高亲和力抗乙型肝炎表面抗原单克隆抗体制备及检测变异HBsAg方法的建立

目的制备抗乙型肝炎表面抗原(HBsAg)单克隆抗体,建立检测变异HBsAg的方法。方法用血源HB-sAg免疫BALB/c小鼠,制备可以识别变异HBsAg的抗-HBs单抗。筛选出可以较好识别变异HBsAg的单抗mAb1,优化该抗体ELISA检测HBsAg的方法,与2种HBsAg检测试剂比较检测变异HBsAg的能力。对6份临床样品进行检测及序列分析,以证实方法的可靠性。结果经过筛选,得到1种可以较好识别包括G145R在内的大多数变异HB-sAg的单抗。检测变异HBsAg的能力优于市售HBsAg诊断试剂。结论制备的单抗可以用于ELISA检测变异HB-sAg,减少HBsAg变异株的漏检率。     

中国旱獭干扰素α家族基因在真核细胞和原核细胞中的表达

目的将不同基因型中国早獭干扰素α（IFNα）基因在真核和原核细胞中进行表达，检测其生物学活性，以期利用克隆的中国旱獭IFN在动物模型上探索慢性乙型肝炎有效的IFN治疗方案和策略。方法利用分子克隆技术将14个不同亚型的中国旱獭IFNα家族基因亚克隆到真核表达载体，将中国旱獭IFNα5亚型基因亚克隆到原核表达载体。病毒保护实验检测表达产物的生物学活性，比较不同基因亚型IFNα生物学活性的差异，分析中国旱獭IFNα生物学活性的种属特异性。结果l4个基因亚型中国旱獭IFNα中，8个功能基因亚型真核表达产物有生物学活性，而6个假基因亚型产物没有生物学活性，8个功能基因亚型真核表达产物生物学活性仔在差异，且其活性都受种属特异性限制。原核表达纯化产物具有较好的生物学活性。结论中国旱獭IFNα家族基因能在真核和原核细胞中表达，表达产物具有生物学活性。本研究为在中国旱獭乙型肝炎病毒感染模型上探索IFN治疗策略奠定了实验基础。     

医护分开核算分组实现方法

本文从软件方面来说明如何实现医护分开、核算分组的方法。依托信息化管理平台实现跨护理单元收治，提高床位利用率．充分利用现有的医疗资源，提高医务人员的积极性，促进医院经济效益快速增长。     

推行全成本核算管理的运营模式与效果

通过两年推行全成本核算管理以及实行物资集中采购、全程量化、跟踪管理取得明显成效。全院质量效益意识明显增强;经济效益明显提高;管理工作规范有序;运行成本下降;军事效益不断提高。     

G145R变异HBsAg免疫检测方法的建立及其应用特征的实验研究

目的 建立G145R变异HBsAg检测ELISA,并探讨其应用特征.方法 采用SPA亲和层析纯化抗体;以抗G145R变异HBsAg McAb包被,羊抗HBs-HRP示踪,建立双抗体夹心ELISA;将该法初步应用于临床标本的检测,并将阳性标本以PCR、DNA直接测序、雅培Abbott试剂等方法做对比分析,探讨其临床检测特征.结果 该法能特异检测G145R变异HBsAg,而与野生型HBsAg无交叉反应,灵敏度约为2.0μg/L;平均批内及批间CV分别为(8.87±3.04)%和(8.3±2.95)%.该法从206例特定HBV感染相关标本中检出阳性18份,阳性率为8.7%;18份阳性标本中HBV DNA阳性6例,直接测序检出I126A及M133T各一例;雅培Abbott试剂检测该6份标本HBsAg含量在(4.62～211)IU/ml间.结论 建立了一种快速、简便的G145R变异HBsAg检测ELISA,该法也能检测部分具有类似抗原性漂移的其它逃逸变异HBsAg.     

土拨鼠肝炎病毒核心蛋白质粒的构建、原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定

目的构建土拨鼠肝炎病毒核心蛋白质粒并进行原核表达、抗体制备。方法应用基因工程技术将编码截短型土拨鼠肝炎病毒核心蛋白（WHcAg1～149aa）的基因片段装入原核表达载体pQE60上,在JM109菌内进行诱导表达,使用切胶回收及Ni-NTA柱两种方法纯化目的蛋白。将纯化蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并采用酶联免疫吸附实验、免疫组织化学及Western blot检测抗体的灵敏度和特异性。结果成功地构建了含截短型土拨鼠肝炎病毒核心区基因的质粒并获得表达,经纯化得到了分子量约为16.5kD的重组核心蛋白,免疫家兔获得了高效价的特异性多克隆抗体,而且与HBcAg有交叉反应。结论获得的重组截短型土拨鼠肝炎病毒核心抗原（1～149aa）纯度高,免疫原性强。获得的兔抗-WHc效价高,特异性好,与HBcAg有交叉反应。     

筛选出一株可识别多种变异HBsAg的单克隆抗体及其应用

目的 制备筛选可识别变异表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)的单克隆抗体(monoclonal antibody, mAb).用筛选出的单克隆抗体建立检测变异HBsAg的ELISA实验方法.方法 用血源HBsAg免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术制备抗-HBs单克隆抗体.不同单克隆抗体包被酶标反应孔,检测真核细胞表达的野生及变异HBsAg,了解各种单克隆抗体的反应模式 .筛选出可以较好识别变异HBsAg的单克隆抗体Hb1,优化该抗体ELISA检测HBsAg的方法,与 8种HBs Ag检测试剂比较检测变异HBsAg的能力.结果 经过筛选,得到一种可以较好识别包括G145R在内大多数变异HBsAg的单克隆抗体.检测变异HBsAg的能力优于市售HBsAg 诊断试剂.结论 用本实验制备的单克隆抗体可以用于ELISA检测变异HBsAg,减少HBsAg变异株的漏检率.     

螺杆菌感染与NF-κB p65蛋白表达相关性在人食管癌发生中的意义

目的研究人食管癌是否存在螺杆菌感染及其与NF-κB p65蛋白的关系,从而探讨在人食管癌发生中的意义。方法随机收集食管癌标本40例和正常食管标本10例,采用聚合酶链反应(PCR)扩增螺杆菌16S rRNA,随机选4例测序及同源比较。阳性者再扩增幽门螺杆菌(H.pylori, Hp)的特异基因相对分子质量(M_r)26×10~3的种特异性抗原和相关功能基因(CagA,VacA)。并采用免疫组化法检测食管癌组织中NF-κB p65蛋白的表达情况。结果32.5%(13/40)的食管癌组织中发现有螺杆菌16S rRNA基因存在,正常人食管组织无一例阳性。4例测序及同源比较,食管癌组织中螺杆菌序列与H.pylori的16S rRNA序列有99%～100%同源性。阳性标本均扩增出Hp特异基因M_r 26×10~3种特异性抗原,但仅2例扩增出CagA基因,3例扩增出VacA基因。免疫组化法染色显示,16S rRNA阳性的食管癌组织中NF-κB p65蛋白表达率为100%(13/13),而16S rRNA阴性食管癌组织表达率仅占18.5%(5/27),二者差异有统计学意义(P<0.01)。结论食管癌患者食管组织存在螺杆菌感染,该螺杆菌可能为Hp。螺杆菌感染导致食管黏膜NF-κB p65蛋白表达的增加,可能在食管癌生成中作为信号传导机制之一。     

PD-1/PD-L1抑制性通路在病毒性感染中的研究进展

杀伤性T细胞(CTL)是病毒感染过程中主要的效应细胞.在急性病毒性感染中,CTL细胞通过杀伤病毒感染的细胞,分泌抗病毒细胞因子从而有效清除病毒.而在慢性病毒感染过程中,病毒特异性CTL发生克隆耗竭,细胞数量少,细胞功能受损,分泌细胞因子能力下降.目前证明,CD28家族成员Programmed Death-1(PD-1)是一种重要的细胞表面分子,能够抑制CTL细胞功能,参与外周免疫耐受,维持T细胞克隆耗竭,保护机体不受免疫病理损伤.在慢性病毒性感染中,T细胞表面的PD-1与其受体PD-L1/2结合后,传递抑制性信号,下调外周T细胞功能.阻断PD-1通路,能够重建CD8+T细胞功能,抑制病毒复制,促进病毒清除.因此,通过干扰PD-1/PD-L1抑制途径进行免疫调节,可能是处理慢性病毒感染性疾病的一个新方法.     

肝硬化患者血浆刺激内皮产生一氧化氮的实验研究

目的 研究肝硬化患者血浆能否刺激血管内皮细胞产生一氧化氮。方法 分别用正常人血浆和肝硬化患者血浆刺激人脐静脉血管内皮细胞,以硝酸还原酶法测定细胞培养上清NO浓度,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定血管内皮细胞NO(eNOs)mRNA水平。结果肝硬化患者血浆组NO浓度显著高于正常人血浆组(P≤0.01);门静脉高压症患者血浆处理组eNOS mR-NA水平较正常人血浆组增高,且有时间依赖性,正常人血浆处理样品的各个时间点其RNA水平没有明显差异。结论 肝硬化患者血浆本身可刺激血管内皮细胞产生NO。