传染性非典型肺炎临床诊断病例血清标本不同非典型肺炎病原体抗体检测

目的研究传染性非典型肺炎(SARS)临床诊断病例血清标本中常见的不同非典型肺炎病原体感染抗体分布情况。方法选取2003年SARS流行期间90份SARS临床确诊病例血清标本和40份健康志愿者血清标本进行血清抗体检测。结果90份临床诊断的传染性非典型肺炎(SARS)病例急性期血清标本中,21.1%(19/90)标本SARS抗体阳性,79.9%(71/90)标本SARS抗体阴性。肺炎支原体、呼吸道合胞病毒、腺病毒、军团菌、肺炎衣原体等抗体检测呈现不同的分布。结论2003年SARS流行期间,SARS抗体阴性的传染性非典型肺炎临床确诊病例可能存在或合并其它病原体感染。     

肺炎链球菌PCR分型技术的建立与应用

目的 建立肺炎链球菌血清型分型的PCR简便方法 ,初步了解肺炎链球菌血清型/群的分布状况.方法 设计合成12种肺炎链球菌血清型/群特异性引物,优化不同血清型/群引物FCR条件,并检测最佳反应浓度、灵敏性以及特异性;初步应用于肺炎链球菌菌株的血清型/群检测.结果引物浓度优化后,12种肺炎链球菌血清型/群特异引物呈现较好的特异性与敏感性;对119株肺炎链球菌菌株进行PCR分型检测,其中113株可分为9个血清型/群(3、5、6A/B、9A/V、14、18、19A、19F、23F),6株未分群.结论 初步建立了12种血清型/群肺炎链球菌PCR分型技术,可用于鉴别人群中主要流行的肺炎链球菌血清型/群.     

206株中国环境分离嗜肺军团菌1型菌株基因序列分型研究

目的 对中国不同自然环境来源分离的嗜肺军团菌血清1型菌株进行分子分型和种群结构分析。方法 应用7个基因(flaA、pilE、asd、mip、mompS、proA、neuA)序列分型方法(Sequence based typing,SBT)对不同环境来源的206株嗜肺军团菌血清1型菌株进行分型研究,通过查询嗜肺军团菌SBT数据库(http://www.ewgli.org)和用BioNumerics软件构建最小生成树揭示菌株的分子分型和种群结构特征。结果 206株菌分成54个ST型(IOD=0.7205)。其中49株温泉水分离株分成25个ST型(IOD=0.9498),各位点Nei指数 0.7721~0.8563;130株冷却塔水分离株分成31个ST型(IOD=0.6453),各位点Nei指数为0.4227~0.4970;27株管道水分离株分成3个ST型(IOD=0.1453),各位点Nei指数为0.1425~0.1453。ST1型含108株菌,占52.4%,是优势带型。54个ST型形成5个克隆群。通过中国菌株和其他20个国家的菌株综合分析,共计1199株菌分成304个ST型,形成21个序列群。其中ST-1型为全球优势型别,其余型别和序列群呈地区性分布特征。结论 中国环境分离的嗜肺军团菌1型菌株具有高度复杂的基因多态性和种群结构,其中ST1是我国也是全球环境菌株的优势型别。     

241株肺炎链球菌血清分型及耐药性研究

目的了解肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae,S．p）对常用抗菌药物的敏感性及血清型构成。方法采用纸片扩散法检测241株S．P对6种常用抗菌药物的敏感性;采用荚膜肿胀试验对菌株进行血清学分型。结果241株s．p对利福平、米诺环素、氧氟沙星、复方新诺明、阿奇霉素、氯霉素的耐药率分别为0．41％、77．18％、0％、78．00％、95．44％、22．00％。229株S．P可分为24个血清型／群,主要的流行血清型／群为19F、6B、19A、23F、15、14、6A、3、6C;12株s．p未能分型。多重耐药菌株分布在6B、19A、19F、23F血清型。结论S．P的耐药情况严重,大多数菌株呈多重耐药特征。     

军团病检测技术研究进展

军团病是一种由军团菌引起的呼吸道传染病，临床症状主要以肺炎为主。由于军团菌肺炎症状不典型，临床诊断困难，因此也称为非典型肺炎。军团病检测诊断技术一直是国内外研究的热点。本文拟就军团病检测技术作一综述，以期在军团病诊断、检测与防治方面有所启示。     

PCR方法捕获环境水样中嗜肺军团菌DNA

嗜肺军团菌是军团病的主要病原体，它所导致的军团病病例占临床病例的80％以上，多数军团病暴发由嗜肺军团菌所引起。通过针对嗜肺军团菌种保守基因（mipgene）设计的引物，我们建立了一种多聚酶链反应（PCR）检测方法，可以准确捕获环境标本中的嗜肺军团菌，同时具有很好的特异性，其最低可检出18cfu／ml的细菌。该方法的建立为嗜肺军团菌病的诊断以及在军团病流行病学调查中嗜肺军团菌病原的追踪提供了一条便捷、准确、可靠的途径。     

嗜肺军团菌荧光定量PCR检测

目的 建立特异、快速、敏感的TaqMan探针荧光定量PCR方法,用于检测嗜肺军团菌mip基因.方法 嗜肺军团菌及其他军团菌DNA模板来自中国疾病预防控制中心呼吸道室,嗜肺军团菌地方株及其他对照株由本中心菌种室供给.利用嗜肺军团菌mip基因保守序列设计引物和TaqMan探针,对其进行筛选,同时对荧光定量PCR反应条件和反应体系进行优化,并对嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及其他细菌进行检测,验证该方法的特异性、敏感性、重复性等.结果 该方法在检测多株嗜肺军团菌时,均出现阳性信号,而对非嗜肺军团菌和其他细菌则未有阳性扩增结果出现.检测灵敏度达10个拷贝/反应,从菌株核酸的提取至检测完成仅需2 h左右,可减少常规PCR操作的污染机会.结论 TaqMan荧光定量PCR方法可定量检测嗜肺军团菌,具有特异性高、快速、敏感等特点,适于外环境污染源状况的调查及应急事件的快速定量检测.     

四种检测方法用于上海市口岸管道水军团菌存在状况调查的研究

目的比较传统的平板培养法、普通聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)、实时荧光定量PCR(realtime fluorescence quantitative PCR,real-time PCR)和荧光染料叠氮溴化乙锭(ethidium monoazide,EMA)结合荧光定量PCR的方法(EMA-荧光定量PCR)对管道水中军团菌的检测效果。方法于2010年对上海市2个口岸管道水进行采样,共采集132份。分别采用传统的平板培养法、普通PCR、荧光定量PCR和EMA-荧光定量PCR对水样中军团菌进行定性和/或定量分析。结果对132份管道水标本进行军团菌定性检测,平板培养法、普通PCR、荧光定量PCR和EMA-荧光定量PCR检出军团菌污染率分别为18.9%、20.5%、24.2%和24.2%。3种定量方法(平板培养法、荧光定量PCR和EMA-荧光定量PCR)对阳性标本中军团菌定量数值分别为50~1320菌落形成单位/升(cfu/L)、20~13 085基因单位/升(GU/L)和10~4480 GU/L。对于132份水样,3种方法对军团菌含量分析的定量数值大小差异有统计学意义(χ2=193.6,P0.01),其中荧光定量PCR的定量数值最高,EMA-荧光定量PCR的数值次之,平板培养的数值最低。结论上海市口岸管道水中军团菌污染率和含菌量高。荧光定量PCR和EMA-荧光定量PCR方法检测管道水中军团菌的灵敏度优于传统的培养方法,EMA-荧光定量PCR方法适合用于环境水体中军团菌活菌监测。     

土壤中军团菌污染状况调查研究

目的 了解土壤中军团菌的污染状况和分离菌株的分子型别、对抗生素的敏感性和细胞内的生长能力。 方法 采集北京市公共场所土壤样本123份,采用军团菌GVPC选择性培养基培养法和荧光定量PCR检测法对土壤中军团菌进行检测分析。用小鼠巨噬细胞J774细胞对分离菌株进行菌株致病性研究;用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术对分离菌株进行分型分析;用E-test试纸药敏实验法对分离菌株进行红霉素、阿奇霉素、利福平、左氧氟沙星、莫西沙星5种抗生素敏感性检测。 结果 荧光定量PCR检测法在花鸟市场和夏季水库样本中检出军团菌,检出阳性率分别为50.00%和24.24%,平板培养法仅在夏季水库样本中检出军团菌,阳性率为6.06%。 分离的2株军团菌TR1和TR2均为嗜肺军团菌,血清型分别为5型和8型。 2株嗜肺军团菌均具有较高的细胞内生长能力,PFGE分型显示2株菌为不同带型,药敏实验显示2株菌均对红霉素、阿奇霉素、利福平、左氧氟沙星、莫西沙星5种常用抗生素表现敏感性。 结论 公共场所土壤中可检出嗜肺军团菌,且分离株有较高的细胞内生长能力,提示具有致病性,存在导致军团菌病散发流行或暴发的危险,应加强对公共场所土壤中军团菌的监测。      

101株军团菌耐药谱分析

目的了解不同来源、不同血清型/群军团菌菌株耐药性情况。方法采用E-test试纸条法对101株17个血清型的军团菌（包括67株环境分离菌株,16株临床分离菌株以及18株国际参考菌株）进行红霉素、利福平、左氧氟沙星、舒巴坦、阿奇霉素、莫西沙星和头孢呋辛7种抗生素药敏实验。结果所有实验菌株中只有3株未出现耐药情况。 其余98株菌株对7种抗生素均有不同程度的耐药。 对头孢呋辛耐药率为69.31%（n＝70）,阿奇霉素耐药率为8.91%（n＝9）,莫西沙星耐药率为7.92%（n＝8）,利福平耐药率为5.94%（n＝6）,舒巴坦耐药率为4.95%（n＝5）,红霉素耐药率为2.97%（n＝3）,左氧氟沙星耐药率为0.99%（n＝1）。 17个血清型中,13个血清型对头孢呋辛耐药,4个血清型出现耐多药（≥2种抗生素）。 嗜肺军团菌血清（LP）4型对舒巴坦和头孢呋辛2种抗生素同时耐药,LP5型对头孢呋辛和莫西沙星2种抗生素同时耐药,LP9型对红霉素、舒巴坦和头孢呋辛3种抗生素同时耐药,LP1型对红霉素、阿奇霉素、左氧氟沙星、莫西沙星、利福平、舒巴坦和头孢呋辛7种抗生素同时耐药;其余9个血清型只对头孢呋辛耐药。 非嗜肺军团菌血清型（L. oakridgensi）仅对阿奇霉素和头孢呋辛耐药,而血清型LP3、博兹蔓军团菌（Legionella bozemanii）和菲氏军团菌（L. feeleii）对所有抗生素均敏感。结论临床上用于治疗军团菌病的一线抗生素如红霉素仍然可以作为首选药物。 此外奎诺酮类抗生素左氧氟沙星在治疗军团菌病时也可作为备选。 耐药最为严重的头孢呋辛不能用于治疗军团菌病。