传性高铁血红蛋白血症的分子基础

正常血红蛋白(Hb)在携带O2的过程中，其亚铁离子可被O2缓慢氧化；血红细胞的一些代谢产物(如G2O2)，对Hb也有氧化作用。因此，在正常人红细胞内不断有少量高铁(三价铁)血红蛋白(methemoglobin,MetHb)形成。但MeHb并不在红细胞内累积，因为红细胞内还存在一个强大的MetHb还原系统，不断将生成的MetHb还原为正常亚铁血红蛋白。     

聚合酶链反应直接测序法检测细胞色素b5还原酶基因突变

在ＤＮＡ突变检测方法中，ＤＮＡ测序能精确判断突变部位和性质，是最具决定性的一步。聚合酶链反应（ＰＣＲ）产物经直接测序分析而不预先克隆到测序载体上，使序列分析的效率极大提高。我们从遗传性高铁血红蛋白血症患者外周血白细胞提取总ＲＮＡ，经逆转录（ＲＴ）合成...     

人氨肽酶N基因克隆和原核表达

目的：构建人氨肽酶N(APN)-谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白(APN-GST)，并进行原核表达。方法：根据人APN mRNA序列设计合成特异性引物，从人肝组织中提取总RNA并反转录成cDNA第一链，RT-PCR扩增人APN基因，并插入融合蛋白原核表达载体pGEX-4T，转化宿主菌BL21(DE3)细胞，异丙基锍基半乳糖(IPTG)诱导表达APN蛋白。包涵体经尿素变性、重折叠和亲和层析纯化。结果：重组质粒测序和酶切结果显示：APN基因已正确插入pGEX-4T，重组蛋白及纯化产物SDS-PAGE在135000处有一条明显的蛋白表达条带。结论：人APN基因已被成功地克隆、表达和纯化。     

EB病毒gp85 N端片段的原核表达与初步鉴定

目的：构建EB病毒的原核表达载体，并在大肠杆菌中进行表达；分析非搪基化的EB病毒包膜搪蛋白gps5N端截短片段的抗原性。方法：采用基因工程技术，以EB病毒B95—8细胞培养上清为模板，PCR扩增EB病毒的BXLF2基因N端片断。PCR产物经HindⅢ和xho Ⅰ双酶切，并插入原核表达载体pGEX-5T，构建pGEXST-85N重组表达质粒。在大肠杆菌BL21中诱导表达gp85N蛋白。纯化表达的蛋白进行蛋白免疫印迹鉴定，并免疫BALB/C小鼠。结果：序列分析表明。插入片段的序列与GenBank登录的参考序列完全—致。重组表达的蛋白的分子量约为45kD,与预期大小相符。可溶性重组蛋白纯化后免疫雕LuyC小鼠，经ELISA检测获得了高效价的多克隆抗体，且gp85单抗可识别所表达的gp85N抗原。Western blot结果显示，该抗原可与小鼠免疫血清起特异反应。结论：表达并纯化的EB病毒的截短gp85N重组蛋白具有良好的抗原性，为下一步分析所产生抗体的生物学特性提供条件。     

产毒性大肠杆菌菌毛(F_(41))单克隆抗体体内被动传递保护作用的研究

产毒性大肠杆菌(ETEC)F_(41)~ 菌株20 LD_(50)喂饲感染BALB/c新生乳鼠,在感染前、后3h,给母鼠尾静脉注射1∶10或1∶100稀释的抗F_(41)单克隆抗体(McAb),观察McAb对感染新生乳鼠的传递被动保护作用。结果发现,感染前McAb 1∶10的保护率为100％,1∶100的保护率为11.5％;感染后McAb 1∶10的保护率为51.7％,1∶100的保护率为4.1％。这表明传递被动保护作用是有效果的,保护效果与McAb的注射剂量和注射时间密切相关。