4,5,7-三羟基异黄酮对肝纤维化大鼠肝窦内皮细胞窗孔、增殖及合成一氧化氮的影响

目的 探讨酪氨酸蛋白激酶抑制剂4、5、7-三羟基异黄酮(genistein)对肝窦内皮细胞(sinusoidalendothelial cell, SEC)窗孔、增殖及合成一氧化氮(nitric oxide, NO)的影响。方法 用胶原酶原位灌注,Percoll不连续密度梯度离心法分离正常及CCl_4实验性肝纤维化大鼠的SEC并进行体外培养。采用扫描电镜技术,MTT法及硝酸还原酶法,分别观察genistein对SEC细胞窗孔、增殖及合成NO的影响。结果 Genistein对肝纤维化各级 SEC的窗孔数目及大小均无明显的影响。经不同浓度的genistein作用24h后,肝纤维化各级大鼠SEC的生长均受抑制,以100 μmol/L浓度的genistein对肝纤维化Ⅰ级大鼠SEC的作用最为明显[细胞增殖率为-(15.38±6.26)% vs(4.91±2.16)%,t=13.7. P＜0.05]。100 μmol/L浓度的genistein作用24h,可明显促进肝纤维化Ⅰ级大鼠SEC NO的合成[NO合成为(25.4±3.8)μmol/L vs(16.6±3.3)μmol/L,t=6.79,P＜0.05];但对肝纤维化Ⅱ级、Ⅲ级大鼠SEC的NO合成的影响却不明显。结论 体外实验中genistein可以抑制肝纤维化Ⅰ级SEC增殖,促进SEC细胞NO的合成;对肝纤维化SEC细胞的功能有一定的调节作用。     

阳离子脂质体介导的TGFβ1反义寡核苷酸对大鼠肝脏星 …

为探讨阳离子脂质体介导的ＴＧＦβ１反义寡核苷酸（ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，ＡＳＯＮ）对大鼠肝脏星状细胞激活及其胶原生成的作用，作者合成了特异性的针对ＴＧＦβｍＲＮＡ转译超始区的硫代磷酸ＡＳＯＮ及其对照（正义、错义寡核苷酸），并和阳离子脂质体形成复合物。通过测定细胞内＾３２Ｐ标记的ＡＳＯＮ的放射量来观察ＡＳＯＮ的细胞摄入率，用细胞免疫化学分析α－ＳＭＡ的表达来观察星状细胞     

血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂在系膜细胞培养中对结缔组织生长因子表达的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及其受体拮抗剂Losartan对系膜细胞(MCs)结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响方法分离培养SD大鼠肾小球系膜细胞。培养的系膜细胞中分别加入不同浓度的AngⅡ(10     

高糖环境对体外培养大血管内皮细胞产生TGF—β的影响

目的：探讨体外高糖环境对大血管内皮细胞产生转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）的影响。方法：分别用含量不同浓度葡萄糖（１２．５ｍＭ、２５ｍＭ、５０ｍＭ Ｄ－葡萄糖）、高糖加肿瘤坏死因子－α（ＩＮＦ－α）和高糖加胰岛素的１０％小牛血清ＲＰＭＩ１６４０液培养ＳＤ大鼠主动脉血管内皮细胞４８ｈ，取上述培养液分别用生物学方法测ＴＧＦ－β１水平，采用放射免疫法测其内皮素（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ ＥＴ）的水平。结果：高     

TGFβ1反义寡核苷酸对大鼠肝脏星状细胞激活及其胶原生成的抑制作用

为探讨 TGFβ1 反义寡核苷酸 (antisense oligonucleotides,ASON)对大鼠肝脏星状细胞活化及其胶原生成的作用 ,作者合成了特异性的 TGFβ1 硫代磷酸 ASON及其对照 (正义 ,错义寡核苷酸 ) ,并将其加入至培养的肝脏星状细胞中。通过细胞免疫化学方法分析 α- SMA的表达来观察肝脏星状细胞的活化 ,肝脏星状细胞产生TGFβ的水平用生物学方法测定 ,以 3H-脯氨酸掺入抑制率的测定观察胶原生成的变化。结果 :针对 TGFβ1 m RNA转译起始区的 ASON在终浓度为 1 0 μm ol/ L 时 ,能明显地抑制体外培养的肝脏星状细胞的激活、TGFβ1 的产生及其胶原的生成能力 ,而对照组寡核苷酸在相同浓度下未见抑制效应。上述结果表明 ,ASON对肝脏星状细胞无损伤作用。 TGFβ1 ASON可能成为一种潜在的抗肝纤维化治疗的药物。     

不同剪切速率下同型半胱氨酸对胶原诱导血小板活化的影响

观察同型半胱氨酸(Homocysteine,HCY)对胶原诱导血小板活化及其信号途径的影响.浓缩血小板或洗涤血小板在37℃与不同浓度的HCY孵育后,应用血小板聚集仪或流室系统分别测定HCY对胶原诱导血小板的聚集及黏附的作用.采用免疫沉淀-Western Blotting实验来观察Src激酶及PLCγ2酪氨酸磷酸化水平变化.结果发现(1)在10～100μM浓度范围内,HCY能明显增强Ⅰ型胶原诱导的洗涤血小板的聚集反应.(2)在低剪切速率(100/s)时,较高浓度(50及100μM)的HCY能明显促进血小板黏附到胶原上;而较低浓度(10及25μM)的HCY却没有此作用.在高剪切速率(1 600/s)时,10～100 μM浓度的HCY对血小板黏附到胶原上的能力没有影响.(3)HCY能使Ⅰ型胶原刺激导致的Src激酶及PLCγ2的酪氨酸磷酸化水平更加升高;而整合素β1的封闭抗体能部分降低HCY的刺激作用.体外研究表明,HCY能协同促进胶原诱导的血小板活化反应,而且是通过它与血小板表面胶原受体之间相互作用,导致了GPVI(glycoprotein Ⅵ)及整合素α2β1信号途径的激活,包括Src激酶及PLCγ2.     

如何建立成年大鼠心肌细胞钙超载模型

目的探讨建立成年大鼠心肌细胞钙超载模型的方法。方法Langendorff灌流,分离钙耐受成年大鼠心肌细胞,采用不同浓度钙离子导入剂-伊屋诺霉素(ionomycin)作用心肌细胞1小时,用荧光分光光度计测定心肌细胞内的游离钙浓度。结果1.分离的活性心肌细胞比率约70~80%,杆状、横纹清晰。2.实验组1(iono-mycin0.5μmol/L)心肌细胞[Ca2 ]1明显高于对照组(282.07±25.19vs115±21.21nmol/L,P<0.05);实验组2(ionomycin1.0μmol/L)心肌细胞[Ca2 ]1(376.35±29.44)显著高于正常对照组(P<0.05)。结论通过本方法可以建立成年大鼠心肌细胞钙超载模型。     

结缔组织生长因子与LPS致肝纤维化的关系

目的：研究结缔组织生长因子(CTGF)表达水平与LPS致大鼠肝纤维化的关系。方法：体外培养条件下，LPS处理大鼠肝星状细胞(HSC)，半定量RT-PCR方法检测不同时点不同LPS浓度处理的HSC FN mRNA和CTGF mRNA的表达水平。结果：LPS不仅短时间内即能上调HSC FN mRNA和CTGF mRNA表达，而且LPS与CTGF mRNA的表达量呈一定的剂量效应关系。恒定LPS作用浓度(1μg／ml)下，CTGF mRNA的表达水平随LPS作用时间的增加而增加，LPS作用24h-48h后CTGF mRNA的表达水平最高。结论：LPS是一个重要的致纤维化因素，可同时上调HSC的FN mRNA和CTGF mRNA表达。CTGF在LPS介导的肝纤维化的病理生理过程中可能发挥着重要的作用。     

YIGSR五肽及RGD三肽对肝窦内皮细胞窗孔的调节作用

目的 探讨酪氨酸－异亮氨酸－甘氨酸－丝氨酸－精氨酸（Tyr-lle-Gly-Ser-Arg,YIGSR)五肽及精氨酸－甘氨酸－天门冬氨酸（Arg-Gly-Asp,RGD)三肽对肝窦内皮细胞（SEC）窗孔的影响。方法 用胶原酶原位灌注、Percoll不连续密度梯度离心法分离大鼠的SEC,并加入包被有I型胶原或层粘连蛋白（laminin,LN）基质的玻璃片上培养。采用扫描电镜技术及放免方法,分别观察YIGSR五肽及RGD三肽对SEC窗孔数目、大小,以及SEC分泌Ⅳ型胶原能力的影响。结果 生长在包被LN的盖玻片上48小时的SEC,其窗孔数目及大小均比生长在I型胶原上的SEC明显降低（P＜0．05）;但同时加入YIGSR五肽（50μg/ml）及RGD三肽（50μg/ml）作用48小时后,SEC窗孔数目及大小均有明显增加（P＜0．05）,同样地,经YIGSR五肽及RGD三肽作用后,生长在LN上的SEC分泌Ⅳ型胶原的能力亦明显下降（P＜0．05）。结论 YIGSR五肽及RGD三肽对SEC的形态（如窗孔）及功能（如分泌Ⅳ型胶原）均有一定调节作用。     

TGFβ1反义寡核苷酸对大鼠肝脏星状细胞激活及其胶原生成的 …

为探讨ＴＧＦβ１反义寡核苷酸（ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ,ＡＳＯＮ）对大鼠肝脏星状细胞活化及其胶原生成的作用,作者合成了特异笥的ＴＧＦβ１硫代磷酸ＡＳＯＮ及其对照（正义,错义寡核苷酸）,并将其加入至培养的肝脏星状细胞中。通过细胞免疫化学方法分析α－ＳＭＡ的表达来观察肝脏星状细胞的活化,肝脏星状细胞产生ＴＧＦβ的水平用生物学方法测定,以＾３Ｈ－脯氨酸掺入抑制率的测定观察胶原