聚合酶链反应斑点杂交法检测TT病毒感染

目的 研究ＴＴ病毒在肝炎发病中的作用机制及其临床病理特征。方法 采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术将地高辛素标记到ＤＮＡ上，制备成地高辛素探针，建立斑点杂交方法，并与套式ＰＣＲ方法进行比较。结果 此探针具有一定的特异性和较高的敏感性，采用斑点杂交方法对２９１例各种肝炎血清标本进行检测，ＴＴ病毒阳性率为１３．７％（４０／２９）其中甲－戊型肝炎为５．３％（９／１７０），庚型肝炎为１５．０％（３／２０），非     

庚型肝炎病毒E区部分基因克隆及序列分析

目的 建立适合我国国情的HGV诊断方法及进一步研制预防HG的疫苗。方法 通过逆转录-套式-聚合酶链反应，从1例输血后丙肝患血清中扩增出768bp的庚型肝炎病毒cDNA序列，反应产物克隆进M13mpl8噬菌体，阳性克隆抽提单链以双脱氧终止法双向测定其序列。结果 所分离的HGVE区768bp的核苷酸与国内外已发表的4株HGV序列比较，同源性分别为：U44402 81．5％，U45966 82．8％，U36380 84．5％，U75356 95．8％；根据所测得的cDNA序列推导出其编码的氨基酸序列，在氨基酸水平上较4株HGV序列同源性分别为：U44402 87．7％，U45966 91．5％，U36380 94．1％，U75356 95．8％。结论 证实国内存在丙型肝炎与庚型肝炎病毒合并感染；此序列与中国株HGV同源性较高，与美国株HGV及西非株(GBV-C)同源性相对较低；推导出的氨基酸水平的同源性高于核苷酸水平；HGV E区较非结构区NS3、NS5及5’非编码区(5'UTR)的变异为大。     

TTV相关病毒的研究进展

近年来 ,发现一些 TTV相关病毒 [1 - 3] ,如 SEN( SENV)、TTV样微小病毒 ( TLMV )、PM病毒、SANBAN病毒( SANBANV)、YONBAN病毒 ( YONBANV)等 ,这些病毒是否与非甲～庚型肝炎有关正在研究中 ,现将国内外 TTV相关病毒的研究进展综述如下。1　 TTV样微小病毒 ( TLMV)　 2 0 0 0年 Takahashi[4 ]等报告 ,应用 TTV DNA引物作 PCR,检测日本 3 0 0份因抗 -HCV阳性而未被使用的供血者血浆 ,结果 1 0份 TTV DNA滴度 >1 0 5拷贝 /ml,其中 3份编号为 CBD2 3 1、2 79和 2 0 3的血浆的 PCR产物长度较预期为短 ( 1 .2 kp…     

巢式聚合酶链反应检测SEN病毒方法的建立

目的 建立用于SEN病毒（SENV）检测的巢式聚合酶链反应（nPCR）方法。方法 选择SENV各亚型间高度保守的5′端非编码区（5′－NCR）序列设计2对特异性引物，建立可同时检测SENV所有亚型的nPCR方法。对173例慢性乙型肝炎（CHB）患血清和96份正常人血清进行SENV检测，并随机选择3份PCR阳性产物进行克隆测序。结果 倍比稀释实验表明该方法的终检稀释度为10^3。PCR产物克隆测序结果显示：各分离株与Genbank收录的SENV序列相应区段同源性为95％－96％。CHB患SENV感染率为86．1％，正常人为85．1％，二差异无显性（χ^2=0.381,P=0.537)。结论 该方法敏感、特异且简便经济，适于开展SENV的流行病学研究。     

丙型肝炎病毒干扰素敏感决定区聚合酶链反应检测方法的建立及应用

目的:建立一种以丙型肝炎病毒(HCV)干扰素敏感决定区(ISDR)特异性引物为基础的聚合酶链反应(PCR)方法,对HCVISDR进行序列测定.方法:根据GenBank中6株HCV全序列核苷酸序列,设计共同的外引物及三组ISDR型特异性内引物.建立了HCVISDRPCR检测方法,对27例HCV基因型1b的慢性丙型肝炎患者血清HCVRNA进行测定,并对PCR阳性标本的产物进行多位点分析.结果:A组PCR结果阳性率为37%(10/27),A-B组为30%(8/27),A-C组为4%(1/27),A-B-C组为22%(6/27),三组均阳性者有5例为使用IFN治疗6-12mo后定性PCR检测HCVRNA转阴,停药3mo后PCR检测HCVRNA结果仍为阴性.结论:以ISDR特异性引物为基础的PCR法可靠、简便,可用于丙型病毒性肝炎患者对HCV进行敏感决定区的测定,用于以NS5A-ISDR突变数量来预测HCV基因型1b感染的患者对IFN的持续应答.     

复方金佛手口服液对离体豚鼠回肠的作用及机理分析

复方金佛手口服液可促进离体豚鼠回肠收缩 ,其收缩呈量效关系 ,3 5× 10 2 g/ml浓度达最大收缩 ,作用位点可能为M受体     

复方金佛手口服液的药效研究

目的；对复方金佛手制成口服液进行药效研究。方法；通过给小鼠灌胃及腹腔注射，观察其正咳、正喘及对鼠免疫功能、耐缺氧的影响等及毒性作用。结果：金佛手对鼠的咳嗽潜伏期，止咳、止喘、回肠收缩、吞噬指数、耐缺氧能力等与阳性对照组扫近，优于对照组。最大耐受量〉１２０ｍｇ／ｋｇ（相当于人用量４００倍）。结论：复方金佛手有止咳、止喘、促进肠颤动作用。提高机体免疫功能及耐缺氧能力，无明显副作用     

TT病毒感染者外周血单个核细胞中TT病毒的研究

目的 了解ＴＴＶ阳性肝炎患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）ＴＴＶ ＤＮＡ存在及复制情况。方法 采用巢式ＰＣＲ（ｎＰＣＲ）技术和绿豆芽核酸酶消化单链ＤＮＡ方法研究在ＰＢＭＣ中的ＴＴＶ ＤＮＡ存在及复制情况，并克隆测序分析证实。１６例血标本（血清和ＰＢＭＣ）和粪便标本来自北京地坛医院１９９７年１０月～１９９８年１０月住院患者。结果 １６ＴＴＶ阳性肝炎患者ＰＢＭＣ中有１４例ＴＴＶ ＤＮＡ阳性，粪便中有５例     

异源双链泳动分析法快速检测TT病毒基因型

目的 建立一种简单、敏感、特异和成本低的TT病毒(TTV)基因型测定方法。方法 采用巢式聚合酶链反应方法(nPCR)对96名正常人和180例各型肝炎患者血清标本进行TTV DNA检测，然后采用异源双链泳动分析法(HMA)和序列测定分析法对TTV DNA阳性标本进行基因分型。结果 各型病毒性肝炎中TTV DNA阳性率为22．2％(40／180)，正常人为19．8％(19／96)，两者差异无显著性(X^2=0．220，P=0．639)。在甲、乙、丙、戊型肝炎和非甲～戊型肝炎患者中TTV DNA阳性率分别为20．0％(6／30)、16．7％(5／30)、23．3％(7／30)、36．7％(11／30)和18．3％(11／60)。在40例TTV DNA阳性标本中，经HMA法分型，G1型为50．0％(20／40)，G2型为17．5％(7／40)，混合型为25．0％(10／40)，另有7．5％(3／40)未能分型。10例TTV混合型感染的标本经克隆测序及基因进化树分析，5例为G1和G2型，2例为G1和G3型，1例为G1和G4型，1例为G2和G3型，1例为G1、G2和G3混合型感染。结论 HMA是一种简单、敏感、特异和经济的分型法，可用于TTV基因型分型。     

提高海南高等医学教育办学效益技术方案

目的：组建提高海南高等医学教育办学效益技术方案及其核心技术平台和量化集成界面。方法：调研、系统分析、“四定分析综合集成方法”从整体上研究、分析和解决问题。结果：经质量检测信度为0．86“效度的最大值：=√0.86=0．927”。效度高，基本上真实、可靠。结论提高海南高等医学教育办学效益技术方案具有实践性、应用性、可操作性较高的应用价值。