血清CA19-9、CEA水平与胰腺癌预后的关系

目的:探讨胰腺癌患术前血清中CA19-9与CEA表达情况对预后的影响.方法:回顾分析医院2012年1月~2013年12月128例胰腺癌患临床病理资料,应用Kaplan-Meier法、Log-rank检验及Cox回归分析CA19-9和CEA水平与患生存时间的关系.血清中CA19-9 >39 U/mL,CEA >4.7 ng/mL被视为表达增高.结果:128例患平均年龄为62岁,中位生存期为12.2月,其中CA19-9和CEA的表达水平增高的比例分别为78.1%,37.5%.CA19-9、CEA升高组患的预后明显差于正常组(CA19-9, P=0.027;CEA,P=0.036).Cox多因素回归分析显示淋巴结转移、CA19-9 >39 U/mL、CEA >4.7 ng/mL是影响胰腺癌患预后的独立因素.结论:术前CA19-9、CEA水平与胰腺患生存时间密切相关,能有效评估患的预后.     

mTORC1-HIF1α通路基因在人CD8+调节T细胞中的表达及意义

目的:探讨mTORC1-HIF1α通路基因在人CD8+调节性T细胞中的表达及意义?方法:建立人卵巢癌细胞系SKOV3与健康人CD8+ T细胞体外共培养体系,设置CD8+T细胞单独培养组为对照组?共培养5 d后,收集各组CD8+T细胞,荧光定量PCR检测2组CD8+T细胞中mTORC1-HIF1α通路基因(mTORC1?HIF1α?Glut1?PKM2?GPI?TPI?Eno1及LDHα)mRNA表达水平;Western blot 检测2组CD8+T细胞中mTORC1-HIF1α通路基因(mTORC1?HIF1α及PKM2)蛋白表达水平;收集14例卵巢癌,12例卵巢良性肿瘤及12例健康体检者外周血,磁珠阳选法分离CD8+T细胞,荧光定量PCR检测卵巢癌患者CD8+T细胞中mTORC1-HIF1α通路基因mRNA表达水平,并与卵巢良性肿瘤及健康体检者做比较研究?结果:与单独培养组相比,共培养组CD8+ T细胞mTORC1?HIF1α?PKM2?GPI及TPI mRNA表达水平显著降低(P < 0.05);Western blot 结果显示,共培养组CD8+ T细胞mTORC1?HIF1α及PKM2蛋白表达水平也显著低于对照组(P < 0.05);卵巢癌组CD8+ T细胞中mTORC1?HIF1α?Glut1?PKM2?GPI及TPI表达量显著低于健康对照组(P < 0.05);卵巢癌组mTORC1?PKM2?GPI及TPI表达量明显低于卵巢良性肿瘤组(P < 0.05);卵巢良性组mTORC1-HIF1α通路各基因表达水平与健康对照组间无显著性差异?结论:卵巢癌微环境诱导的CD8+调节性T细胞低表达mTORC1-HIF1α通路基因,mTORC1-HIF1α通路在卵巢癌微环境中CD8+调节性T细胞代谢及分化过程中具有重要意义?     

甲基化特异性基因扩增检测过程中的质量控制

目的构建adenomatous polyposis coli(APC)基因启动子1A的甲基化阳性质粒标准品,对甲基化特异性基因扩增(meth-ylation specific PCR,MSP)的检测灵敏度进行质量控制.方法对脐血淋巴细胞DNA转甲基并化学修饰,制备甲基化阳性和阴性模板,MSP后获得目的片段,克隆到pMD18-T质粒载体,测序筛选阳性和阴性质粒标准品,紫外分光法对标准品定量,对10倍梯度稀释的质粒进行SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR来获得弱阳性质控品,对36份组织样本进行MSP检测.结果将MSP后电泳能显示的质粒(105拷贝/ml)作为弱阳性质控品.在加入弱阳性质控品后,2例阴性的样本最终定为阳性;11例未定结果的样本最终7例定为阳性,4例定为阴性.36例样本无质控品前的甲基化阳性率为25%,有质控品后的阳性率为50%,两次结果差异显著(P=0.001).结论构建了携带甲基化阳性的APC基因启动子的质粒标准品并制备了低拷贝的弱阳性质控品,可以对MSP检测灵敏度进行质量控制,降低了检测的假阴性率.     

4种血浆游离DNA提取方法的比较

目的比较4种方法对血浆游离结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)DNA和质粒DNA的提取效率。方法MTBDNA和重组质粒DNA经紫外分光光度法准确定量并梯度稀释,建立标准品。构建含有一定浓度MTBDNA和质粒DNA的血浆,分别采用4种方法提取血浆游离DNA,采用实时荧光PCR技术定量检测模拟血浆中MTBDNA和质粒DNA的含量,比较各种方法的提取效率。结果4种方法中,磁珠法对MTBDNA和质粒DNA的提取效率最高,分别为52.8%和69.2%;相对丢失率最低,分别为40.1%和31.8%;重复性最好,其变异系数分别为26.7%和26.0%。结论在4种方法中,磁珠法对血浆游离DNA的提取效率最高,尤其适合于小片段DNA的提取。     

荧光定量PCR检测鼻咽部脱落细胞内EBV-DNA

目的 建立荧光定量PCR（FQ－PCR）检测鼻咽部脱落细胞中EBV－DNA的方法。方法 以患者鼻咽部脱落细胞内DNA作为样本，以EB病毒基因序列中EBNA1（核抗原1）基因片段作为扩增的靶DNA，同时从人β－珠蛋白DNA片段作为内参照，合成了两对引物，并设计了两个特异的荧光探针，优化了FQ－PCR反应体系，同时对这两个片段进行扩增，每一标本得到两个Ct值；CtE和Ctβ，得到单位细胞EB病毒的相对量。结果 临床标本29例中，阳性22例，阴性7例，临床资料证实阳性者全部为鼻咽癌（NPC），阴性者全部为非鼻咽癌。结论 建立的FQ－PCR检测鼻咽部脱落细胞中EBV－DNA的方法，能反映单位细胞病毒的复制情况，可用于NPC的筛查，并可能应用于该病的风险评估和疗效观察。     

群体病例管理数据库的开发研究——含样品管理的新型医学病例信息管理系统

针对当前病例临床信息与样品管理存在交叉需求的空缺,开发一种将临床信息与样品管理相结合的医学病例信息管理系统。以MS SQL Server 2000建立数据库,以Visual C++6.0开发基于Client/Server模式的客户端应用程序,以实现对病例资料及相关样品信息的录入、浏览、查询选择、分级统计、样品管理及自动生成病例信息综合文档等功能,从而达到按科研所需对群体病例资料及其样品的管理。该系统有助于提高临床科研工作的效率、质量及管理水平,为医学病例及样品信息的综合动态管理提供了新的技术平台。     

血浆DNA定量用于重症肝炎患者肝细胞损伤评估

目的定量重症肝炎患者血浆DNA的水平,与ALT比较,评估鉴别重症肝炎的临床应用价值。方法收集30例重症肝炎患者外周血标本6ml,以急性肝炎(20例)、慢性乙肝(90例)、肝硬化(45例)和健康体检者(100例)作为对照。用磁珠法提取血浆DNA,双重实时荧光定量PCR测定血浆DNA。结果乙型肝炎患者的血浆DNA水平(中位数)显著高于健康对照(104.2ng/mlvs.23.4ng/ml,P=0.0000)。血浆DNA水平在重症肝炎患者和急性肝炎、慢性乙肝及肝硬化患者之间都具有显著性差异(P=0.0018、0.0000和0.0000)。乙型肝炎患者的血清ALT水平(中位数)显著高于健康对照(107.5U/Lvs.24.1U/L,P=0.0000)。重症肝炎患者的血清ALT水平与急性肝炎之间有显著差异(P=0.0024),但与慢性乙肝和肝硬化之间没有差异(P=0.0600和1.0000)。ROC曲线分析显示,在鉴别重症肝炎和肝硬化以及慢性乙肝时,血浆DNA的鉴别能力显著优于血清ALT(AUC,0.95vs.0.51,P=0.0000;0.86vs.0.34,P=0.0000)。结论用双重荧光定量PCR检测血浆DNA...     

慢性乙型肝炎患者血清中HBeAg、HBsAg与HBV-DNA的关系

目的探讨慢性乙型肝炎患者血清中HBeAg、HBsAg与乙肝病毒HBV-DNA之间的关系。方法选取655例HBsAg阳性的慢性乙型肝炎患者血清标本,用微粒子酶免疫分析法(MEIA)检测HBeAg、HBsAg,用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV-DNA。结果在HBeAg阳性标本中,HBV-DNA阳性率为64.64%;HBeAg阴性标本中,HBV-DNA阳性率为36.61%,二者差异有统计学意义(P0.01)。不同浓度组HBeAg和HBV-DNA检测结果比较,差异有统计学意义(P0.01)。不同载量HBV-DNA组,HBeAg差异有统计学意义(P0.01),且随HBV-DNA含量增加而增加;HBsAg差异也有统计学意义(P0.01),但随HBV-DNA含量增加而降低。结论同时检测HBV-DNA与HBeAg能更好地用于临床诊断与疗效观察,HBeAg随着HBV-DNA拷贝数的增加而增加,而HBsAg却呈下降趋势。     

医学检验教学与临床实际工作差距的思考与对策

随着现代临床医学的迅猛发展,各项医疗技术日新月异,医学检验技术也在飞速发展。医院检验科的仪器和技术也不断进行更新换代,医学检验知识的更新周期不断缩短［1］,在许多项目的检验程序中,形成自动化检测仪器逐步代替人工操作的趋势,而当前医学检验专业的专业课教学滞后于临床运用实践,这给医学院校培养检验专业实用型人才的具体定位带来了严峻的挑战。医学检验是临床医学的重要组成部分,检验质量的准确性,直接影响医生的临床诊断、病情判断及用药,关系到患者的康复,对医疗质量至关重要。因此,在医学检验教学过程中,减小医学检验教学与临床之间的差距,培养医学检验技术人才已迫在眉睫。培养医学检验实用型人才就是要适用于临床的需要,兼顾基本知识的掌握、基本技能的训练以及使用现代化仪器的能力的培养。然而,在具体的日常教学中,教师应当如何正确、深入地展开工作,医学检验实用型人才应当通过何种方式来进行培养？其依据是什么？以下将就这些问题进行探讨。     

金黄色葡萄球菌随机扩增多态性DNA分型及其应用

目的 利用随机扩增多态性DNA（random amplified polymorpohic DNA,RAPD）分析技术，对金黄色葡萄球菌进行基因分型，并观察临床耐药型与其基因型之间的关系。方法 利用自己合成的随机引物，建立RAPD检测分析方法，并利用这一方法对5株金黄色葡萄球菌进行基因分型的研究。结果 5株金黄色葡萄球菌中，2株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）为同一基因型，另外3株为两种基因型，均是敏感菌株。结论 从RAPD分析的初步结果可以看出，金黄色葡萄球菌的临床表现型与基因型存在一定的关系，本法有望且于临床金黄色葡萄球菌耐药的快速检测。