化脓性链球菌高毒力株特异基因文库的构建和分析

目的构建化脓性链球菌高毒力株特异基因文库,克隆和筛选化脓性链球菌高毒力株特异表达基因。方法采用抑制消减杂交技术(SSH),以从患者体内所分离链球菌为毒力菌株,分离特异表达基因,将其与T载体进行T/A连接构建文库,将连接产物转化感受态大肠杆菌TOP10进行文库扩增后,转化菌液涂布于LB固体平板,构建化脓性链球菌毒力株特异基因消减文库,用斑点杂交初步筛选消减文库后,将获得的阳性克隆进行测序和同源性分析。结果酶切产物为100～2 000bp,连接效率大于50%,消减组与非消减组差异明显,成功构建了化脓性链球菌毒力株特异基因消减文库,所得阳性克隆经斑点杂交筛选后测序,与Genebank数据库进行同源性比对,5个未知序列可能为新基因,7个与已知基因有高度的同源性。结论用SSH及T/A克隆技术成功构建了人源化脓性链球菌高毒力株基因文库,5个未知的新序列有待于进一步的研究。     

夜香牛全草的生物活性化学成分研究(Ⅱ)

目的:研究广西产夜香牛生物活性化学成分.方法:用鼠性肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC-12细胞活性跟踪筛选,柱色谱方法分离化合物,谱学方法鉴定化合物结构.结果:分离得到12个化合物,根据谱学数据分析鉴定其结构分别为(一)clovane-2,9-diol(1),caryolane-1,9β-diol(2),洋芹素(3),金圣草素(4),木犀草素(5),金圣草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(6),木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(7),槲皮素(8),洋芹素-4'-O-β-D-葡萄糖苷(9),金丝桃苷(10),β-amyrin aceate(11),lupeol acetate(12).结论:化合物1,2,6和10均为首次自该属植物中分离得到.     

系统性红斑狼疮患者干扰素诱导基因的表达及其与疾病活动性的相关性研究

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中5个干扰素(IFN)诱导基因(IFIT1、IFIT4、OAS1、OASL、ISG15)的表达及其与SLE疾病活动度的相关性.方法 运用SYBRgreen dye I实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测76例SLE患者与54名健康对照人的IFIT1、IFIT4、OASL、OASL及ISG15 mRNA表达水平(以-AACt值表示),并且与红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、补体C3、C4、抗核抗体(ANA)及抗dsDNA抗体等指标比较,分析IFIT1、IFIT4、OAS1、OASL、ISG15 mRNA表达水平以及上述常规检测指标与SLE疾病活动指数(SLEDAI)积分之间的相关性.结果 ①SLE组与正常对照组相比,IFIT1、IFIT4、OAS1、OASL及ISG15 mRNA表达显著增高(P＜0.01);SLE活动组与SLE缓解组比较,IFIT1、IFIT4、OAS1、OASL及ISG15 mRNA表达增高(P＜0.05);SLE组IFIT1、IFIT4、OAS1、OASL及ISG15 mRNA表达水平之间呈正相关(r＞0.5,P＜0.05).②SLE组IFIT1、IFIT4、OAS1、OASL及ISG15 mRNA表达水平均与SLEDAI积分呈显著正相关(r＞0.5,P＜0.05).③ESR、CRP、补体C3、C4、ANA与IFIT1、IFIT4、OAS1、OASL、ISG15 mRNA表达水平及SLEDAI积分均无相关性,抗dsDNA抗体与IFIT1、IFIT4、OAS1、OASL、ISG15 mRNA表达水平及SLEDAI积分呈正相关(r＞0.5,P＜0.05).结论 SLE患者IFIT1、IFIT4、OAS1、OASL及ISG15的表达水平在SLE患者中显著增高,并且与SLEDAI积分呈显著正相关,对SLE患者病情活动度和病情严重度的判断均有较大价值,抑制这5个基因的表达可能为SLE的治疗提供新的靶点.     

人精子CatSper1 mRNA表达与精子活力的相关性研究

目的研究不同精子活力的人精子中精子特异性阳离子通道蛋白1(CatSper1)mRNA的表达差异,以及其与精子活力相关指标的相关性。方法分别收集少、弱精症患者精液标本和健康人对照精液标本各25份,用Trizol试剂提取精子中的总RNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测CatSper1 mRNA表达改变。结果少、弱精症组CatSper1 mRNA表达水平与健康人对照组相比,差异具有统计学意义[(0.54±0.01)vs(1.13±0.05),P<0.01]。CatSper1 mRNA表达与精子活率以及a+b级精子百分率之间呈显著正相关。结论人精子CatSper1 mRNA表达与人精子活力呈正相关。     

与血脂水平相关的等位基因图谱研究进展

研究表明,至少有19个基因区域具有共同的与低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol, LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol, HDL-C)和(或)三酰甘油(triglyceride, TG)有关的DNA单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms, SNP).许多基因的常见变异导致人和(或)小鼠单基因血脂异常,研究基因区域中常见和罕见的变异等位基因图谱有助于血脂研究.全基因组研究应查明其他的位点,并进行测序,以明确所有相关的等位基因,并获得基因型和表型关系的全图谱,将这些结果应用于临床实践,为临床危险分层和治疗干预靶点提供依据.     

南京市精液分析质量控制的初步研究

目的:调查并分析南京市各家医院对精液分析项目中的精子浓度、精浆果糖、α葡糖苷酶及酸性磷酸酶(ACP)的检测结果,为进一步开展省内乃至全国范围内的精液分析的外部质量控制打下基础。方法:制备低、高浓度的4种检测项目的质控品8份,分装后检测每份质控品的结果并计算变异系数(CV)。质控品分发至南京市11家医院,收集并分析质控品回收结果。以分装后检测结果为参考值,计算不同实验室测得的质控品结果的总相对误差(RE)。结果:8份质控品分装后检测的CV为3.83%~11.16%。11家医院回报的精子浓度结果11份,精浆α葡糖苷酶、果糖和ACP结果5份。不同实验室高、低浓度精浆果糖的检测结果差异最小(CV分别为8.99%和3.95%),其次为α葡糖苷酶(CV分别为16.66%和18.41%),而精浆ACP的检测结果差异最大,CV分别为54.12%和65.58%。RE亦有相同的趋势,不同实验室精浆果糖检测的总RE分别为11.99%和20.31%,α葡糖苷酶为22.92%和27.26%,而ACP为7.34%和318.35%,即高浓度ACP检测结果的RE最大。11家医院中,6家用计算机辅助精液分析(CASA)系统检测精子浓度,5家用改良牛鲍血球计数池的方法检测。血球计数池计数的精子浓度结果[分别为(62.74±16.63)×106/m l和(163.32±36.24)×106/m l]和RE值(分别为148.47%和187.59%)显著高于CASA系统检测的结果分别为[(24.88±4.16)×106/m l和(54.24±23.06)×106/m l]和RE值(分别为13.97%和10.48%)。结论:目前男科学实验室精浆α葡糖苷酶和果糖的检测方法比较稳定,结果的变异在可接受的范围内,而ACP检测的方法可能不适合于临床常规使用,尚需进一步改进。血球计数池明显高估精子浓度,不适合用作精子浓度分析。     

荧光定量聚合酶链反应检测去颌下腺大鼠睾丸Bcl 2和Bax mRNA的改变

目的观察切除颌下腺对大鼠睾丸Bax和Bcl 2 mRNA表达的影响。方法切除大鼠颌下腺,分别于术后14、28和42 d处死大鼠,提取睾丸总RNA,反转录,设计特异性引物和Taqman探针,荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测Bax和Bcl 2 mRNA的改变。结果随着颌下腺切除时间的延长,实验组大鼠睾丸Bax和Bcl 2 mRNA的比值显著升高,与对照组比较,有显著性差异(P<0.01)。结论颌下腺切除大鼠睾丸Bax和Bcl 2 mRNA比值明显升高,提示颌下腺切除所致的大鼠睾丸生精细胞的凋亡可能是由Bax和Bcl 2介导的线粒体途径进行,但Fas/FasL是否参与该凋亡过程还有待进一步研究。     

癌细胞的特点及原癌基因的来源—关于癌症起源于原始生物的假说

癌症是危及人生命的严重疾病，百年来，人类对癌症病理研究的不断深入，其治疗效果的 不断提高，令世人瞩目，但根治癌症依然是人类医学极有价值的重大课题。本文针对癌症的发病机制，重点探讨癌细胞的特点以及原癌基因的来源，从而提出癌症起源于原始生物的假说。     

SNCG基因转染对PC-3细胞抗肿瘤药物作用效果的影响

目的:观察转染了质粒PCI-NEO-SNCG后的前列腺癌激素非依赖性细胞系PC-3细胞对抗肿瘤药物顺铂(DDP)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、阿霉素(ADM)、长春新碱(VCR)、紫杉醇(TAX)的敏感性,探讨SNCG的表达对各种抗肿瘤药物作用效果的影响。方法:转染质粒PCI-NEO和PCI-NEO-SNCG至PC-3细胞,采用RT-PCR法检测PC-3细胞中SNCG的表达;MTT法检测各抗肿瘤药物对转染后PC-3细胞的抑制作用;流式细胞术分析转染细胞经TAX作用后的细胞周期及凋亡。结果:5种抗肿瘤药物对转染了空载体PCI-NEO质粒及PCI-NEO-SNCG质粒细胞的生长抑制作用均存在时间依赖性;转染PCI-NEO的PC-3细胞组与转染PCI-NEO-SNCG的PC-3细胞组中各种抗肿瘤药物的抑制效果比较显示,DDP、5-FU、ADM、VCR的抑制效果两组间没有显著性差异(P>0.05),而TAX对转染PCI-NEO-SNCG的细胞的抑制率较转染PCI-NEO的细胞显著降低(P<0.01);经TAX处理48 h后,在转染PCI-NEO质粒的细胞中,停留在G2-M期的细胞比例显著高于转染PCI-NEO-SNCG质粒的细胞(P<0.01),而停留在G0-G1期及S期的细胞比例,在转染PCI-NEO质粒的细胞中显著低于转染PCI-NEO-SNCG质粒的细胞(P<0.01);在转染PCI-NEO质粒的细胞中Caspase-3的表达显著高于转染PCI-NEO-SNCG质粒的细胞(P<0.01)。结论:TAX对转染了SNCG基因的PC-3细胞中的生长抑制作用明显降低,提示SNCG的表达可抑制TAX的作用效果,这一发现可为前列腺癌的个体化治疗提供理论依据和指导。