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目的:构建肿瘤相关抗原表皮生长因子受体特异性嵌合抗原受体(EGFR-CAR)和程序性死亡受体-配体1(PD-L1)抗体双修饰慢病毒载体表达系统。方法:人PD-L1-Fc蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合、亚克隆筛选高分泌PD-L1特异性抗体的稳定杂交瘤,酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测抗体特异性,流式细胞术(FACS)鉴定对PD-1配受体封阻性能,Fortebio测定抗体亲和力,抗体全长测序,经保留鼠源CRD1、CRD2和CRD3人源化改造后构建单链抗体(single-chain variable fragment,scFv);人EGFR单克隆抗体杂交瘤系,经5′RACE技术扩增其轻链和重链可变区(VL和VH)基因,构建scFv,克隆至真核载体pcDNA3.1表达鉴定。基因合成EGFR-CAR(引入CD137协同信号胞内功能域)与PD-L1-scFv借助2A序列连接,克隆入慢病毒pLVX-EF1a-IRES-ZsGreen1表达载体,使用Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G)共同转染293T细胞,获得包装病毒,感染293V细胞,FACS测定CAR膜表达,ELISA检测CAR感染293V细胞培养上清中PD-L1-scFv表达情况,转染激活人外周血T细胞,验证CAR膜表达。结果:获得PD-L1抗体11E3,具备高度配受体封阻性能,经人源化改造后,亲和力稳定(2.67×10 -10 mol/L),EGFR-scFv获得有效表达。进一步构建了EGFR-CAR和PD-L1双修饰慢病毒分泌型CAR(CTC0537-1)及膜表达型CAR(CTC0537-2),其病毒感染293V细胞阳性率为10%。CTZ0431-1感染293V细胞后,细胞膜表面表达EGFR-scFv,检测培养上清存在PD-L1-ScFv;CTZ0431-2感染293V细胞后,细胞膜表面EGFR-scFv和PD-L1-scFv有效表达,双表达病毒感染活化T细胞的CAR表达率为39.3%。 结论:成功构建了EGFR-CAR和PD-L1-scFv双表达慢病毒载体,EGFR-CAR中度结合亲和力,此为EGFR靶向和PD-L1抗体双修饰CAR-T细胞的实体瘤治疗研究提供了关键工具。 相似文献
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多柔比星是临床治疗中有效的抗肿瘤药,但其严重的心脏、肝脏毒性使其临床应用受到了极大限制。小檗碱是从黄连属植物分得的生物碱,具有多种生物活性和药理作用,对痢疾、真菌感染、糖尿病、肿瘤等都有治疗作用。研究发现小檗碱不仅可以通过诱导肿瘤细胞的凋亡来增强多柔比星的抗肿瘤活性;还可以通过改变多柔比星引起心肌病的相关指标来降低多柔比星引起的心肌细胞的损伤;另外,小檗碱对多柔比星引起的肝脏损伤也有一定的保护作用。综述了小檗碱对多柔比星的增效减毒作用及其机制的研究进展,这种发现提供了一种新颖的治疗方法,对多柔比星临床治疗的发展具有重要的意义。 相似文献
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目的创新性地提出一种可高灵敏、高选择性定量检测中药材中黄芪甲苷的新方法。方法将氨基苯硼酸共价吸附到多孔硅胶中,制备得到苯硼酸功能化的分子印迹材料。该印迹材料中的双羟基基团能与黄芪甲苷分子结构中的双羟基发生特异性识别。采用紫外分光光度法为检测手段,以茜素红(ARS)为光度指示剂,利用ARS与黄芪甲苷之间的双羟基竞争反应,观察加入不同浓度的黄芪甲苷后所引起可见光区吸光度的变化,达到高灵敏定量分析黄芪甲苷的目的。结果在510 nm处,溶液吸光度响应值的变化与黄芪甲苷的浓度在1×10^-6-6.4×10^-4mol/L内呈现良好的线性关系,线性回归系数为0.9929,检出限为0.3×10^-6 mol/L。结论本方法结果可信,重复性较好,可用于中药材中黄芪甲苷的定量分析。 相似文献
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目的 探讨应用脱细胞真皮基质(ADM)在鼻腔鼻窦良性肿瘤切除术后黏膜形态恢复及上皮化情况,比较并分析患者主观症状评分及黏膜鼻内镜下评分,评价脱细胞真皮基质在促进术后鼻黏膜功能修复及上皮化中的应用价值,为改善鼻内镜术后恢复提供新的思路及方法。 方法 鼻腔鼻窦肿瘤患者32例,分别统计实验组(使用ADM)与对照组(未使用ADM)患者术前及术后1、2、4、12周的视觉模拟量表评分(VAS)和Lund-Kennedy评分(LKES),比较两组临床疗效,并通过上皮化率对两组患者在4、8、12周上皮化情况进行比较。 结果 术后2周开始,实验组的黏膜恢复情况优于对照组(P<0.05),对单独的体征来看,结痂情况在术后1~4周,实验组的LKES明显低于对照组(P<0.05);术后12周,实验组的瘢痕LKES明显低于对照组(P<0.05);术后4~12周的上皮化率实验组明显高于对照组(P<0.05)。术后均未出现不良反应。 结论 鼻腔鼻窦良性肿瘤术区黏膜覆盖脱细胞真皮基质能有效的促进黏膜上皮化从而缩短黏膜上皮化时间,改善鼻腔黏膜结痂瘢痕等情况,改善患者主观症状,提高患者生活质量,值得临床应用。 相似文献