军团病细菌学和分子生物学检测方法的研究及其应用

我们自1983年起开始军团病研究,是国内唯一对军团病进行系统研究的部门。10多年来我们的工作如下: 1.军团菌简易培养基的研制。军团菌的生长对营养需求较严格,而且极易被其它微生物所污染。最早的军团菌培养基成分主要依赖进口,价格昂贵。1983年起,我们研制了军团菌简易培养基,以国产试剂代替进口试剂,取得成功。     

肺炎链球菌PCR分型技术的建立与应用

目的 建立肺炎链球菌血清型分型的PCR简便方法 ,初步了解肺炎链球菌血清型/群的分布状况.方法 设计合成12种肺炎链球菌血清型/群特异性引物,优化不同血清型/群引物FCR条件,并检测最佳反应浓度、灵敏性以及特异性;初步应用于肺炎链球菌菌株的血清型/群检测.结果引物浓度优化后,12种肺炎链球菌血清型/群特异引物呈现较好的特异性与敏感性;对119株肺炎链球菌菌株进行PCR分型检测,其中113株可分为9个血清型/群(3、5、6A/B、9A/V、14、18、19A、19F、23F),6株未分群.结论 初步建立了12种血清型/群肺炎链球菌PCR分型技术,可用于鉴别人群中主要流行的肺炎链球菌血清型/群.     

细菌性脑膜炎多重聚合酶链反应检测方法的研究

目的建立8种细菌性脑膜炎多重聚合酶链反应(Multiplex-polymerase Chain Reaction M-PCR)检测方法。方法针对脑膜炎奈瑟菌、流行性感冒嗜血杆菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生性李斯特菌、猪链球菌、结核杆菌、新生隐球菌的种特异性基因,通过优化单一PCR扩增体系及扩增程序,建立M-PCR方法检测8种导致细菌性脑膜炎的病原体,检测M-PCR体系的灵敏度。结果初步建立了检测8种导致细菌性脑膜炎病原体的M-PCR扩增方法,能够同时检测多种导致细菌性脑膜炎的病原。结论M-PCR方法较常规的分离培养鉴定方法具有较高的灵敏度和检测快速的特点,适合临床疑似细菌性脑膜炎感染病例的检测及筛查,提高临床细菌性感染脑膜炎病例的诊断阳性率。     

下呼吸道感染病原体检测方法研究进展

下呼吸道感染(lower respiratory tract infection, LRTI)是常见的呼吸系统疾病,包括肺炎、慢性支气管炎等多种感染类型,以抗生素治疗为主,尽快确定下呼吸道感染的病原体并采取针对性治疗可以大大降低下呼吸道感染死亡率,因此病原体的快速检测对疾病准确诊断和及时治疗相当关键。目前下呼吸道感染病原体检测技术较多,高通量、自动化和快速检测成为其主要发展趋势。本文介绍了下呼吸道感染检测标本类型和下呼吸道感染常见及非常见病原体,并着重对目前常用的病原体检测方法尤其是多种病原体同时检测方法进行综述,旨在指导临床根据疾病采集相应的样本类型,选择适宜的检测方法,快速确定感染病原体并及时治疗。     

mip基因聚合酶链反应结合地高辛标记探针杂交鉴定嗜肺军团菌

目的对嗜肺军团菌国外参考菌株及国内分离菌株的巨噬细胞感染增强子（ｍｉｐ）基因分析，建立一种快速、敏感、特异的嗜肺军团菌基因检测鉴定方法。方法利用嗜肺军团菌种特异性ＤＮＡ片段ｍｉｐ基因通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增，对ＰＣＲ阳性产物进行地高辛标记的ｍｉｐ基因探针杂交，观察其反应结果。并对２６株环境和患者中分离的疑似嗜肺军团菌菌株进行分析。结果所有实验用嗜肺军团菌国外参考菌株及国内分离菌株的ｍｉｐ基因的ＰＣＲ扩增结果都为阳性，探针杂交结果也为阳性，而非嗜肺军团菌及与非军团菌对照菌株的ＰＣＲ扩增结果及探针杂交结果都为阴性，本实验其灵敏度和特异度均为１００％。另外２６株疑似嗜肺军团菌菌株有６株被鉴定为嗜肺军团菌。结论所建立嗜肺军团菌的快速初步鉴定方法具有很高的特异性和敏感性，并具有较高的应用价值     

北京郊区某新兵训练营地发生一起博杰曼军团菌病爆发

目的：2000年1月北京郊区某新兵训练地发现2例博杰曼军团菌肺炎，为了解该部队的感染率和发病情况进行了流行病学调查。方法：采用一表格个案调查。检测血清Lp1-14,Lm,Lboz,Ljor,Ld和Lk抗体；同时外环境采水作细细菌分离培养，结果：该部队新兵感染率为33．00％（67．203），患病率为8．875（18．203）。18例患者中，肺炎型2例，庞蒂亚克热型16例，结论：认为是一起由博杰曼军团菌（L boz）引起的军团菌病爆发。     

102株侵袭性肺炎链球菌血清型分布特征及耐药谱分析

目的 了解侵袭性肺炎链球菌菌株血清群/型分布特征和菌株耐药性情况。方法 选用本科室保存的102株侵袭性肺炎链球菌菌株(来自内蒙古、宁夏、四川及辽宁)。合成23种肺炎链球菌血清群/型特异性引物,采用多重PCR方法扩增进行初筛,扩增阳性的用荚膜肿胀方法进行复核验证。并选用24种抗生素进行药物敏感性实验。结果 102株侵袭性肺炎链球菌共分为21个血清群,主要流行血清群/型(株数由高到低)依次为19、6、14、23、35/42、34、3、22A、15、1、18、4、5、7B、8、10A、11A、13、17A、20、33F。含10株以上的是19群、6群、14群。24种抗生素中,莫西沙星、吉米沙星、头孢曲松、多西环素未发现耐药菌株。其余20种抗生素均有耐药菌株出现。耐药率大于90%的抗生素从高到低依次为:阿奇霉素、地红霉素、克拉霉素、红霉素;耐药率小于10%的依次为:万古霉素、青霉素(注射)、利奈唑胺、美罗培南、利福平、左氧氟沙星、阿莫西林/克拉维酸、头孢吡肟。结论 我国侵袭性肺炎链球菌分离株以19群、6群、14群最多见;23价肺炎疫苗覆盖血清群但不包含的血清型(6A、6C、6D、15C、23B、22A、18A、7B、17A)和非疫苗相关的13群、34群、35/42群也占有一定比例。治疗由肺炎链球菌引起的感染首选吉米沙星、莫西沙星、头孢曲松、多西环素等抗生素。     

博杰曼军团菌引起4例军团菌肺炎的调查报告

1995年12月底至1996年1月初，北京市顺义县某部新兵发生4例由博杰曼军团菌（L．Bozemanii）引起的军团菌肺炎。一、流行病学调查：该部位于北京市顺义县西南。1995年新兵44人同住一宿舍，此宿舍原为食堂，有窗与厨房操作间相通，做饭时蒸汽四溢。12月28日发现首例病人，1996年1月4日疫情终止，持续7天，先后发病7入，罹患率15．9％。同时取周围环境水样：厨房龙头末梢水500ml、澡堂淋浴喷头水500ml、澡堂龙头末梢水500ml。上述水样分别作BCYE平板培养及PCR扩增。二、临床特点：经双份血清试管凝集试验（TAT）确诊为军团菌病7例（肺炎型…     

中国嗜肺军团菌分离株脉冲场凝胶电泳分型分析以及数据库的建立

目的 对分离的262株嗜肺军团菌进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析,初步建立中国嗜肺军团菌的PFGE分型数据库.方法 采用PFGE技术,对2004-2009年中国11个省(市)分离的嗜肺军团菌用AscⅠ酶切,BioNumerics软件分析PFGE图谱,并建立分子分型数据库.结果 262株嗜肺军团菌的PFGE图谱共分为108种不同的PFGE带型,相似性系数在16%～100%之间,通过聚类分析,可以分为差异明显的不同簇.不同省份、年份和血清型的菌株之间有交叉带型.结论 中国环境分离的嗜肺军团菌菌株基因组变异较大,同时也具有克隆化特征,且可能有多个克隆系存在.

Abstract：

Objective To analyze the molecular types of Legionella (L.) pneumophila strains isolated in China,and to develop the PulseNet-China Database of L.pneumophila.Methods Pulsed field gel electrophoresis (PFGE) was used to analyze 262 L.pneumophila strains collected from 11 provinces between 2004 and 2009 in China.Different kinds of genomic DNA in different L.pneumophila strains were isolated and separated after digesting with Asc Ⅰ.BioNumerics software was used to analysis the PFGE fingerprints.Results L.pneumophila strains isolated in China were quite different regarding their PFGE patterns.There were 108 PFGE types among the 262 strains tested in this study.The similarity value of these strains was in the range of 16%-100% and the same types were discovered in different provinces and years.Conclusion L.pneumophila strains isolated in China were with high genetic variations.There might be different clones existed in China.The development of PulseNet China Database was thus of great significance in monitoring the L.pneumophila strains in the future.