O139群霍乱弧菌地方分离株的分子特征研究

目的研究本地分离出的O139群霍乱弧菌的分子特征,建立霍乱暴发和散发的快速检测及流行病学溯源的有效手段。方法采用PCR方法对霍乱弧菌进行4种毒力基因的检测,用随机扩增多态性分析(RAPD)及SPSS软件对以上菌株进行多态性分析,对霍乱弧菌毒力进行快速测定和分子分型。结果5株O139群霍乱弧菌均可检出四种毒力基因。所有霍乱弧菌的RAPD结果经聚类分析可分为3个聚类群,较好地反应了不同群的霍乱弧菌之间的亲缘关系。结论可将PCR和RAPD方法结合分析用于霍乱疫情的快速检测和流行病学溯源。     

甲型流感病毒空斑形成技术的改进和应用

数为0.01,高峰期为感染后第4天.结论 该方法经改进可应用于标准病毒株及临床样本的病毒定量检测和确定流感病毒最佳感染复数;低MOI感染复数易于获得高滴度流感病毒.     

二甲基亚砜诱导HL-60细胞分化的比较蛋白质组学研究

不同的诱导分化剂可诱导急性髓系白血病细胞系HL-60细胞向不同谱系的细胞分化[1].二甲基亚砜( DMSO)由于其溶解极性和非极性化合物能力极强而被广泛用作溶剂.目前,DMSO作为细胞低温保鲜剂(浓度一般在10％)可直接给患者注射[2].据最新报道,DMS0可通过活化转录因子促进成骨细胞分化[3].我们采用比较蛋白质组学方法,研究DMSO诱导HL-60细胞分化过程中蛋白质的差异表达,并探讨其可能的分子机制.     

应用空斑形成法检测五种不同细胞对肠道病毒71型的敏感性

目的:建立肠道病毒71型(EV71)的空班形成方法, 并比较BGM、VeroE6、MRC-5、HEp-2及A549五种细胞对EV71病毒的敏感性.方法:将不同稀释浓度的EV71病毒接种到五种细胞, 分别覆盖三种不同的培养物, 孵育一定时间后固定染色, 比较出斑效果;以新建空斑形成法测定五种细胞感染EV71 24-96 h后培养液滴度, 计算空班形成单位(pfu).结果:在五种细胞中, BGM和VeroE6覆盖琼脂糖凝胶的EV71可形成针尖样空班;覆盖1%甲基纤维素的EV71可形成直径大约1 mm圆形或类圆形空班, 形成空斑单位最多, 病毒滴度分别达2.87×109 pfu/L和1.65×109 pfu/L;覆盖1.2%艾维素的EV71在BGM细胞中可形成直径大约0.5 mm类圆形空斑, 在VeroE6细胞中形成针尖样空斑;其他细胞均形成针尖样空斑.结论:空斑形成方法可对肠道病毒进行定量检测, BGM及VeroE6细胞为EV71的敏感细胞.     

ICU铜绿假单胞菌感染暴发的随机扩增多态性DNA分子分型 FREE

目的对铜绿假单胞菌（PA）进行随机扩增多态性ＤＮＡ(RAPD)分子分型,探讨重症监护室(ICU)中PＡ医院感染的流行规律。方法采用RAPD技术对13株分离自某院ICU临床诊断为医院感染肺炎患者下呼吸道标本的PＡ进行分型，并与抗菌药物耐药谱分型比较。结果13株PＡ产生A型（12株，92.31%）和B型（1株，7.69%）2种耐药表型，优势耐药表型为A型；RAPD分型可分2型，分别为Ⅰ型(6株，46.15%)和Ⅱ型(7株，53.85%)。7株分子Ⅱ型和5株分子Ⅰ型的耐药A型PA是优势菌株，可判断为引起ICU中PA医院感染暴发的病原菌。结论ICU存在PA暴发流行，流行株为耐药A型/分子Ⅱ型、耐药A型/分子Ⅰ型。PA产生多重耐药性，RAPD分型是目前比较理想的分子流行病学溯源手段。     

军团菌分离培养法的改进及应用

目的 建立完善军团菌分离培养的检验方法，提高阳性检出率。方法 用分离培养法，依据菌落形态和在缺乏L-半胱氨酸的平板和血平板不生长初判军团菌，再用血清凝集进行分型，结合生化反应和PCR结果进行确证。结果 用本方法成功检测出军团菌，在2003年对广州地区各种水体进行军团菌检测，121宗水样中分离出军团菌31宗，总污染率为25．6％，其中公共场所冷却塔水中军团菌污染率为43．48％。阳性率与国内外报道接近。结论 本方法有很好的分离培养效果，广州地区部分水体中存在军团菌污染，尤以公共场所冷却塔水中军团菌污染情况较为严重。     

从疑似炭疽病人检出粪肠球菌和大肠埃希菌

目的：对疑似炭疽病人标本进行炭疽杆菌和肠道致病菌检验。方法：按照CB17015—1997，《全国临床检验操作规程》(1991年版)所规定的程序和方法进行。结果：排除炭疽杆菌感染的可能性，经VITEK120-AMS系统鉴定，从病人标本中检出粪肠球菌和大肠埃希菌，药敏试验表明这2种细菌对环丙沙星敏感，结论：应该在加强炭疽疫情的监测和报告制度的同时，加强对医院内感染的监测，合理使用抗生素，减少医院内感染发生。     

大鼠肝脏混合功能氧化酶系在黄磷肝损伤中的变化特点和作用

雄性SD大鼠按1、3和6mg/kg急性经口给予黄磷,24小时后肝脏P_(450)、b_5和苯胺羟化酶在3和6mg/kg组出现抑制并随时间延长而抑制增加1mg/kg组则出现阶段性升高:另外动物每周按2mg/kg染磷5周,脱甲基酶在早期升高,苯胺羟化酶在后期升高,P_(450)变化不大,b_5在后期出现降低。苯巴比妥预处理动物可以明显增加黄磷的肝毒性,除肝中甘油三酯、血清r-GT和SGPT大幅度提高外,尚有明显的坏死灶出现。实验结果提示黄磷可以影响体内的混合功能氧化酶系统并在该系统代谢后可能转变成毒性较原型为大的代谢物。黄磷诱导差示光谱显示在415nm处出现一个明显的负吸收峰,但在380nm处附近未见新的吸收峰。文章还对黄磷影响MFO系统的可能机理进行了探讨。     

PCR-RFLP和PCR-SSCP技术在肠杆菌科食源性感染致病菌鉴定中的应用

目的 探讨运用PCR-RFLP和PCR-SSCP技术建立肠杆菌科食源性感染常见致病菌快速鉴定方法的可行性。方法 选取肠杆菌科食源性感染14种常见致病菌的23SrRNA基因作为鉴别靶基因，采用通用引物PCR（UP-PCR）进行扩增，并对PCR产物的酶切片段进行限制性酶切片段长度多态性分析（RFLP）和单链构象多态性分析（SSCP）。结果 针对23SrRNA基因片段的Hpa Ⅱ酶切产物的RFLP分析表明，不同种属的致病菌表现出相似的RFLP图谱。SSCP分析显示，14种肠杆菌科常见致病菌SSCP图谱变异性很大，有利于进行细菌鉴定。结论 运用PCR-SSCP技术可进行肠杆菌科食源性感染致病菌的快速鉴定。