过表达SATB1对人原发性肝癌细胞HepG2增殖的促进作用

目的研究核基质结合蛋白SATB1对人原发性肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法脂质体介导pEGFP1 SATB1真核表达全长基因质粒转染人原发性肝癌HepG2细胞,分为实验组（pEGFP1 SATB1）、对照组（pEGFP1空载体）及空白对照组。RT PCR、Western blot检测转染后SATB1mRNA和蛋白表达变化情况,噻唑蓝（MTT）法、流式细胞仪检测SATB1全长基因转染对人原发性肝癌HepG2细胞生长、增殖的影响。结果与空白对照组及对照组比较,转染pEGFP1 SATB1后,HepG2中SATB1mRNA和蛋白表达明显增加,细胞生长曲线检测结果表明转导入pEGFP1 SATB1细胞增殖明显加快,细胞数明显增多;流式细胞仪检测结果表明,细胞周期中G0/G1期细胞明显减少,S、G2/M期细胞明显增多。结论SATB1能明显促进HepG2细胞增殖,其机制可能与参与调控细胞周期各期DNA复制、转录有关。     

122例特发性血小板减少性紫癜血小板输注疗效观察

目的:探讨特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者临床血小板输注的指征.方法:比较122例ITP患者输注血小板和未输注血小板的临床转归;比较血小板输注前及输注24 h后血小板计数.参照PAIg,分析抗体与血小板输注疗效的相关性.结果:67例未输注血小板的患者中,有2例PLT＜10×109/L的患者发生严重出血危及生命,55例输注血小板的惠者,有17例(31%)PLT较输注前降低,其中7例输注后PLT＜10×109/L,未发生严重出血;ITP患者血小板输注无效率86%,PAIg升高患者血小板输注无效率升高,有统计学差异.结论:如无明显的出血症状,ITP血小板输注指征建议PLT＜10×109/L,应输注少白细胞同型单采血小板制荆.     

原癌基因pim-3的克隆及其对肝癌细胞凋亡的影响

目的:克隆大鼠原癌基因pim-3并构建真核表达重组质粒pEGFP-N2／pim-3,观察他在真核细胞SMMC-7721中的表达情况以及对细胞凋亡的影响．方法:利用TRIzol从液氮保存的大鼠骨骼肌组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法获取pim-3 cDNA,并构建重组质粒pEGFP-N2／pim-3,转化用CaCl2法制备的大肠杆菌JM-109菌株,酶切以及测序鉴定．将重组质粒通过脂质体介导转染肝癌SMMC-7721细胞后利用倒置荧光显微镜观察基因表达情况,并利用流式细胞术及MTT比色实验对转染细胞的生物学行为进行检测．结果:将RT-PCR产物全部用于低熔点琼脂糖凝胶电泳、回收,在DL 2000 Marker 1000 bp附近可见清晰条带,与实验设计符合;阳性克隆质粒的酶切电泳和测序结果表明,大鼠pim-3 cDNA的克隆和重组质粒pEGFP-N2／pim-3的构建成功;重组质粒pEGFP-N2/pim-3转染组凋亡细胞占3．5％,质粒pEGFP-N2转染组凋亡细胞占10．7％,而仅加入转染液的空白组凋亡细胞占11．0％,重组质粒转染组与两对照组之间差异有统计学意义(P<0．05);倒置荧光显微镜可以观察到pim-3在SMMC-772 1细胞中的正常表达;MTT比色实验显示原癌基因pim-3能够明显抑制细胞凋亡．结论:真核表达重组质粒pEGFP-N2/pim-3构建成功;原癌基因pim-3能明显抑制肝癌细胞凋亡．     

哌拉西林/他唑巴坦治疗儿童呼吸道细菌感染的疗效观察

摘 要 目的：评价哌拉西林/他唑巴坦与头孢噻肟治疗儿童呼吸道细菌感染的疗效和安全性。方法: 呼吸道感染患儿60例随机分为两组,分别给予哌拉西林/他唑巴坦治疗（哌拉西林/他唑巴坦组）和头孢噻肟治疗（头孢噻肟组）。两组疗程均为7d。比较两组患儿呼吸道病原菌检出分布构成;经过治疗后达到进步级别和有效级别疗效的平均时间,以及平均住院时间、WBC平均复常率;评价两组疗效和细菌清除率;监测两组药品不良反应。结果: 两组患儿检出的致病菌以G⁺菌为主,特别是肺炎链球菌最为常见。两组临床总有效率和细菌清除率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。两组患儿达到进步、有效的平均时间,平均住院时间以及WBC平均复常率比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。两组均未出现严重不良反应。结论:哌拉西林/他唑巴坦和头孢噻肟均可用于儿童呼吸道抗感染治疗。     

腹膜后脂肪肉瘤完整切除后短期复发的影响因素分析

目的探讨腹膜后脂肪肉瘤经外科手术完整切除后短期复发的影响因素。方法回顾性分析2000年1月至2020年1月在解放军总医院第一医学中心普通外科行腹膜后脂肪肉瘤切除术的91例患者的临床和病理学资料。男性60例, 女性31例, 年龄(52.1±9.9)岁(范围:30～84岁)。将完整切除后12个月内发生的肿瘤复发定义为短期复发, 超过12个月发生的肿瘤复发定义为非短期复发。对腹膜后脂肪肉瘤完整切除后短期复发的影响因素进行分析, 组间比较采用t检验、秩和检验、χ2检验和Fisher确切概率法, 多因素分析采用Logistic回归分析, 以Kaplan-Meier曲线计算无复发生存时间, Log-rank检验进行组间比较。结果 91例患者中, 42例为短期复发, 49例为非短期复发。单因素分析结果显示, 肿瘤形态不规则、多种病理学亚型、病理评分>3分、多原发肿瘤是腹膜后脂肪肉瘤完整切除后短期复发的影响因素(χ2值为4.422～7.773, P值均<0.05)。多因素分析结果显示, 多原发肿瘤是腹膜后脂肪肉瘤完整切除后短期复发的独立影响因素(OR=2.918, 95%CI:1.127～...     

内毒素性急性肝损伤实验动物模型的建立

目的:探讨脂多糖(LPS)对D-半乳糖胺(D-GalN)致敏大鼠在亚致死剂量下的肝损伤作用.方法:48只大鼠随机分为三大组,即6h、24h和48h取材组,每组各16只动物;每个大组再分为两个小组,即处理组和对照组,各8只大鼠.所有处理组大鼠均以LPS(50μg/kg) D-GalN(300mg/kg),用1mL无菌生理盐水溶解后腹腔内注射,对照组大鼠仅腹腔内注射1mL生理盐水.在相应时间点,采血查谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和胆红素(BIL);肝组织常规固定,HE染色后光镜检查;肝组织细胞凋亡的TUNEL分析采用多聚甲醛固定;肝组织炎性细胞因子TNF-α、IL-1b和细胞凋亡诱导基因bax的表达通过RT-PCR的方法检测.结果:所有处理组大鼠ALT、AST和TBIL在6h内即显著升高,24h达到峰值,48h仍维持于高水平;肝脏大体形态显示:肝脏明显肿胀、失去正常红润光泽而略显苍白、表面见散在的点状及片状出血点、质地偏韧;HE染色可见药物处理6h,肝组织即呈现充血,碎片状坏死和大量炎性细胞浸润.24h肝细胞开始空泡变性、肿胀,并见大片坏死及中性粒细胞浸润.48h则多数肝细胞空泡状变性,肝组织小叶结构紊乱,点状坏死,炎症细胞浸润较前减少.TUNEL分析显示,对照组未见凋亡的肝细胞,6h处理组仅见少量凋亡细胞,凋亡指数(AI)为4.3±1.2%,24h和48h处理组肝组织内则见较多的凋亡细胞,AI分别为20.6±3.3%、21.2±5.7%,但两者P>0.05;24h处理组凋亡细胞百分数为15.83%,对照组凋亡细胞占0.39%,两组间存在显著差异(P<0.001);处理组各时间点TNF-α、IL-1b的表达均较对照组显著升高,其高峰值出现于6h.对照组未见bax的表达,而LPS的应用后6,24,48h的相对表达率为0.193±0.062、0.191±0.043、0.209±0.031.结论:亚致死剂量LPS可造成D-GalN致敏大鼠的急性肝损伤;细胞凋亡是该急性损伤的重要病理形态学改变,而凋亡的发生可能与LPS诱导bax的表达有关;本模型是较理想的内毒素性急性肝损伤的实验动物模型.     

洋葱皮提取物对离体蟾蜍心脏功能的影响

目的:探讨洋葱皮提取物对离体蟾蜍心肌收缩力和心率的影响及其机制。方法:根据斯氏蛙心插管方法,分别用浓度为0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg/m L的洋葱皮提取物灌流离体蟾蜍心脏,采用BL-420生物机能实验系统记录心率和心肌收缩力的变化情况;分别加入低钙、正常钙、高钙任氏液和0.000 5 mg/m L维拉帕米,5分钟后充分灌洗,再分别加入低钙、正常钙、高钙任氏液配制的洋葱皮提取物以及0.000 5 mg/m L维拉帕米与洋葱皮提取物的混合物,记录5分钟心率和心肌收缩力的变化情况。结果:灌流0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 mg/m L的洋葱皮提取物的离体蟾蜍心率变化不大(P0.05),但离体蟾蜍心肌张力峰峰值先逐渐升高,约1分钟达高峰,而后逐渐下降,5分钟时仍高于加药前心肌张力峰峰值(P0.05),表明蟾蜍心收缩力呈现出典型的先升高后下降的趋势,且具有明显的药物浓度依赖性;0.000 5 mg/m L维拉帕米、低钙任氏液对蟾蜍心脏具有负性肌力的作用,且洋葱皮提取物能够拮抗其对心肌的抑制作用,高钙任氏液对离体心脏具有正性肌力作用,而洋葱皮提取物能够增强其对心脏的正性肌力作用。结论:洋葱皮提取物可使离体蟾蜍心脏心肌收缩力先升高后下降,且有药物浓度依赖性,但是对心率影响不大,且其兴奋心肌的作用机制可能与激活L-型钙通道有关。     

丝/苏氨酸激酶Pim家族在细胞周期调控和肿瘤发生中的作用

丝／苏氨酸激酶Pim家族已发现3个成员:Pim-1、Pim-2和Pim-3,它们都是钙／钙调蛋白调节激酶(CAMP)。目前的研究发现,Pim激酶通过磷酸化不同的底物而在细胞凋亡、细胞周期调控以及肿瘤的发生中起着重要的作用。现就目前国内外关于Pim激酶的研究进展作一综述。     

靶向MTDH的小干扰RNA对人原发性肝癌细胞HepG2骨架重排的影响

目的构建人MTDH基因的shRNA干扰载体,并观察其对原发性肝癌细胞HepG2骨架重排的影响。方法针对MTDH基因的不同部位设计3对shRNA的寡核苷酸片段,克隆到载体pGCsilencerTM H1/Neo中,RT-PCR、Western blotting及免疫荧光检测转染后MTDH mRNA和蛋白表达变化情况,并筛选最佳抑制效率的shRNA干扰载体,并将其转染人原发性肝癌细胞HepG2,用罗丹明标记的鬼笔环肽显示沉默MTDH基因后对人原发性肝癌细胞HepG2骨架蛋白F_actin的改变。结果靶向MTDH干扰质粒构建成功。与转空载体的阴性对照组及未转染组比较,转染pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-shRNA后,HepG2中MTDH mRNA和蛋白表达明显降低,其中以pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-S1最为明显,达到90%以上;细胞形态及细胞骨架显示转染pGCsilencerTMH1/Neo-MTDH-S1的细胞骨架蛋白F_actin发生重排。结论成功构建并筛选最佳抑制效率的靶向MTDH干扰pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-S1,该载体能有效重排肝癌细胞骨架。     

清热利湿化痰通络开玄方治疗脑梗死后遗症期的临床疗效及其炎性机制研究

目的:研究清热利湿化痰通络开玄方对脑梗死后遗症期患者的临床疗效及其可能的作用机制.方法:选取患者60例,随机分成对照组(常规西药治疗)和研究组(常规西药加清热利湿化痰通络开玄方治疗)各30例.对比分析治疗前和治疗后2组神经功能缺损评分[采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)]、中医症状评分、血清炎性因子[白介素-...