两种不同状态系膜细胞的培养及其功能研究

目的　比较糖尿病大鼠成模后的系膜细胞与高糖刺激下的系膜细胞在功能上的异同 ,并探讨用体外培养的成模后系膜细胞研究糖尿病肾病的可行性及优越性。方法　将 2 0只 Wistar大鼠随机分成糖尿病成模组和正常组 ,每组各 10只。糖尿病成模组先采用链脲佐菌素复制糖尿病模型 ,然后再进行系膜细胞体外培养 ;正常组大鼠的系膜细胞又分为高糖组和正常对照组两个亚组 ,高糖组采用高糖刺激系膜细胞 ,正常对照组为常规培养基培养。分别对三组细胞用 3 H - Td R摄入法测定细胞增殖 ,EL ISA法测定纤维连接蛋白 (FN)分泌 ,用共聚焦显微镜检测胞内〔Ca2 +〕 i及对血管紧张素 的反应。结果　糖尿病成模组系膜细胞 3 H - Td R掺入率高于正常对照组 ,高糖组系膜细胞 3 H- Td R掺入率低于正常对照组 (P<0 .0 5 ) ;糖尿病成模组及高糖组系膜细胞分泌 FN量均较正常对照组增加 (P分别 <0 .0 1和 <0 .0 5 ) ,且糖尿病成模组系膜细胞分泌 FN量虽高于高糖组 ,但无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;糖尿病成模组及高糖组系膜细胞胞内〔Ca2 +〕i对血管紧张素 的反应都减弱 ,且前者更为明显。结论　先建立糖尿病模型再培养的系膜细胞在功能和生物学性状方面更接近于糖尿病体内系膜细胞     

铜绿假单胞菌感染模型中CC16 mRNA表达水平的研究

目的探讨铜绿假单胞菌感染模型中CC16 mRNA及其蛋白水平与肺内炎症反应之间的关系.方法铜绿假单胞菌经支气管接种制备小鼠感染模型,肺组织切片病理检查及支气管肺泡灌洗了解炎症反应程度,RT-PCR检测CC16 mRNA表达水平,免疫组化染色检测肺组织CC16蛋白质水平.结果接种细菌后24 h肺内炎症反应最明显,CC16表达水平最低;至72 h炎症反应减弱,CC16水平有所恢复.结论 CC16对铜绿假单胞菌感染所致炎症反应有抑制作用,同时亦可能对抗炎症反应所致肺损伤.     

Genistein对大鼠肝脏星状细胞激活的抑制作用

目的　探索酪氨酸蛋白激酶抑制剂 Genistein对肝脏星状细胞 (HSC)激活的抑制作用。方法　采用链霉蛋白酶、胶原酶原位灌注及 Nycodenz一步密度梯度离心法分离大鼠 HSC,并进行体外培养使之激活。用四唑盐比色法 (MTT法 )检测 Genistein作用 2 4、4 8和 72小时对 HSC增殖的抑制作用 ;用激光扫描共聚焦显微镜(L SCM)观察 Genistein作用后 HSC的 α-平滑肌肌动蛋白 (α- SMA,HSC激活的标志之一 )表达的变化。结果　MTT检测显示 ,10 - 5～ 10 - 9mol/ L 浓度的 Genistein作用 2 4、4 8和 72小时对 HSC增殖有抑制作用 ,并以 10 - 7mol/ L 的 Genistein作用 4 8小时的抑制作用最明显。 L SCM观察显示 ,10 - 6和 10 - 7mol/ L 的 Genistein作用 4 8小时可使 α- SMA表达明显减弱。结论　一定浓度的 Genistein能明显抑制 HSC的活化和增殖 ,有可能成为抑制肝纤维化的潜在药物     

肝纤维化大鼠肝细胞膜上TNFα受体测定及意义

肝纤维化大鼠肝细胞膜上ＴＮＦα受体测定及意义刘小菁，张正，杨丽，吴红斌，吴俊超为探讨ＴＮＦα在肝纤维化过程中的作用，在ＣＣＩ４所致肝纤维化大鼠动物模型上，观察肝细胞膜上ＴＮＦα受体（ＴＮＦｒｅｃｅｐｔｏｒ．ＴＮＦＲ）水平的变化以及ｒ－干扰素（ｒ－ＩＦ...     

哮喘大鼠模型肺组织平滑肌肌动蛋白-αmRNA的表达

目的　探讨平滑肌肌动蛋白 (SMA) -α m RNA的表达 ,以了解其在哮喘发病机制中的作用。方法　以卵蛋白雾化复制哮喘模型 ,在激发后 3d、1周及 2周用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)检测肺部α- SMA m RNA表达 ,同时用图象分析法测量大鼠气道形态学参数。结果　大鼠哮喘激发后 2周开始出现气道平滑肌肌层增厚 ,而α-SMA m RNA在哮喘激发 1周表达升高 ,2周后更加明显 ,α- SMA m RNA表达与气道平滑肌肌层增厚具有一定相关性。结论　哮喘气道重构中既有气道平滑肌的增生肥大 ,又可能有平滑肌表型改变     

可溶性肿瘤坏死因子受体研究进展

随着对肿瘤坏死因子及其受体系统的深入研究，人们发现了可溶性的肿瘤坏死因子受体，并发现它在机体的免疫调节和与肿瘤坏死因子相关珠病理过程中发挥着重要作用。     

HIF-1α基因表达下调对人结肠癌SW480细胞增殖和VEGF表达的影响

目的:研究转录因子-缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在缺氧条件下对人结肠癌SW480细胞增殖的作用,以及HIF-1α对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,研究HIF-1α调节SW480细胞增殖的机制.方法: 构建针对HIF-1α的pSuper-EGFP siRNA表达载体,转染SW480细胞,抑制HIF-1α的表达,RT-PCR和Western Blot检测抑制结果;MTT法检测HIF-1α被抑制后,SW480在缺氧培养条件下的增殖情况;RT-PCR和Western Blot检测VEGF 的表达.结果: 缺氧培养条件下,HIF-1α和VEGF表达明显上升;转染pSuper-EGFP siRNA表达载体后,SW480细胞HIF-1α mRNA和蛋白质的表达大幅下降;SW480细胞增殖下降(P《0.05);而在缺氧培养条件下有较高表达的VEGF,其mRNA和蛋白质的表达也大幅下降.结论: HIF-1α在缺氧条件下,对SW480细胞在增殖有影响,其机制可能是通过在缺氧时上调节VEGF等细胞生长因子的表达,进而调节肿瘤细胞生长.     

内毒素对肝星状细胞结缔组织生长因子表达的影响

结缔组织生长因子(CTGF)是调节细胞增生、分化和细胞外基质形成的重要效应分子。肝星状细胞(HSC)是肝纤维化时产生CTGF的主要细胞。内毒素(LPS)血症是肝纤维化的诱因之一。现研究HSC在LPS作用下CTGF mRNA表达情况,探讨CTGF在LPS介导肝纤维化中的作用和地位。     

肿瘤生长因子β_1及血小板衍生生长因子对肝窦内皮细胞整合素α_6β_1及黏着斑激酶表达的影响

目的　观察肿瘤生长因子 β1(TGFβ1)及血小板衍生生长因子 (PDGF)对大鼠肝窦内皮细胞 (sinusoidalendothelialcell,SEC)整合素α6β1表达及黏着斑激酶 (focaladhesionkinase ,FAK)活性的影响。方法　用胶原酶原位灌注、Percoll不连续密度梯度离心法分离大鼠SEC ,并进行体外培养。采用细胞 ELISA和免疫沉淀 蛋白质酪氨酸激酶活性测定法 ,分别观察TGFβ1及PDGF对SEC表面整合素α6β1表达及FAK活性的影响。结果　经TGFβ1及PDGF作用 2 4h后 ,α6β1蛋白表达明显强于对照组(P <0 .0 5 ) ,且呈剂量依赖性。作用至 48h ,表达继续增强 ,细胞中FAK的活性也明显增高 (P <0 .0 5 ) ,虽于 48h后回落 ,但仍明显高于对照组。结论　TGFβ1及PDGF可促进SEC表面整合素α6β1的表达及FAK活性增高 ,可能是它们参与肝纤维化发生的机制之一。     

成年大鼠心肌细胞的分离和培养

目的：建立获得较高比例的活性成年大鼠心肌细胞的分离和培养方法。方法：Langendorff灌流，胶原酶消化分离钙耐受成年大鼠心肌细胞，加血清培养。光镜观察，结合形态学和台盼蓝染色评价心肌细胞。结果：分离的活性心肌细胞比率约70％-80％，杆状、横纹清晰。加血清贴壁培养的细胞逐渐发生形态学改变。结论：通过本方法可以对成年大鼠心肌细胞进行良好的分离培养。