遗传性高铁血红蛋白血症分子诊断方法的研究

目的 探讨遗传性高铁血红蛋白血症的分子诊断方法。方法 采用RT-PCR和PCR产物直接测序法,对3例遗传性高铁血红蛋白血症患者细胞色素b5还原酶(b5R)cDNA编码区序列进行分析。通过基因组DNA的PCR-限制性酶切或PCR-序列测定,验证cDNA策略所检出的突变。结果 患者A的b5R cDNA在第527位碱基呈T/C杂合状态,第608位碱基呈G/A杂合状态;患者B的b5R cDNA在第170位碱基和第179位碱基均呈G/A杂合状态;患者C的b5R cDNA在第608位碱基呈G/A杂合状态,第791位碱基呈C/T杂合状态。基因组DNA策略与cDNA策略所得结果一致。结论 建立了遗传性高铁血红蛋白血症的分子诊断方法,并在3例患者中发现了3个以复合杂合子形式存在的、新的b5R基因突变。     

同源型凝血活酶试剂检测重组人野生型和突变型凝血因子Ⅶ

遗传性凝血因子Ⅶ（FVⅦ）缺乏症患者血浆中FⅦ凝血活性降低，出现不同程度的出血倾向。早先我们报道了遗传性FⅦ缺乏症2个家系患者的FⅦ基因存在Cys329Gly错义突变。为了研究该突变对FⅦ的功能影响，我们将野生型FⅦ和Cys329Gly突变型真核表达载体转染BHK-21细胞进行体外表达，并用自制同源型凝血酶原试剂[0]对表达产物进行凝血活性的检测。     

人精子特异性乳酸脱氢酶在大肠杆菌中的表达及其初步应用

目的 构建人精子特异性乳酸脱氢酶(hLDH-CA)的原核表达载体,在大肠杆菌中进行表达,将重组hLDH-CA应用于抗精子抗体(ASA)的检测.方法 以人睾丸TripIEx cDNA文库为模板,PCR扩增hLDH-CA编码序列.PCR产物经Hind Ⅲ-Xho I酶切后,克隆至表达载体pET-28a(+)中,在E.coli BL21(DE3)中诱导His-Tag融合的重组蛋白表达.用免疫印迹、酶活性测定等方法鉴定表达产物.以纯化的重组hLDH-CA为基质,建立检测ASA的ELISA方法.结果 构建了hLDH-C4原核表达载体pET-28a(+).hLDHC.在IPTG的诱导下,重组菌可高效表达相对分子质量35 000的产物,与预期大小相符.免疫印迹显示,重组蛋白可被抗His-Tag单克隆抗体和兔抗人LDH-C4抗体识别.重组菌在IPTG诱导后,其裂菌液的乳酸脱氢酶活性是诱导前的11.2倍.用基于hLDH-C4抗原的间接ELISA法,在一组不育症患者中检测血清抗hLDH-CA抗体,阳性率达30.51%.结论 成功地克隆了hLDH-C4编码序列,并在E.coli BL21(DE3)中获得高效的表达,重组hLDH-C4在ASA检测中得到初步应用.     

甲胎蛋白化学发光免疫定量检测试剂的研制与临床应用

目的研制肿瘤标志物甲胎蛋白化学发光免疫定量检测试剂并建立检测方法,进行初步的临床应用评价。,方法将甲胎蛋白单抗包被微孔板．以辣根过氧化物酶标记的甲胎蛋白抗体为二抗．结合鲁米诺化学发光底物系统．建立甲胎蛋白化学发光免疫定量检测方法。用甲胎蛋白检测试剂国家参考品分析所建立方法的准确性、灵敏度、稳定性和重复性等试剂性能．并与西门子公司的甲胎蛋白定量检测试剂同时检测临床血清样本350例,比较检测结果。结果所研制的试剂性能符合甲胎蛋白检测试剂国家参考品各项质量标准要求。批内变异系数4．1％。5.2％、批间变异系数4．7％;试剂盒置37℃考核3d,其稳定性良好。临床样本比对检测结果表明,两种方法相关性良好（相关系数r=0．9823,阴性符合率99．5％、阳性符合率98．7％,总符合率为99．1％,Kappa值为0．98,一致性强度为最强）。结论成功研制了快速、特异、敏感和稳定的甲胎蛋白化学发光免疫定量试剂并建立其检测方法适合临床检验推广应用。     

日本脑炎病毒DNA疫苗和基因工程亚单位颗粒疫苗的动物保护实验研究

目的　评价 3种日本脑炎病毒 (JEV)新型疫苗 ,即E蛋白病毒样颗粒 (VLPs)、DNA疫苗 (pV/JE)以及E蛋白颗粒 (Eps)的动物免疫效果。方法　BALB/c小鼠经 2次接种疫苗后 ,测定其病毒特异性的CTL活性、结合抗体、中和抗体 ,并以10LD5 0JEV攻击免疫小鼠 ,观察其保护效果。结果　各新型疫苗组的CTL活性为 33%～ 5 6 % ,灭活疫苗组为 2 2 % ,而载体和PBS对照组的CTL活性分别为 17%和 18%。一次免疫后 ,实验组小鼠血清结合抗体阳转率为 90 %。除DNA疫苗组外 ,各组小鼠的二次免疫血清抗体效价高于一次免疫的抗体效价 (P <0 0 5 ) ,且以VLPs加佐剂组小鼠血清抗体效价最高 ,Eps加佐剂组次之 ,均高于 pV/JE组和灭活疫苗组 (P <0 0 5 )。三种疫苗可诱发小鼠产生中和抗体。各实验组小鼠能够抵抗JEV的攻击 ,而对照组小鼠的死亡率为 37 5 %。结论　三种新型疫苗可以正确表达JEV的E蛋白表位 ,可诱发免疫小鼠产生抗JEV的中和抗体并有保护性作用 ,免疫效果优于灭活疫苗 ,有可能成为候选的JEV新型疫苗。     

乙型肝炎病毒前S1抗原化学发光免疫法与酶联免疫法检测试剂的临床比对

目的 将国产乙型肝炎病毒前S1抗原化学发光检测试剂与ELISA试剂进行临床比对评价.方法 收集临床乙肝患者的血清标本452份,分别用乙型肝炎病毒前S1抗原化学发光检测试剂与ELISA试剂进行检测.与ELISA试剂比对,计算化学发光检测试剂的特异度、灵敏度以及总符合率.并计算Kappa值,比较二者结果一致性.结果 与ELISA试剂比对,化学发光检测试剂的特异度为99.4％,灵敏度为100％,总符合率为99.8％,Kappa值为0.995,一致性强度为最强.结论 快速、特异、敏感的前S1抗原化学发光免疫检测试剂适合在临床上推广应用.     

槲皮素对糖尿病大鼠肾脏转化生长因子—β1（TGF—β1）表达的影响

目的　探讨槲皮素治疗糖尿病肾病的机制。方法　对链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠动物模型,给予槲皮素100mg/(kg     

治疗口腔感染首选奥硝唑

口腔感染是由厌氧菌引起的感染性疾病。常见的口腔感染主要有牙周炎、龋病、牙髓炎、牙根尖炎、牙冠周炎等。此类疾病的患者可出现牙痛、牙龈痛、牙龈肿胀等症状,这些症状在遇到冷热刺激或在患者进食时会明显加重。     

乳鼠接种编码乙型脑炎病毒PrM/E蛋白的重组质粒DNA可诱发保护性免疫

目的：评价乙型脑炎DNA疫苗对乳鼠的免疫保护效果．方法：以DNA疫苗(pV/JE)、质粒载体对照(pVAX1)和PBS接种BALB／c乳鼠后，测定其病毒特异性的CTL活性、结合抗体、中和抗体，并以100LD50JEV攻击，观察保护效果．结果：DNA疫苗组的CTL活性为37．5％，而载体和PBS对照组的CTL活性分别为18％和8．5％．二次免疫后DNA疫苗组的免疫荧光抗体滴度为1：28．3(几何平均效价)，抗体阳转率为80％(8／10)；混合血清的中和抗体效价为1：40．JEV攻击后，DNA疫苗组小鼠获得75％(6／8)的保护率，而对照组小鼠全部死亡．结论：所构建的DNA疫苗可诱发乳鼠产生抗JEV的CTL活性、中和抗体及保护活性，为JEV新型疫苗的研制提供重要的实验依据．     

产毒性大肠杆菌菌毛K_(99)抗原单克隆抗体的研制及初步鉴定

本文应用Sephadex A-50层析柱纯化的产毒性大肠杆菌(ETEC O_(101)·K_(99)~ ·H~-株)免疫BALB/c小鼠,取其脾脏细胞与Sp2/0-As14骨髓瘤细胞系融合,获得17株抗K_(99)抗原杂交瘤细胞。对其中5C_5细胞株经三次克隆化,达100％阳性,传代三个月及液氮保存复苏,生长良好,并能持续分泌抗K_(99)抗原的单克隆抗体。IF法测定杂交瘤细胞培养上清,阳性滴度为