癌基因CTTN表达Cortactin蛋白及其变异体磷酸化状态下与细胞蛋白Dynamin相互作用分析

目的:探讨Cortactin的氨基端序列在磷酸化介导的蛋白相互作用中的功能。方法:设计表达标签为GST的氨基端缺失的Cortactin突变体,纯化突变体蛋白,以及全长Cortactin蛋白,同时纯化His标签的细胞发动蛋白Dynamin,采用Src磷酸化Cortactin蛋白,并采用pull-down分析观察与Dynamin的相互作用。结果:成功表达和纯化Cortactin的1-80氨基酸(CortΔ80)缺失、1-349缺失的Cortactin突变体(CortΔ349),以及全长Cortactin(Cort WT)和Dynamin。Pull-down分析结果表明:与磷酸化的野生型Cortactin蛋白比较,氨基端缺失的Cortactin蛋白在磷酸化后与Dynamin的结合作用减弱。结论:实验提示Cortactin分子的氨基端是Arp2/3与actin结合的重要结构域其参与肌动蛋白聚合的过程,对于磷酸化信号的正常传导是不可或缺的部分。     

MTSS1在胃癌中的表达及临床意义

目的:探讨MTSS1在胃癌中的表达及其与临床病理关系.方法:用免疫组化方法及Western Blot方法检测MTSS1在胃癌及癌旁正常组织中的表达,并分析其与胃癌临床及病理参数的相关性.结果:通过对50例胃癌及癌旁正常组织的免疫组化染色表明,MTSS1在胃癌组织中39例呈阳性表达,但在正常组织中仅12例阳性表达.Western Blot结果显示50组肿瘤与正常组织的蛋白表达水平对比中有35组病例肿瘤中MTSS1表达水平明显高于正常组织.统计分析表明MTSS1在胃癌中的表达较正常组织明显增高(P=0.000),MTSS1的表达与胃癌的TNM分期、淋巴结转移、远处转移及肿瘤的浸润深度有关,而与患者的性别、年龄,肿瘤的部位、尺寸、分化程度无关.结论:MTSS1可能在胃癌的发生、发展中发挥着重要作用.     

谐波造影增强内镜超声对胰腺癌与局灶型胰腺炎的鉴别诊断价值

目的 探讨谐波造影增强内镜超声（CH-EUS）对胰腺癌与局灶型胰腺炎鉴别诊断的价值.方法 选择上海长海医院经CH-EUS检查诊断为胰腺癌和局灶型胰腺炎患者,以内镜超声引导下细针穿刺术（EUS-FNA）或组织病理学及6个月以上随访结果作为最终诊断,评价CH-EUS对胰腺癌与局灶型胰腺炎的鉴别诊断效果,并分析两者的CH-EUS图像特征.结果 共有56例患者入选本研究,平均年龄（56±12）岁.最终诊断局灶型胰腺炎21例,胰腺癌35例.CH-EUS显示的正常胰腺组织增强时相与周围组织同步,达峰显著,呈均匀等增强.胰腺癌增强时相多数晚于正常胰腺组织,消退快,达峰不显著,94.3％ （33/35）的病灶内部呈不均匀低增强,1例高增强者为癌肿内部有较多高强化的分隔,1例均匀等增强者为慢性胰腺炎癌变.局灶型胰腺炎增强多数表现为与正常胰腺组织等时相,达峰显著,76.2％（16/21）呈均匀等增强.CH-EUS鉴别局灶型胰腺炎与胰腺癌的灵敏度为90.5％,特异度97.1％,准确率94.6％,阳性预测值95.0％,阴性预测值94.4％,阳性似然比31.7,阴性似然比0.1.结论 CH-EUS可以实时、清晰地显示胰腺肿瘤的血供情况,能对胰腺癌和胰腺局灶型炎症的鉴别诊断提供有力帮助,是一种有价值的临床诊断新方法.     

非离断式Roux-en-Y吻合在远端胃癌根治术中的应用研究

目的：评价非离断式Roux-en-Y吻合术在远端胃癌根治术后消化道重建中的应用效果。方法：选取2015年1月—2017年12月在南通大学附属医院胃肠外科因胃癌行远端胃癌根治术+非离断式Roux-en-Y吻合术的50例患者作为观察组,同时将在我院胃肠外科行远端胃癌根治术+Roux-en-Y吻合术的50例患者作为对照组,对患者的手术指标、生化指标、近期和远期并发症进行比较。结果：与对照组相比,观察组的手术时间、住院时间明显缩短(P＜0.05),住院总费用差异无统计学意义(P＞0.05)。两组患者术后3个月复查血红蛋白、总蛋白及白蛋白水平差异无统计学意义(P＞0.05)。两组患者术后吻合口出血、吻合口瘘、胃排空延迟、反流性胃炎、吻合口溃疡的发生率差异无统计学意义(P＞0.05),观察组Roux-en-Y潴留综合征(Roux-en-Y stasis syndrome, RSS)的发生率明显低于对照组(P＜0.05)。结论：非离断式Roux-en-Y吻合术能缩短手术时间和住院时间,克服RSS,是远端胃癌根治术后消化道重建的理想术式。     

抗铜绿假单胞菌PcrV的scFv-Fc抗体的制备及体外活性研究

目的 制备靶向铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)III型分泌系统组件蛋白PcrV的scFv-Fc形式的单克隆抗体MFa,并研究其体外对铜绿假单胞菌生物膜形成及细胞黏附和侵入的影响。方法 将编码MFa的DNA序列合成后,插入到真核表达载体中,获得重组质粒,再采用聚乙烯亚胺(PEI)将质粒转染HEK293E细胞并获得瞬时表达;表达的产物通过HiTrap MabSelect SuRe柱进行纯化,所得到的抗体采用SDS-PAGE分析纯度,采用BCA法测定蛋白浓度。为了检测MFa抗体与PcrV抗原的亲和力,对PcrV抗原进行表达纯化,方法是将PcrV目的序列插入到pET28a表达载体中,转化E. coli BL21(DE3)获得宿主菌,在0.5mmol/L IPTG 15℃的条件下诱导过夜,并通过His-Tag标签进行亲和纯化。对于纯化的MFa抗体与PcrV抗原通过Western blot、ELISA、SPR(表面等离子共振)研究抗体与抗原的亲和力,并研究抗体体外对生物膜形成的影响,对铜绿假单胞菌黏附与侵入HeLa细胞的影响。结果 MFa抗体在HEK293瞬转系统成功获得表达与纯化,且对PcrV蛋白具有较好的亲和活性,KD值为492.2nmol/L。功能实验证实,MFa抗体能够降低铜绿假单胞菌生物膜的形成,降低铜绿假单胞菌对HeLa细胞黏附与侵入作用。结论 靶向PcrV的scFv-Fc抗体MFa具有对铜绿假单胞菌引起的感染的潜在效用,具有进一步开发为抗铜绿假单胞菌治疗药物的价值。     

制药行业基于风险管理的变更控制

随着中国GMP2010版的实施,风险管理已广泛运用于制药行业,而变更控制作为制药质量体系要素之一,如何将质量风险管理有效运用到变更控制中,是众多企业面临的主要问题。本文根据质量风险管理的理念和工具,将变更控制的评估分为初步的风险评估和详细的风险评估,同时介绍了基于风险管理的变更控制方法以及如何将质量风险管理集成到现有的变更控制系统,使变更控制评估更加充分、有效,从而确保变更带来的风险得到有效的控制,保证产品质量和患者安全。     

硬膜外阻滞麻醉用于无痛分娩的临床观察

目的:探讨硬膜外阻滞麻醉用于分娩镇痛的效果以及对产程、婴儿和产妇的影响.方法:选取L3～4间隙行硬膜外阻滞麻醉用于分娩镇痛,观察产程变化、镇痛效果、不良反应、分娩方式及新生儿窒息情况.结果:观察组和对照组相比,分娩疼痛有显著性差异(P＜0 01);分娩镇痛可缩短活跃期时间,但对第2和第3产程无明显影响.对分娩方式无影响(P＞0 05);两组新生儿Apgar评分无显著性差异(P＞0 05).观察组无麻醉不良反应发生.结论:硬膜外阻滞麻醉有利于减轻分娩时的疼痛,缩短活跃期时间,加速产程进展,对产妇、胎儿均无不良影响.     

实时荧光定量聚合酶链反应在检测大肠埃希菌引起血流感染中的应用

目的 探讨实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)在检测大肠埃希菌引起血流感染中的应用.方法 从血培养阳性瓶中提取细菌基因组DNA,以大肠埃希菌特异性引物应用实时荧光定量,扩增16S rRNA靶片段,同期进行细菌培养鉴定,对比实验结果.结果 通过对实时FQ-PCR体系特异性、敏感度、稳定性验证,结果表明具有较好的特异性...