黄芩素通过PI3K/AKT通路增强三氧化二砷对肝癌细胞的促凋亡作用

目的:探讨黄芩素增强As2O3对肝癌细胞的促凋亡作用及其可能的作用机制。方法:采用MTT方法检测不同作用浓度及作用时间的黄芩素、As2O3单用和联用对肝癌高转移细胞HCCLM9、肝癌低转移细胞MHCC97L的增殖抑制率,并根据联合用药q值判断两药联用的性质;流式细胞术检测肝癌细胞的周期分布;Tunel技术检测肝癌细胞的凋亡情况;Real-Time PCR和Western blot检测肝癌细胞凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-6、caspase-9的mRNA和蛋白质水平以及PI3K、AKT和P-AKT蛋白的表达情况。结果:黄芩素、As2O3单药及联合后均能明显抑制HCCLM9和MHCC97L细胞增殖能力,但两药联合作用更强,且呈明显时间和剂量依赖性效应。两药单用及联合均能够明显导致肝癌细胞G0/G1期停滞,Tunel检测到细胞凋亡率升高,且两药联合作用强于单药。两种药物同时处理后肝癌细胞的caspase-3、caspase-6及caspase-9 的mRNA和蛋白水平表达显著升高而PI3K、p-AKT蛋白表达下降。结论:黄芩素增强As2O3对肝癌细胞的促凋亡的作用,同时引起PI3K、p-AKT表达的下调及caspase-3、caspase-6及caspase-9表达的上调。推测黄芩素可能是通过激活Caspase 凋亡信号,同时抑制PI3K/AKT通路增强As2O3对肝癌细胞促凋亡的作用。     

黄连解毒汤对脂多糖诱导的小鼠急性肾损伤治疗作用及机制

目的 研究黄连解毒汤对脂多糖诱导的小鼠急性肾损伤的作用及作用机制。方法 雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和黄连解毒汤低、中、高剂量（50、100、150 mg/kg）组,每组8只。连续ig黄连解毒汤3 d,末次给药2 h后,ip脂多糖（10 mg/kg）建立急性肾损伤模型。检测血清中肌酐和尿素氮水平;苏木素-伊红（HE）和高碘酸-席夫（PAS）染色检测肾组织病理变化;免疫组化法检测肾组织B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）表达;TUNEL染色检测肾组织细胞凋亡情况;Western blotting检测肾组织磷酸酯酶与张力蛋白同源物（phosphatase and tensin homolog,PTEN）、磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、p-PI3K和p-Akt蛋白表达。结果 黄连解毒汤明显降低急性肾损伤小鼠血清中尿素氮及肌酐水平（P<0.0...     

黄芩素对TGF-β_1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的影响

目的观察黄芩素(黄芩苷元,baicalein,BAE)对TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的影响。方法体外培养人胚胎肺成纤维细胞(WI-38),TGF-β1诱导后,通过Western blot检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)相关蛋白表达的变化,同时采用免疫组化法观察细胞形态变化。TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞WI-38成肌成纤维细胞模型,再给予不同剂量的黄芩素,检测转化过程中相关蛋白α-SMA、collagen 1、Smad 2、p-Smad 2的表达变化。结果与模型组相比,黄芩素2 000nmol.L-1～125 nmol.L-1对TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化有抑制作用。黄芩素组以剂量依赖性下调α-SMA(P<0.01)、collagen 1(P<0.01)、Smad 2(P<0.05)、p-Smad 2(P<0.05)蛋白的表达。结论黄芩素对TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化过程中有一定的抑制作用,该作用与下调α-SMA,抑制细胞内胶原合成及干预TGF-β/Smads信号通路有关。     

大孔吸附树脂纯化黄芩中三种黄酮的含量测定

目的 建立高效液相色谱法同时测定大孔吸附树脂富集纯化后的黄芩提取物中黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素含量的方法。方法 以AB-8型大孔吸附树脂对黄芩水提取物中总黄酮进行富集纯化,采用高效液相色谱法同时测定其中黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的含量。色谱柱：Agilent TC-C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相：乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱;检测波长：280 nm;流速1.0 mL·min^-1;柱温：30 ℃。结果 黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素分别在0.022 4~0.448 0 μg (r=0.999 9),0.021 0~0.420 0 μg(r=0.999 9),0.010 3~0.205 0 μg(r=0.999 9)内线性关系良好;平均回收率分别为97.3%(RSD 1.71%),98.4%(RSD 2.05%),98.1%(RSD 1.65%)。黄芩水提取物经大孔吸附树脂纯化后,黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的平均含量分别为27.52%、6.87%和2.13%,未经纯化的黄芩水提取物中三者的平均含量分别为9.16%、1.66%和0.54%。结论 本方法简便、准确、灵敏度高,重复性好。     

黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响

目的研究黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其阻滞细胞周期和诱导凋亡的机制。方法通过CCK-8法和克隆形成实验检测黄芩素对CNE2细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化,荧光显微镜观察细胞形态改变,试剂盒检测Caspase-3蛋白活性变化,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测P53、P21、CDK2、Caspase-3m RNA表达情况。结果黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖具有显著的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性,与对照组比较,不同浓度的黄芩素作用于CNE2细胞48 h后,细胞出现典型的凋亡特征,并出现周期阻滞,Caspase-3活性增强,P53及其下游基因P21、Caspase-3 m RNA表达水平增高,CDK2 m RNA表达水平下降。结论黄芩素可抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖,可能是通过上调P53表达诱导细胞凋亡并阻滞细胞周期于S期。     

芩枳丸多指标成分含量测定研究

目的:采用HPLC测定芩枳丸中橙皮苷、黄芩苷、黄芩素、大黄素、大黄酚的含量,为进一步提高其质量控制提供依据。方法:采用Agilent C18(4.6 mm×250 mm,5"m)色谱柱,以甲醇-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长为260 nm。结果:橙皮苷、黄芩苷、黄芩素、大黄素、大黄酚分别在0.120~1.200、0.196~1.960、0.016~0.160、0.024~0.240、0.050~0.500μg范围内与峰面积呈良好线性关系(r0.999 0);平均加样回收率(n=6)分别为98.56%、98.20%、98.54%、98.27%、99.64%。结论:建立了同时测定芩枳丸中5种成分的含量测定的方法,方法重复性好,为产品质量控制和综合评价提供依据。     

高效液相色谱法同时测定双黄消炎片中黄芩苷和黄芩素含量

目的 建立同时测定双黄消炎片中黄芩苷和黄芩素含量的反相高效液相色谱法.方法 色谱柱采用Agilent Eclipse XDB-C18柱(250 mm ×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.1%磷酸溶液为流动相(梯度洗脱),检测波长为277 nm,流速1.0 mL/min,进样量10μL,柱温35℃.结果 黄芩苷质量浓度在5.678~141.95μg/mL范围内与峰面积有良好线性关系,r=1.000 0(n=7);黄芩素质量浓度在2.122~53.05 μg/mL范围内与峰面积有良好线性关系,r=1.000 0(n=7).黄芩苷平均回收率为99.32%,RSD为0.63%(n=6);黄芩素平均回收率为99.27%,RSD为0.48%(n=6).结论该法操作简便、快速、结果准确,可用于双黄消炎片的质量控制.     

超临界CO2抗溶剂法制备黄芩素微粒的工艺研究

目的 以微粒的体积平均粒径为评价指标,优化黄芩素微粒的制备工艺.方法 采用超临界CO2抗溶剂法制备黄芩素微粒,在单因素试验的基础上设计正交试验优选黄芩素微粒的制备工艺,并对优选的工艺组合进行了粒度分布、扫描电镜(SEM)分析、红外吸收光谱法(IR)及差示扫描量热法(DSC)的表征.结果 正交试验得到的优选工艺条件:溶液体积流量0.75 mL/min,结晶压力8 MPa,结晶温度48℃,黄芩素质量浓度4 mg/mL;在此工艺条件下制备得到的黄芩素微粒的大小明显小于黄芩素原料,扫描电镜显示制备出的黄芩素微粒为不规则形状;IR和DSC显示黄芩素微粒的化学结构没有发生变化,热力学性质发生了变化,并且经处理过的黄芩素的纯度变高.结论 超临界CO2抗溶剂法制备黄芩素微粒可行,为制备超细微粒提供参考依据.     

葛根芩连汤中黄芩活性成分在大鼠体内的组织分布

目的: 考察大鼠灌服葛根芩连汤后黄芩活性成分在心、肝、胃、肺、脾、肾、小肠中分布特性。方法: 采用LC-MS/MS测定黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷及汉黄芩素在大鼠各组织中的含量,Shiseido CAPCELL PAK C₁₈色谱柱 (2.0 mm×100 mm,5 μm),流动相0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,采用ESI正离子检测,多反应监测模式测定。按15 g·kg^-1灌胃葛根芩连汤,分别于给药后2,4,6,8,12 h断颈动脉放血处死动物,立即分取心、肝、胃、肺、肾、脾、小肠7个组织处理,测定各组织中活性成分的分布情况。结果: 黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷及汉黄芩素的线性范围分别为6.150~3 077,3.030~1 515,6.170~3 085,3.140~1 569 μg·L^-1,日内精密度RSD 5.4%~11.7%,日间精密度RSD 7.8%~11.9%,准确度RE-6.4%~7.5%,各组织中4种活性成分的提取回收率均>75.5%,基质效应可忽略,大鼠肝脏组织中4种活性成分在放置4℃保存24 h,-20℃冰箱内反复冻融1,3次及-70℃冰箱内保存4周条件下稳定性良好。结论: 活性成分在各组织中浓度差异较大,大鼠灌服葛根芩连汤后黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷及汉黄芩素主要分布于肝脏、胃及小肠中,其次为肾、心、肺、脾。     

一测多评法测定银黄制剂中4种黄酮类成分含量

 目的 建立一测多评法测定银黄制剂中黄芩黄酮类成分含量的分析方法,证明一测多评法用于复方制剂的可行性。方法 以银黄制剂为研究对象,建立汉黄芩苷（wogonoside）、黄芩素（baicalein）和汉黄芩素（wogonin）与黄芩苷（baicalin）间的相对校正因子。分别采用外标法和一测多评法测定银黄制剂中4种黄酮类成分的含量,并将一测多评法的计算值与外标法实测值用相对误差进行比较。结果 黄酮类成分间的相对校正因子分别为f ^{274 nm}_{汉黄芩素/黄芩苷}=1.20,f ^{274 nm}_{黄芩素/黄芩苷}=1.62,f ^{274 nm}_{汉黄芩素/黄芩苷}=1.68。一测多评法的计算结果与外标法的实测值之间没有显著性差异,实验所得的相对校正因子可信。结论 一测多评法可作为一个新的质量评价模式用于银黄制剂中黄酮类成分的含量测定。