黄芪对急性弓形虫感染小鼠肝脏的影响研究

目的：研究黄芪对10^2速殖子感染小鼠肝脏的影响，探讨黄芪对急性弓形虫感染小鼠的保护作用机制。方法：建立10^2速殖子感染小鼠模型．设黄芪治疗组和对照组。2组小鼠定期分批处死．取血清和肝脏。用荧光定量PCR检测感染后第4．8天小鼠肝脏的虫荷。用赖氏法测定感染后第4、5、6．7天血清丙氨酸转氨酶（ALT）水平。取感染后第2、4、6、8天肝脏做冷冻切片．黄递酶组织化学染色方法进行iNOS酶组化染色。结果：感染后第4天和第8天肝脏虫荷两组差异无显著性。感染后黄芪组和对照组血清ALT水平持续上升，黄芪组感染后第4天为87．20U（卡门单位），显著高于对照组（34．44U，P〈0．05）；感染后第8天为172．50U．显著低于对照组（225．69U．P〈0．05）。对照组iNOS表达局限于小叶中央，汇管区浅染。结论：黄芪对急性弓形虫感染小鼠的肝脏功能存在双向调节的作用．可能与其诱导iNOS的作用有关。     

胰岛素样生长因子Ⅰ对A549细胞和淋巴细胞IGF-Ⅰ受体mRNA表达调控的研究

目的研究肺腺癌细胞株A549和淋巴细胞在外源性胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)作用下,各自IGF-Ⅰ受体(IGF-ⅠR) mRNA的表达情况.方法采用多重RT-PCR对IGF-ⅠR mRNA进行半定量检测,研究0、5、20、 80、 160、320 ng/ml不同浓度的重组人胰岛素样生长因子Ⅰ(rIGF-Ⅰ)及在某一特定浓度下作用不同时间对培养的A549细胞和淋巴细胞IGF-ⅠR mRNA表达的影响.结果当IGF-Ⅰ增加至20 ng/ml以上,淋巴细胞IGF-ⅠR mRNA的表达显著降低,而A549细胞IGF-ⅠR mRNA的表达未见明显改变.结论外源性IGF-Ⅰ不能显著降低肺腺癌细胞IGF-ⅠR的转录水平,提示IGF-ⅠR在肺腺癌的恶性增殖过程中可能起重要作用.     

Toll样受体在卵巢癌发生发展中作用机制的初步探讨

目的:观察卵巢癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs) mRNA的表达水平,研究高表达TLRs在卵巢癌发病中的可能机制?方法:研究对象包括卵巢癌24例?妇科良性疾病22例及同期健康体检女性22例?采用密度梯度离心法分离PBMC后,提取总RNA,并逆转录为cDNA,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)方法检测TLR1~TLR9 mRNA的表达水平;选择mRNA高表达的TLRs的相应激动剂刺激PBMC,采用Real-time PCR检测PBMC中前炎症细胞因子白细胞介素(IL)-1β?IL-6?IL-12P40的mRNA表达水平?结果:各组PBMC中TLR1~TLR9均有表达;卵巢癌组PBMC 中TLR2?TLR6表达量显著高于健康对照组(TLR2:F = 3.27,P < 0.05;TLR6:F = 2.21,P < 0.05);卵巢癌组TLR2的表达量明显高于妇科良性疾病组(F = 3.24,P < 0.05);良性疾病组TLRs表达水平与健康对照组间无显著性差异;各组PBMC经TLR2的激动剂HKLM刺激24 h后,卵巢癌组IL-1β?IL-6?IL-12P40 mRNA表达明显增强,分别为健康对照组的2.24?2.94?2.35倍(P < 0.05),为良性疾病组的2.02?2.50?2.85倍 (P < 0.05);良性疾病组与健康对照组比较无显著改变(F = 1.11,F = 1.18,F = 0.82,P > 0.05)?结论:卵巢癌患者PBMC中TLR2?TLR6表达水平显著增高,经其介导的炎症因子IL-1β?IL-6?IL-12P40 mRNA表达水平的改变可能在卵巢癌的发生发展中发挥作用?     

金黄色葡萄球菌随机扩增多态性DNA分型及其应用

目的 利用随机扩增多态性DNA（random amplified polymorpohic DNA,RAPD）分析技术，对金黄色葡萄球菌进行基因分型，并观察临床耐药型与其基因型之间的关系。方法 利用自己合成的随机引物，建立RAPD检测分析方法，并利用这一方法对5株金黄色葡萄球菌进行基因分型的研究。结果 5株金黄色葡萄球菌中，2株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）为同一基因型，另外3株为两种基因型，均是敏感菌株。结论 从RAPD分析的初步结果可以看出，金黄色葡萄球菌的临床表现型与基因型存在一定的关系，本法有望且于临床金黄色葡萄球菌耐药的快速检测。     

南京地区铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因分子类型分析

目的 调查南京地区铜绿假单胞菌(PA)氨基糖苷类药物修饰酶基因(AMEs)分子类型.方法 K-B药敏法测定2003～2005年临床分离的PA对庆大霉素、阿米卡星、链霉素的药敏表型,筛选出56株对氨基糖苷类药物耐药(至少对一种受试药物耐药)的菌株,聚合酶链反应(PCR)的方法对6种AMEs进行了检测和分析.结果 PA对庆大霉素的耐药率为51.8%(29/56),对阿米卡星的耐药率为26.8%(15/56),对链霉素的耐药率为96.4%(54/56).6种AMEs检出率由高到低分别为:aac(3)-Ⅱ 48.2%、ant(2')-Ⅰ 48.2%、aac(6')-Ⅱ 41.0%、ant(3')-Ⅰ 17.8%、aac(6')- 12.5%、aac(3)-Ⅰ 0.0%.总AMEs检出率为68.0%.结论 南京地区PA对氨基糖苷类抗菌药的耐药主要由AMEs引起.     

HCMV感染婴儿尿液病毒载量与肝脏损伤指标的相关性分析

目的 定量检测人巨细胞病毒(HCMV)感染婴儿尿液中HCMV DNA含量,检测肝脏损伤指标,并比较尿液HCMV病毒载量与肝脏损伤指标的相关性。方法 选取HCMV感染的婴儿,收集其新鲜尿液,使用荧光定量聚合酶链式反应法(FQ-PCR)检测HCMV DNA,定量检测血清ALT,AST,ALP,GGT,T-Bil和D-Bil肝脏损伤指标,并进行阳性率统计; 将尿液HCMV DNA取对数后,分别与ALT,AST,ALP,GGT,T-Bil和D-Bil进行Spearman相关性分析。结果 444例HCMV感染婴儿尿液HCMV分布范围为<2.70～7.90; 血清ALT,AST,ALP,GGT,T-Bil和D-Bil的阳性率分别为24.8%,59.0%,95.7%,31.1%,16.7%和16.3%; 尿液HCMV DNA对数与GGT存在一定的相关性,相关系数为0.099(P<0.05),而与ALT,AST,ALP,T-Bil和D-Bil均不存在相关性。结论 HCMV感染婴儿肝损伤指标具有一定的阳性率,且尿液HCMV病毒载量与GGT具有一定的相关性,与其它指标无相关性。     

抗C3d单抗制备及免疫金层析法的建立

目的 研制抗C3d单抗,建立免疫金层析法检测血浆补体片段C3d,判断补体活化情况。方法 用菊糖—C3d作抗原,免疫Balb/c小鼠,并制备杂交瘤,以羊抗C3包被酶标反应板并结合C3d为检测板,筛选分泌抗C3d单抗的杂交瘸。利用protein G柱亲和层析提取抗C3d单抗IgG和C3d结合物,进行SDS-PAGE电泳,鉴定单抗的特异性。将抗C3d单抗标以胶体金,制备免疫金层析测试余。通过在免疫金中加未标金的抗C3d单抗(游离单抗)来调整试纸条的灵敏度,并测定C3d。结果 SDS-PAGE电泳图上,出现IgG的重链、轻链、及C3d 3个条带;金标记抗C3d单抗的试条(Ⅰ)测C3d的灵敏度在6—10ng/m1,当加入0．1μg/m1游离抗C3d单抗(Ⅱ)后,灵敏度为10—15ng/m1。利用两种试条灵敏度的不同,对轻、中重型肝炎检测,结果轻型肝炎患者在纸条Ⅰ上阳性率为83．3％(25/30),纸条Ⅱ全为阴性,中重型肝炎者在纸条Ⅰ、Ⅱ的阳性率为100％(30/30)。结论 用本试验建立的免疫金层析法测定肝炎患者血浆C3d水平,可判断补体活化程度,辅助乙型肝炎轻、重分型。     

慢性HBV感染患者血清中HBV-DNA与HBsAg、HBeAg的关系

目的:定量检测慢性HBV感染患者血清中HBV-DNA与HBsAg、HBeAg,并寻找三者浓度之间的关系.方法:选取555例HBsAg阳性的慢性HBV感染患者血清标本,分别用荧光定量聚合酶链式反应法(FQ-PCR)检测HBV-DNA和微粒子酶免疫分析法(MEIA)检测HBsAg、HBeAg.结果:555例患者中,有338例检测出HBV-DNA阳性.阳性率为60.9%(338/555);对HBV-DNA浓度取对数后分为三组:>6组、3～6组和<3组.三组之间HBsAg的浓度差异存在显著性(P<0.001),进一步两两比较发现>6组中位浓度低于3～6组(P<0.001),而3～6组和<3组之间差异无显著性(P=0.505);三组之间HBeAg差异有显著性(P<0.001),进一步进行两两比较,发现>6组高于3～6组(P<0.001),而3～6组高于<3组(P<0.001).在HBV-DNA阳性组,对HBV-DNA浓度的对数与HBeAg进行相关分析,两者相关系数为0.463,而与HBsAg浓度呈负相关,相关系数为-0.180.结论:随着HBV-DNA拷贝数的增加,HBsAg量呈下降趋势,而HBeAg浓度呈上升趋势.且均存在相关性.     

肿瘤标志物预测肺癌非手术患者预后的意义

目的研究肿瘤标志物预测肺癌非手术患者预后的意义。方法51例确诊肺癌患者用蛋白质芯片技术检测临床处理前血清中糖链抗原19—9（CA19—9）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、癌胚抗原（CEA）和CA125的浓度,24例正常人作对照。结果（1）37例随访组CA19—9、NSE、CEA和CA1254项测定值显著高于对照组（P〈0．05）;（2）13例1年内死亡组和24例未死亡组,CA19—9和CEA测定值差异有显著性（P〈0．05）,NSE和CA125测定值差异无显著性（P〉0．05）;（3）CA125测定阳性率,在1年内死亡组（69．23％）高于未死亡组（20．83％）（X^2=8．397,P〈0．01）。结论CA19—9,CEA和CA125对肺癌非手术患者的预后判断有一定的意义。     

实践教学在《临床检验基础》课程中的重要性

就南京医科大学第一临床医学院医学检验系《临床检验基础》课程创办以来,从实验、实习和毕业论文"三位一体"实践教学模式长期教学过程中的体会进行了总结。