CDKN 2/p16基因甲基化失活与肺癌关系的研究

目的 研究ＣＤＫＮ２／ｐ１６基因５’端调控序列区ＣｐＧ岛甲基化的状态与肺癌发展的关系。方法 采用甲基化敏感性核酸酶切基因组ＤＮＡ的方法,对８９例肺癌的ＣＤＳＮ２／ｐ１６基因进行了Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析。结果 ８９例肺癌发现该基因甲基化２１例,甲基化频率为２３．６％（２１／８９）,其中１７例发生于４２例Ｐ１６蛋白 阴性表达的患者。结论 ＣＤＫＮ２ｐ／１６基因５’端ＣｐＧ岛甲基化可能是该基因失活的重     

星形细胞瘤患者癌组织和血清miR 497表达下降及其临床意义

摘要：目的：检测星形细胞瘤患者癌组织和血清中miR-497的表达水平及治疗前后血清miR-497的变化,探讨其作为分子标志物的可能性。 方法：采集8例星形细胞瘤患者癌组织、4例癌旁组织、3例正常脑组织以及133例治疗前患者的（WHO Ⅱ级55例、Ⅲ级45例和IV级33例）血清样本,用实时荧光定量RT-PCR法检测miR-497含量,并以80例年龄、性别匹配的健康人作对照。对其中14例患者进行术前、术后血清miR-497含量的比较,ROC曲线分析miR-497对星形细胞瘤的诊断价值。 结果：miR-497在癌组织中的表达量明显低于癌旁组织和正常脑组织 (F=13.78,P<0.05),在患者血清中的浓度也显著降低［（112.69±54.58） fmol/L vs （254.32±142.12） fmol/L,t=10.31,P<0.01］。用于星形细胞瘤诊断的miR 497 ROC曲线下面积（AUC^ROC）为0.894 (95% CI, 0.853～0.935),敏感性为82%,特异性为90%。血清miR 497在患者术后明显上升［术后（165.69± 56.87） fmol/L vs 术前（93.77±38.50） fmol/L,t=3.92,P<0.01。 结论: 星形细胞瘤患者癌组织和血清miR-497低表达,miR-497有望作为该病诊断及预后评价的检测指标。     

离子色谱法测定磺丁基醚-β-环糊精中4-羟基丁磺酸

目的：建立磺丁基醚-B-环糊精中4-羟基丁磺酸的离子色谱检测方法。方法：采用IonPacAS23阴离子型交换柱（250mm×4mm）为分析柱,IonPacAG23（50mm×4mm）为保护柱,7mmol·L-1NaHCO3水溶液为淋洗液,流速为1．0mL·min-1,以电导检测器检测。结果：在建立的色谱条件下,磺丁基醚-B-环糊精样品中4-羟基丁磺酸与其他杂质离子实现基线分离,4-羟基丁磺酸在2～20mg·L-1范围内线性良好（r=0．9998）,平均回收率为100．2％（RSD=1．3％,n=9）,检测限与定量限分别为2和5ng。结论：该方法操作简便,结果准确、可靠,适用于磺丁基醚-B-环糊精中4-羟基丁磺酸的限量检查。     

两种量子点标记用于抗核抗体检测的对比研究与评价

目的对比研究两种不同粒径量子点(QDs)标记抗体在抗核抗体(ANA)检测中的成像效果,评价其在临床样本检测中的应用价值。方法 Hep-2细胞为抗原片,分别以QD655和QD605标记第二抗体(二抗),用间接免疫荧光分析(IIFA)检测114例自身免疫病患者和30例健康对照者血清ANA,以异硫氰酸荧光素(FITC)标记的二抗为对照。单特异性ANA用免疫印迹法(IBT)确认。比较和评价各法应用效果。结果经对114例患者血清研究发现,两种QD标记二抗均可见与FITC标记二抗检测ANA结果相同或类似的荧光模式,但ANA滴度略显不同,对核颗粒型与胞浆颗粒型ANA测定灵敏度以QD655为最高,QD605次之,FITC标记二抗相对较弱。而对核均质型、核仁型与核着丝点型ANA测定灵敏度高低依次为FITC、QD655和QD605标记二抗。相关分析结果显示,两种QD与FITC标记物检测ANA滴度结果均呈高度正相关,r值分别为0.834、0.832(P均<0.01)。两种QD标记二抗对核颗粒型、胞浆颗粒型荧光模式与FITC标记二抗检测结果阳性符合率均为100%;而核均质型与核仁型检测,阳性结果符合率为80.6%～84.4%。30例用FITC标记二抗检测ANA阴性血清中,两种QD标记二抗检测均见1例ANA阳性。两种QD与FITC标记物检测ANA总符合率均超过90.0%,有高度的一致性(Kappa值均>0.75)。结论 QD655和QD605标记二抗用于ANA检测总体结果稳定、灵敏、可行;QDs粒径越大其标记二抗测定ANA灵敏度越高,但对某些低滴度免疫荧光核型(包括核均质型、核仁型与核着丝点型)ANA有漏检可能。     

白念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段Set1-208p的原核细胞表达及鉴定

摘要：目的：原核细胞表达白念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段Set1-208p,鉴定重组蛋白质的抗原性。 方法：用比对软件对白念珠菌H3K4甲基转移酶与其他物种甲基转移酶进行比对。选择与人类无同源性的抗原特异性片段,以白念珠菌C1标准株基因组DNA为模板,PCR扩增Set1-208p的编码基因,以pET28a (+) 为载体,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白质表达。用抗His标签的单克隆抗体鉴定融合蛋白,并用确诊侵袭性白念珠菌感染（IC）患者血清进行抗原性鉴定。 结果：成功克隆了白念珠菌抗原特异性H3K4甲基转移酶片段Set1-208p基因并诱导表达,获得了纯化的重组肽段,所得蛋白质分子量（Mr）约为29 000,带有His标签,经western blot鉴定,诱导的重组蛋白可与IC患者血清特异性反应。 结论：成功诱导表达了具有良好抗原反应性的Set1-208p重组蛋白质,为建立相应的抗原、抗体ELISA检测方法提供基础。     

肝素寡糖通过抑制PKC-α影响血管平滑肌细胞增殖的作用(英文)

为考察肝素寡糖对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用,并探索其相关细胞内信号转导机制,采用cell-based ELISA法、RT-PCR法、Western blotting法和免疫细胞化学法检测细胞内PKC-α蛋白水平和mRNA水平;采用RT-PCR法检测c-jun、c-myc和c-fos等3种原癌基因的mRNA水平。结果显示,肝素寡糖可以抑制新生牛血清诱导的PKC-α和原癌基因的表达,这可能是肝素寡糖抑制血管平滑肌细胞增殖的机制之一;流式细胞实验结果显示,肝素寡糖能将细胞阻滞于G0/G1期,从而阻断细胞周期进程。综上所述,肝素寡糖可能通过抑制PKC-α表达,进而抑制原癌基因的表达,阻断细胞G1/S期转换,从而抑制血管平滑肌细胞的增殖。     

人精子蛋白SP22在睾丸、精子中的分布与定位

目的：以原核表达的人精子蛋白SP22制备其兔多克隆抗体,研究人精子蛋白SP22在人睾丸和精子中的分布与定位。方法：在E.Coli中诱导表达SP22基因,以纯化出的重组人精子蛋白htSP22为抗原制备兔抗人SP22多克隆抗体,运用免疫组织化学分析SP22在人睾丸和精子中的分布与定位。结果：表达出了分子量约22000的重组htSP22蛋白,制备获得了能特异性识别睾丸、精子中天然SP22蛋白的兔抗人SP22多克隆抗体。免疫组织及细胞化学证明SP22存在于曲细精管中各类生精细胞及精子头部表面。结论：制备的抗体具有特异性,SP22存在于睾丸曲细精管中各类生精细胞及精子头部表面。     

鲨鱼软骨活性物质研究进展

鲨鱼软骨含有大量粘多糖和活性蛋白因子,其粘多糖具有抗凝血、溶血栓、提高机体免疫力功能等作用,活性蛋白因子能抗肿瘤、抑制新生血管生成,因而鲨鱼软骨有希望成为治疗肿瘤的新型药物。     

非细胞体系小鼠卵母细胞游离生发泡减数分裂的启动

目的 :建立有效的哺乳动物卵母细胞生发泡的分离方法 ,并使之在构建的非细胞体系中发生减数分裂的重新启动。　方法 :采用直接取核法获取卵母细胞生发泡 ,用同步化的HeLa细胞裂解液构建非细胞体系 ,将游离的生发泡培养在裂解液中 ,并加入荧光染料Hoechest 33342 ,观察染色质的变化情况。　结果 :M期裂解液可以诱导生发泡的染色质出现凝集现象 ,而G2 期早期的裂解液无此现象发生。　结论 :用直接取核法可成功分离出游离的生发泡 ,且它们在体外培养条件下可以和体内一样发生染色质凝集现象     

肝炎病人中不同基因型TTV的检出及序列分析

目的：了解TTV在肝炎病人中的感染率及基因型别。方法：采用半式套式PCR方法,对72例不同型别的肝炎病人血清进行TTV DNA的PCR检测并对部分阳性株进行序列测定及计算机分析。结果：在72例不同肝炎病人中,共检出39例TTV DNA阳性血清, 总检出率为54．16％。其中在非甲庚型肝炎病人中TTV DNA阳性率为87．5％,而在明确诊断为甲－庚型肝炎病人中TTV DNA阳性率为50％,两组相比差异显（x^2＝4．0278,P＜0．05）。测序的6分离株相互间的核酸同源性为60．4％－93．2％,氨基酸的同源性为54．1％－97．3％。这6个分离株与9个G1、G2代表株核酸的同源性为60．4％－99．1％,氨基酸的同源性为55．4％－98．6％。经系统发育分析表明这6株TTV可分属于G1、G2两个基因型的4个亚型。结论：非甲－庚型肝炎病人的TTV感染率明显高于明确病原的甲－庚型肝炎的病原之一。检出的TTV至少可分属于G1、G2两个基因型中的4个亚型。