江西省2005-2008年C群脑膜炎奈瑟菌分子分型分析

对2005-2008年江西省流脑暴发、常规监测中分离的79株C群脑膜炎奈瑟菌进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点测序(MLST)分析,描述江西省C群脑膜炎奈瑟菌的菌型分布和变迁,从分子水平了解其流行特征.     

129份疑似军团菌病血清抗体水平检测结果分析

20 0 0年 1月 1日至 1 2月 31日共接受北京 2 0余家医院送检的 1 2 9名疑似军团病患者的血清标本。这些患者入院后用一般的抗生素治疗无显著效果 ,且体温持续高热在 38 5℃以上 ,Ｘ -光显示有单侧或双侧肺炎 ,咳嗽 ,咳痰 ,呼吸困难 ,恶心呕吐等症状 (见表 1 )。医生考虑到军团菌感染 ,故送予我所进行军团菌的检测。表 1　 12 9例患者临床症状分析临床症状例数 (人 )百分率 ( % )发热≥ 3 8 5℃ 10 2 79 0 7肺炎 3 5 2 7 13咳嗽咳痰 443 4 11寒战 2 0 15 5 0恶心呕吐 14 10 85胸痛 9 6 98　　我们采用试管凝集的方法对送检的血清进行嗜肺…     

TaqMan荧光定量PCR检测流感嗜血杆菌和肺炎链球菌方法的建立及应用

目的 建立TaqMan荧光定量PCR检测方法 ,用于流感嗜血杆菌和肺炎链球菌的检测和鉴别诊断.方法 针对流感嗜血杆菌种属特异性基因bexA和肺炎链球菌种属特异性基因lytA,设计合成引物和TaqMan探针,研究不同引物和探针荧光定量PCR检测的特异性和灵敏度,确定标本检测中循环阈值(Ct)的临界值(cut-off值).将荧光定量PCR、乳胶凝集和细菌培养3种检测方法 同时应用于278份细菌性脑膜炎患者脑脊髓液标本的检测.结果 bexA基因引物和探针能特异性检测流感嗜血杆菌a、b、c、d血清型的菌株,检测灵敏度为每个反应10个基因组DNA拷贝;lytA基因引物和探针能特异性检测肺炎链球菌常见致病的血清型肺炎链球菌菌株,检测灵敏度为每个反应90个基因组DNA拷贝.通过荧光定量PCR方法 ,278份脑脊髓液标本中共检测出 4份流感嗜血杆菌阳性和7份肺炎链球菌阳性,其中各有2份培养出相应的病原菌,另有1份流感嗜血杆菌和2份肺炎链球菌乳胶凝集结果 阳性.结论 TaqMan荧光定苗PCR方法 能特异地检测和鉴定流感嗜血杆菌和肺炎链球菌,具有较高的灵敏度和快速检测的特点,能提高临床流感嗜血杆菌和肺炎链球菌感染患者标本的阳性检出率.     

肺炎克雷伯菌脉冲场凝胶电泳及多位点序列分型技术的联合应用

Objective To type Klebsiella pneumonia through methods including pulse-field gel electrophoresis (PFGE) in combination with multilocus sequence typing. Methods Four selected different Eps, referring to the Standard Operating Procedure of PulseNet China, were used. The single colony of Klebsiella pneumonia was quantified after enriched culture. Embedding organisms in agarose and genome DNA were lysed with Proteinase K and then digested by restriction endonuclease Xba Ⅰ , to produce agarose gel. Fingerprint was obtained through PFGE and bands were marked with their molecular weights and then analyzed by BioNumerics software. Using MLST to analyze the strains that were highly similar, by PFGE typing Results By comparing the four results from each Eps, fk3 (switch time from 6s to 36s,total run time is 18.5 hours) seemed to be better than the others.59 strains of Klebsiella pneumonia were divided into 47 PFGE types and 19 PFGE clusters. The highly similar strains could be typed into ST-340、ST-342、ST-343、ST-344、ST-345 by MLST. Among them, ST-342、 ST-343、 ST-344、 ST-345 types were all new MLST types that were reported in China.Conclusion Highly similar Klebsiella pneumonias typed by PFGE could also be typed by MLST.     

杜莫氏军团菌对上皮细胞A549粘附侵袭和胞内生长能力的研究

目的探明杜莫氏军团菌(Legionella dumoffii, L. dumoffii) 对上皮细胞A549的粘附、侵袭和胞内生长能力。方法实验使用菌株为L. dumoffii TEX KL(ATCC 33343) 、 L. dumoffii NY23(ATCC 33279)和嗜肺军团菌L. pneumophila philadelphila 1(ATCC 33155)。配制1×108菌悬液,将其以100MOI（Multiplicity of Infection）的比例与肺泡上皮细胞A549相互作用。通过吉曼尼兹染色和菌落计数的方法,测定菌株的粘附、侵袭和胞内生长能力。结果杜莫氏军团菌L. dumoffii TEX KL、L. dumoffii NY23和嗜肺军团菌L. pneumophila philadelphila 1三株细菌在体外生长能力和体内对A549细胞的粘附能力方面无明显差别。L. dumoffii TEX KL侵袭进入细胞内的菌数是其他两株菌的1 000倍,差异有统计学意义。结论 L. dumoffii TEX KL与L. dumoffii NY23和嗜肺军团菌L. pneumophila philadelphila 1相比,对A549细胞具有更高的侵袭力,因此也具有较高的上皮细胞内生长能力。     

鉴别29E群、X群和Z群脑膜炎奈瑟菌聚合酶链反应方法的建立及应用

目的建立鉴别29E群、X群和Z群脑膜炎奈瑟菌的聚合酶链反应（PCR）方法。方法针对脑膜炎奈瑟菌IctrA/I基因变异区序列,设计合成PCR引物,分别用于扩增29E群、X群和Z群等3个血清群脑膜炎奈瑟菌。并将该方法应用于41份疑似脑膜炎奈瑟菌菌株标本的检测。结果3对引物分别能够特异性PCR扩增29E群、X群和Z群脑膜炎奈瑟菌菌株的IctrA/I基因,扩增片段大小分别为667 bp、525 bp和667 bp,3个血清群之间以及与其他血清群脑膜炎奈瑟菌之间未出现交叉PCR扩增。41份疑似脑膜炎奈瑟菌菌株标本中,29E群和X群PCR阳性的标本分别有7份和2份,未检测出Z群菌株。结论本研究建立的PCR方法能准确、特异地鉴定29E群、X群和Z群脑膜炎奈瑟菌菌株。     

军团菌双重PCR检测方法的建立及其应用研究

目的　建立一种双重PCR方法 ,用于简便 ,快速检测军团菌。方法　根据军团菌 16SrRNA基因和mip基因序列设计合成引物 ,可以扩增 386bp 16SrRNA基因和 2 0 6bpmip基因片段。用该方法对军团菌标准参考菌株和 47份临床标本进行了检测。结果　通过一次PCR反应 ,不仅能够检测嗜肺军团菌 ,而且能够检测非嗜肺的军团菌 ,从而克服了单一引物应用时的不足。 2 1株对照菌株扩增阴性 ,最小检出限为 2× 10 1 cfu/ml。 47份临床标本 (包括 12份血 ,2 0份支气管肺泡灌洗液 ,7份胸水 ,8份痰 )PCR检测的阳性标本为 2 8份 (2 8/4 7) ,在临床上均支持为军团菌感染 ,高于血清抗体检测的阳性标本数 (2 4/4 7)。结论　该方法用于军团菌的检测简便、快捷 ,具有很高的特异性和敏感性 ,为未来军团病分子流行病学调查及临床早期诊断提供了有效的检测手段