Sinomenine induces apoptosis in RAW 264.7 cell- derived osteoclasts in vitro via caspase-3 activation

Aim： Sinomenine （SIN） is an alkaloid found in the roots and stems of Sinomenium acutum, which has been used to treat rheumatic arthritis in China and Japan. In this study we investigated the effects of SIN on osteoclast survival in vitro and the mechanisms of the actions. Methods： Mature osteoclasts were differentiated from murine monocyte/macrophage cell line RAW264.7 through incubation in the presence of receptor activator of NF-KB ligand （RANKL, 100 np=VmL） for 4 d. The cell viability was detected using the CCK-8 method. The survival and actin ring construction of the osteoclasts were scored using TRACP staining and phalloidin-FITC staining, respectively. The apoptosis of the osteoclasts was detected by DNA fragmentation and Hoechst 33258 staining, and the cell necrosis was indicated by LDH activity. The activation of caspase-3 in osteoclasts was measured using Western blotting and the caspase-3 activity colorimetric method. Results： SIN （0.25-2 mmol/L） inhibited the viability of mature osteoclasts in dose-dependent and time-dependent manners, but did not affect that of RAW264.7 cells. Consistently, SIN dose-dependently suppressed the survival of mature osteoclasts. The formation of actin ring, a marker associated with actively resorbing osteoclasts, was also impaired by the alkaloid. SIN （0.5 mmol/L） induced the apoptosis of mature osteoclasts, which was significantly attenuated in the presence of the caspase-3 inhibitor Ac-DEVD-CHO. SIN increased the cleavage of caspase-3 in mature osteoclasts in dose-dependent and time-dependent manners. Furthermore, SIN dose- dependently enhanced caspase-3 activity, which was blocked in the presence of Ac-DEVD-CHO. Conclusion： Sinomenine inhibits osteoclast survival in vitro through caspase-3-mediated apoptosis, thus it is a potential agent for treat- ing excessive bone resorption diseases.     

青藤碱电致孔给药的药动学及在关节腔中浓度的研究

目的比较电致孔与电加热条件下热敷给药时青藤碱在兔血液中的药动学及其在关节腔液中的浓度。方法在兔关节处分别进行电致孔和电加热热敷给药,给药后利用微透析技术收集关节腔透析液,同时通过耳缘静脉采血。串联质谱法测定血液及关节腔透析液中青藤碱浓度。DAS软件处理分析血药浓度数据,t检验分析关节腔透析液数据。结果电致孔给药组的AUC 0^∞为(3 915.0±537.7)ng·min·mL-1,是电加热给药组的2倍;Cmax为(29.3±4.9)ng·mL-1,是电加热给药组的2.5倍;tmax为(30.8±6.4)min比电加热给药组缩短20 min。电致孔给药时青藤碱在关节腔中的浓度是电加热给药的1.6∞为(3 915.0±537.7)ng·min·mL-1,是电加热给药组的2倍;Cmax为(29.3±4.9)ng·mL-1,是电加热给药组的2.5倍;tmax为(30.8±6.4)min比电加热给药组缩短20 min。电致孔给药时青藤碱在关节腔中的浓度是电加热给药的1.6⁶.9倍。结论电致孔与电加热给药相比增加了青藤碱入血的量,提高了青藤碱生物利用度,同时能让更多的青藤碱分布于关节腔局部。     

青藤碱通过调节血红素氧合酶-1表达和自噬抑制脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症

目的：探讨青藤碱对脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症的影响和机制。方法：以小鼠RAW264.7巨噬 细胞为研究对象,在有或无血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)抑制剂Znpp处理下,采用青藤碱和/或脂多糖 (lipopolysaccharide,LPS)处理RAW264.7巨噬细胞。应用Real-time PCR检测细胞炎症因子TNF-α和IL-6 mRNA表达, ELISA检测细胞炎症因子TNF-α和IL-6水平,免疫荧光试验分析细胞自噬情况,Western印迹检测细胞HO-1蛋白表达。 结果：与对照组相比,LPS作用后RAW264.7细胞炎症因子TNF-α和IL-6表达和释放增多,自噬相关蛋白LC3绿色荧光 聚集,HO-1表达水平升高(P<0.05);与LPS组相比,加用青藤碱处理能减少TNF-α和IL-6表达和释放,进一步促进LC3 绿色荧光聚集,增加HO-1水平(P<0.05);用HO-1抑制剂Znpp预处理后,青藤碱对LPS诱导TNF-α和IL-6表达和释放的 抑制作用减弱,LC3绿色荧光聚集减少(P<0.05)。结论：青藤碱能减轻LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症,其机制可 能与HO-1介导的自噬激活有关,这为青藤碱应用于炎症反应的防治提供了实验基础和理论依据。     

布鲁顿酪氨酸激酶靶向药物的研究进展

目的 探究青藤碱（sinomenine, SIN）逆转人乳腺癌MCF-7细胞他莫昔芬（tamoxifen, TAM）耐药及其相关机制。方法 通过短时间高浓度TAM刺激MCF-7细胞诱导耐药株,采用MTT法检测细胞耐药性的改变;进一步通过MTT法检测SIN和TAM对耐药株MCF-7/TAM的毒性作用,并采用CompuSyn软件分析两药联用的联合指数,评价联合效应;采用流式细胞术检测两药对MCF-7/TAM细胞凋亡和周期的影响;采用Western blot法检测MCF-7/TAM细胞内PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达情况,以及SIN干预后,MCF-7/TAM细胞内PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达情况。结果 MCF-7/TAM细胞株对TAM敏感性显著降低,耐药模型构建成功;SIN和TAM均能够剂量依赖性地抑制MCF-7/TAM细胞的增殖,SIN干预能够显著增加MCF-7/TAM细胞对TAM的敏感性,经CompuSyn软件分析显示两药呈协同作用;SIN和TAM联合应用能够更显著地诱导MCF-7/TAM细胞凋亡和阻滞细胞周期;MCF-7/TAM细胞中PI3K、Akt和mTOR的磷酸化水平显著高于MCF-7细胞,经过SIN干预后MCF-7/TAM细胞中PI3K、Akt和mTOR的磷酸化水平显著下降。结论 青藤碱能够有效逆转MCF-7细胞对他莫昔芬耐药,其机制可能是通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路发挥作用。     

青藤碱与牛血清白蛋白相互作用的光谱研究

目的 了解在生理条件下青藤碱与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用.方法 采用荧光光谱和圆二色性光谱等方法,研究在生理条件下青藤碱与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用.结果 青藤碱与牛血清白蛋白二者间的结合常数(KA)为(9.77±0.01) ×105 L· mo1-1(291 K)和(2.47±0.02)×105 L...     

青藤碱传递体经皮给药的药动学和药效学研究

 目的 研究传递体对青藤碱经皮给药的影响。方法 通过薄膜分散法制备青藤碱传递体,并测定经皮给药和静脉注射给药2种给药方式下动物血药浓度和脑组织中药物的含量,以及不同给药方式下小鼠镇静镇痛和抗炎镇痛作用效果的变化,考察传递体对青藤碱在体内吸收、分布以及它对青藤碱止痛效果的影响。结果 经皮给药传递体能提高青藤碱的透过量,显著升高血液和脑组织中药物的浓度,提高镇痛疗效。静脉注射青藤碱传递体能提高脑组织中的药物含量,增强中枢镇痛作用,但在一定程度上降低血药浓度,影响外周抗炎镇痛效果。结论 传递体能改善青藤碱吸收、分布,影响药物的镇痛效果。     

电针、龙氏正骨手法及复方青藤碱注射液联合治疗颈源性头痛观察

目的：观察电针、龙氏正骨手法和复方青藤碱注射液穴位注射组合治疗颈源性头痛的效果。方法：60例颈源性头痛患者随机分为三组,A组用电针治疗,B组采用电针及龙氏正骨手法,C组应用电针、龙氏正骨手法及复方青藤碱注射液穴位注射,2周后观察三组患者效果。结果：治疗后三组vAs评分均低于治疗前（P〈0．05）,且C组显著低于A组与B组（P〈0．05）;C组总有效率显著高于A组与B组（P〈0．05）;A组重度疼痛患者总有效率明显低于B组及C组（P〈0．01）。结论：电针、龙氏正骨手法及复方青藤碱注射液穴位注射联合治疗颈源性头痛疗效显著。     

石墨烯-Nafion-纳米金增敏印刷电极伏安法测定青藤碱

目的:采用石墨烯(GS)-Nafion-纳米金(Au)增敏印刷电极(SPCEs)建立青藤碱(SN)的测定方法,探讨SN在修饰电极上的电化学行为。方法:将GS-Nafion溶液涂覆于SPCEs表面制得GS-Nafion︱SPCEs电极,然后于上述电极表面化学镀Au制得Au/GS-Nafion︱SPCEs电极,在B-R缓冲液中,采用循环伏安(CV)和示差脉冲伏安(DPV)法研究SN的电化学性质。结果:在优化的实验条件下,DPV氧化峰电流与SN浓度在5.0×10-7～1.0×10-4mol.L-1范围内呈良好的线性关系,检出限为2.2×10-7mol.L-1。结论:该修饰电极价格低廉,制备容易,样品用量少,抗干扰性强,可用于正清风痛宁注射液中SN含量测定。     

青藤碱诱导肺癌NCI-H460细胞凋亡及其机制的实验研究

目的：探究青藤碱（SIN）诱导肺癌NCI-H460细胞凋亡的作用机制。方法：四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定SIN对肺癌NCI-H460细胞生长的影响;Western blot测定Bcl-2,Bax蛋白的表达;用SIN、PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路抑制剂干预NCI-H460细胞,流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果：SIN对肺癌NCI-H460细胞生长有抑制作用,呈时间、浓度依赖性;SIN可以使NCI-H460细胞Bcl-2表达减低,Bax增强;SIN与PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路抑制剂联用后可协同增加NCI-H460细胞凋亡（P〈0.05）。结论：SIN可以抑制肺癌NCI-H460细胞的生长,能改变其Bax,Bcl-2蛋白的表达,与PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路抑制剂联用可协同发挥促进肺癌细胞凋亡作用,可望成为新的肺癌治疗药物。