P21CIP1/WAF1与子宫内膜样腺癌相关性研究

<正>P21CIP1/WAF1是细胞周期重要的调控因子,在协调DNA的复制及修复,细胞的生长、分化和衰老过程中起重要作用。本研究采用免疫组织化学法检测子宫内膜样腺癌和非子宫内膜样癌48例对照组内膜中的P21CIP1/WAF1的表     

细胞外信号调节激酶1/2表达与HPV16感染及其交互效应在子宫颈癌变中的作用

目的 探讨细胞外信号调节激酶（p-ERK）1/2表达与HPV16感染在子宫颈癌变中的作用及其交互效应。方法 选取2013年9月至2014年3月在山西省肿瘤医院、山西省妇幼保健院、山西省晋煤集团总医院经组织病理学确诊的正常子宫颈（NC）女性34例、低度子宫颈上皮内瘤变（CINⅠ）患者26例、高度子宫颈上皮内瘤变（CINⅡ/Ⅲ）患者57例和子宫颈鳞状细胞癌（SCC）患者59例为研究对象。采用调查问卷收集研究对象的人口学特征和子宫颈癌相关因素等资料,并采集子宫颈组织标本。采用PCR法检测HPV16感染状况,应用免疫组化法检测子宫颈组织中磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）蛋白的表达情况。同时使用ERK抑制剂U0126对子宫颈癌细胞Siha（HPV16阳性）和C33A（HPV阴性）进行抑制,比较抑制前后细胞的增殖、凋亡情况。结果 随着子宫颈癌变的进展,HPV16感染率（趋势χ²=17.99,P<0.001）和p-ERK1/2的表达率（趋势χ²=10.58,P=0.001）均逐渐升高,HPV16感染与p-ERK1/2蛋白表达在CINⅠ、CINⅡ/Ⅲ、SCC组中均存在正相加交互作用。细胞实验结果显示,ERK抑制后,Siha和C33A细胞均表现为增殖能力降低（Siha：t=6.863,P<0.001;C33A：t=7.092,P<0.001）、凋亡率增高（Siha：t=-5.201,P=0.006;C33A：t=-4.335,P=0.005）。ERK抑制后HPV16阳性Siha细胞较HPV阴性C33A细胞增殖指数高（t=7.066,P<0.001）、凋亡率低（t=-2.431,P=0.057）。结论 p-ERK1/2高表达和HPV16感染均可增加子宫颈癌变风险,两者在子宫颈癌变中存在正相加交互作用。在子宫颈癌细胞增殖凋亡过程中,ERK1/2的活化可能对HPV16感染细胞的作用更为显著。     

叶酸对脆性组氨酸三联体基因表达的影响及对宫颈癌细胞增殖凋亡的作用

目的 探讨叶酸对脆性组氨酸三联体（FHIT）基因DNA甲基化、mRNA与蛋白表达以及宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响。方法 采取体外细胞实验方法,对两种宫颈癌细胞C33A（HPV阴性）与CaSk（iHPV16阳性）进行不同浓度叶酸干预,用活细胞计数和流式细胞术分别测定宫颈癌细胞的增殖和凋亡情况,采用甲基化特异性PCR（MSP）法测定FHIT基因启动子区CpG 甲基化状态,利用 Western blot 和 Real-time PCR 方法分别检测 FHIT 基因蛋白和 mRNA 的表达水平。结果 不同浓度叶酸对两种宫颈癌细胞具有抑制增殖和促进凋亡的作用。随着叶酸浓度增加,抑制增殖率逐渐上升（C33A：r＝0.98,P<0.001;CaSki：r＝0.98,P<0.001）,细胞凋亡率升高（C33A：r＝0.98,P<0.001;CaSki：r＝0.99,P<0.001）。C33A与CaSki两种细胞在叶酸浓度为1 μg/ml和10 μg/ml时均呈现FHIT基因DNA甲基化阳性,100 μg/ml和250 μg/ml显示为部分阳性,500 μg/ml和1 000 μg/ml时均呈甲基化阴性。不同叶酸浓度组与对照组相比,两种细胞FHIT 基因的 mRNA 和蛋白相对表达量的差异均有统计学意义,随叶酸浓度的升高,FHIT mRNA（C33A：r＝0.96,P<0.001;CaSki：r＝0.94,P<0.001）及蛋白（C33A：r＝0.96,P<0.001;CaSki：r＝0.97,P<0.001）的表达量均呈上升趋势。结论 较高浓度叶酸可降低 FHIT 抑癌基因的 DNA 甲基化水平,逆转其在转录和功能水平的异常表达,对抑制宫颈癌细胞增殖、促进凋亡具有不可忽视的作用。     

hnRNP K在宫颈上皮内瘤样变中的作用及其与HPV16交互效应

目的 探讨hnRNP K与HPV16感染在宫颈上皮内瘤样变（CIN）中的作用及其交互效应。方法 选取2014年6月至2015年6月在山西省介休市建立的社区队列中经病理学确诊的正常宫颈（NC）女性67例和CIN患者137例（CINⅠ患者69例、CINⅡ/Ⅲ患者68例）为研究对象。采用结构式问卷收集研究对象人口学资料及宫颈病变相关因素的基础上，采集宫颈脱落细胞和宫颈活检或手术组织，应用分子导流杂交法检测HPV16感染状况，并采用Western blot技术检测宫颈组织中hnRNP K蛋白表达水平。采用SPSS 23.0软件对资料进行整理分析，研究对象的人口学特征、相关因素、hnRNP K蛋白和HPV16感染在NC组、CINⅠ和CINⅡ/Ⅲ组的差异通过χ²检验、趋势χ²检验、Kruskal-Wallis H检验进行比较；hnRNP K蛋白表达量的组间两两多重比较采用Bonferroni法；采用非条件logistic回归模型计算hnRNP K蛋白、HPV16感染与CIN的关联强度OR值及其95% CI，采用相加交互模型及交互效应指标评价hnRNP K蛋白和HPV16感染两因素在CIN中的交互效应。结果 CINⅡ/Ⅲ组HPV16感染率（41.2%）高于NC（10.4%）、CINⅠ（14.5%），差异有统计学意义（P<0.001），且随着CIN程度加重，HPV16的感染率呈上升趋势（趋势χ²=18.512）。hnRNP K蛋白表达量在NC组、CINⅠ组和CINⅡ/Ⅲ组间差异有统计学意义（H=48.138，P<0.001），且随着CIN程度加重呈上升趋势（趋势χ²=21.765，P<0.001）。交互效应分析显示，hnRNP K蛋白高表达与HPV16感染在CINⅡ/Ⅲ组存在正相加交互作用（API=0.639，95% CI：0.083~1.196），在CINⅠ组尚未发现存在类似交互作用。结论 hnRNP K蛋白高表达、HPV16感染均可能增加CIN的发生风险，且在高度CIN发生中存在正相加交互作用。     

关于罗氟司特质量标准的研究

目的：建立罗氟司特（Roflumilast，C17H14Cl2F2N2O3）有关物质和溶剂残留的测定方法。方法：采用高效液相法，以磷酸盐缓冲液（称取磷酸二氢钾0．65 g，加水900 ml，加40％四丁基氢氧化铵水溶液0．5 ml，用磷酸调 pH 为3．2）－甲醇（90：10）为流动相，对本品进行有关物质测定；采用气相色谱法，DB －624毛细管色谱柱（30 m ×0．32 mm ×1．80 m），以高纯氮气为载气，检测器为氢火焰离子化检测器（FID），进样口温度为220℃，检测器温度为250℃，以程序升温方式使乙醇达到完全分离。结果：罗氟司特有关物质测定的色谱峰纯度，理论板数，与相邻杂质峰的分离度均达到要求；系统适用性试验、重复性，中间精密度、耐用性均良好；气相测定溶剂残留中，乙醇在该条件下系统适用性，浓度与峰面积线性关系，重复性，回收率，耐用性等良好。结论：采用高效液相法、气相法进行测定，该法操作简便，准确可靠，适用于罗氟司特的质量标准研究。     

环孢素治疗难治性肾病综合征的系统评价

<正>环孢素(CsA)是从土壤真菌中提取的一种多肽,因具有免疫特性,通过下调多种细胞因子的基因转录而抑制免疫反应,且通过影响肾小球的通透性而减少蛋白尿[1]。目前多用于治疗激素及细胞毒药物无效的难治性肾病综合征(NS),但因其有肝肾毒性、高血压、高尿酸血症、多毛及牙龈增生等不良     

女性生殖系良恶性肿瘤相关因素对比分析

[目的]探讨山西省女性生殖系肿瘤的影响因素,以及良、恶性女性生殖系肿瘤相关因素的差别。[方法]选择2006年1月～12月在山西医科大学第二医院和儿童医院妇科住院的711例确诊为妇科生殖系统原发肿瘤的患者和同期确诊的154例住院的妇科炎症患者为研究对象,按照现行诊断标准分为恶、良性肿瘤组和对照组,对其相关因素进行统计分析。[结果]妇科恶性肿瘤组、良性肿瘤组与对照组的单因素比较：平均年龄、平均结婚年龄、平均初潮年龄、平均妊娠次数、平均生产次数、平均流产次数、绝经在三组中的分布差异有统计学意义（P〈0.05）;吸烟者、饮酒者在三组的分布无统计学差异（P〉0.05）。妇科恶性肿瘤组与对照组的多元Logist回归分析,年龄、结婚年龄、绝经、孕次、产次、流产次数作为主要效应因素引入回归模型;良性肿瘤组与对照组的多元Logistic回归分析,年龄、绝经和流产次数作为主效应因素引入回归模型;而恶性组与良性组比较,绝经、结婚年龄和产次作为主效应因素引入回归模型。[结论]绝经、多孕次是恶性肿瘤的保护因素;年龄大、早婚、多产、多次流产是危险因素。良性肿瘤的保护因素为绝经,而危险因素为年龄大和多次流产。     

叶酸对DNMTl和MeCP2在宫颈癌细胞中表达调节的实验研究

目的探讨宫颈癌细胞中叶酸对DNA甲基转移酶1(DNMTl)和甲基化CpG岛结合蛋白2(MeCP2)表达的调节作用。方法采用体外实验研究方法,对宫颈癌细胞casl(i(HPVl6阳性)和C33A(HPV阴性)进行不同浓度(10、50、100、500、750、1000 I．tg/m1)叶酸干预,分别采用Western blot和real-time PCR方法检测两种细胞中DNMTl和MeCP2蛋白的表达量和mRNA水平。结果随着叶酸水平的升高,两种细胞的生长抑制率(C33A:r=0．984,Pr=0．978,P=0．002)和凋亡率(C33A：r=0．989,P<0．001;Caski：r=0．994,Pr=0．914,Pr=0．859,P=0．003)及MeCP2蛋白表达(C33A：r=0．830,P=0．005;Caski：r=0．981,P<0．001)均呈逐渐降低趋势,而DNMTl和MeCP2 mRNA的Ct比值在两种细胞中的变化均无统计学意义(P>O．05)。相同叶酸浓度下,DNMTl蛋白和mRNA表达水平在Caski细胞均较C33A细胞为高,而MeCP2蛋白和mRNA表达水平则在C33A细胞较Caski细胞普遍为高。结论补充叶酸可有效抑制宫颈癌细胞的增殖,促进凋亡,逆转DNMTl和MeCP2蛋白的异常表达;HPVl6感染与DNMTl功能异常对宫颈癌的发生可能有协同效应。     

第七讲 秩和检验

秩和检验 ( rank sum test)属非参数统计方法 ,它不依赖于总体的分布类型 ,不以推断总体参数为目的 ,而旨在检验两种或两种以上的观察变量的分布有无显著性差别。这与前面讲到的 t检验、方差分析等依据总体分布类型推论总体参数的检验不同。由于秩和检验不要求变量的总体呈某种分布 ,因此适用范围广 ,特别是当资料不具备参数统计的应用条件以及作等级资料分析时 ,常使用秩和检验 [1]。但对于标准理论的分布 (如正态分布 ) ,或资料可以转换为这种分布 ,秩和检验比 t检验、方差分析等效率低 [2 ] 。1　两样本比较的秩和检验完全随机设计的两样…     

我国羊种3型布鲁氏菌的多位点序列分型研究

目的对2004-2009年从病人标本中分离的羊种3型布鲁氏菌进行遗传多态性分析,了解菌株的遗传特征及遗传进化关系。方法采用多位点序列分型（Multiple locus sequence typing,MLST）技术,对47株布鲁氏菌菌株的7个管家基因、1个外膜蛋白基因及1个基因间区的序列进行测定,将各个基因的序列与标准菌株的等位基因型进行比对,确定其等位基因谱型及菌株序列型（STS）,分析与其它ST型间的遗传关系。结果 47株布鲁氏菌中,19株omp25基因与目前已有的等位基因型不同,被定义为1个新的等位基因型,即ST28。其余28株与已知的ST8型的各等位基因型一致。结论我国流行的羊种布鲁氏菌主要是羊3型菌株,国内的菌株与国外菌株遗传背景上有差异。MLST分型可以作为研究布鲁氏菌进化关系的重要手段之一。