鼠尾静脉流体力学转染技术对绿色荧光蛋白表达质粒器官靶向分布的影响

目的:观察流体力学尾静脉注射对绿色荧光蛋白基因器官靶向性的影响,为今后质粒载体的基因治疗和功能研究寻找潜在的靶器官。方法:实验于2005-12/2006-04在江西省分子医学重点实验室完成。选用健康雄性昆明鼠40只,将32只小鼠按随机数字表法分为流体力学注射和常规注射两大组,每大组再分为转染组和对照组两个小组(n=8),并设正常对照组(n=8)。①流体力学转染组将100μg/只绿色荧光蛋白表达质粒溶液2mL在5s内快速注入尾静脉;对照组仅在5s内注入林格氏液2mL。②常规注射组则将2mL林格氏液或绿色荧光蛋白表达质粒溶液在30s左右注入尾静脉。注射结束后24h采集各组小鼠血清检测转氨酶,并采集肝、脾、心、肾、肺和脑组织进行冰冻切片,部分肝组织采用多聚甲醛固定后切片,荧光显微镜下观察。结果:40只小鼠全部进入结果分析,无脱失。①流体力学注射组和常规注射组小鼠血清转氨酶与正常对照组比较差异均无显著性意义(P>0.05)。②常规尾静脉注射引起少数肾小球细胞表达绿色荧光蛋白,而肝、脾、心、肺及脑等组织未见明显绿色荧光蛋白表达。③流体力学注射引起肝内绿色荧光蛋白高水平表达,肝细胞表达率接近45%,其他组织则无绿色荧光蛋白表达。结论:流体力学方法是肝靶向性的活体基因转染方法,绿色荧光蛋白可作为该方法进行目的基因研究的一个可靠和方便的示踪剂。     

HBx致原发性肝癌机制研究进展

作为乙型肝炎病毒（HBV）致肝癌的主要物质，X蛋白（HBx）己成为近年研究的热点之一。已知HBx对肝细胞内许多基因的表达均有直接或间接的影响，在肝癌形成中起重要作用。近年来对HBx致原发性肝癌（HCC）机制的研究显示，HBx可影响肝细胞的生存和前凋亡信号通路、抑制细胞DNA的修复、促进细胞的侵袭和转移以及干扰细胞有丝分裂和细胞周期进程等。     

大量胸腔积液合并头皮结节误诊为结核病一例

<正>患者女性,66岁。因"咳嗽1个月,胸闷气促2个周"于2019年4月12日入院。患者于1个月前出现咳嗽,伴乏力、消瘦、纳差,无发热及胸痛。2周前出现进行性胸闷、气促。4月12日至本院就诊。胸部CT:双侧胸腔积液,右侧较多(图1、2)。考虑结核性胸腔积液可能,转入我院感染科住院诊治。患者既往有头皮结节史1年,无不适感,近3个月头皮结节破溃(图3)。曾在外院就诊考虑良性病变。     

IRF3 基因干扰对LPS 刺激原代枯否细胞早期细胞因子分泌动态变化的影响

目的:探讨干扰素调节因子3(Interferon regulator factor 3,IRF3)shRNA腺病毒对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激枯否细胞(Kupffer cell,KC)早期细胞因子分泌动态变化的影响。方法:采用在体灌注分离培养大鼠原代KC,以IRF3shRNA腺病毒体外感染KC,48 h后采用LPS刺激细胞,于0、2、4和6 h收集细胞培养上清液,并收集6 h细胞。上清液细胞因子的分泌采用ELISA分析;细胞IRF3基因表达采用RT-PCR和Western blot方法检测。结果:LPS刺激诱导了KC内IRF3 mRNA和蛋白质表达升高,IRF3 shRNA腺病毒的应用抑制了LPS刺激诱导和非刺激组成性IRF3 mRNA和蛋白质的表达;KC受LPS刺激活化后极早期(2 h)IFN-β分泌即上升,4 h达峰值,6 h分泌水平开始下降,但仍维持于高水平。干扰腺病毒的应用抑制了LPS刺激后各时间点IFN-β的分泌,抑制分泌高峰的出现,并使6 h分泌水平趋于正常;KC活化后极早期即分泌大量TNF-α,并于2 h内达到峰值,随后分泌逐渐下降,但6 h仍维持于高水平。干扰腺病毒的应用抑制了LPS刺激各时间点TNF-α的分泌,并抑制了分泌高峰的出现;IL-1β分泌增高出现于LPS刺激4 h后,6 h分泌水平达更高值。干扰腺病毒的应用抑制了LPS刺激早期KC对IL-1β的分泌;KC受LPS刺激活化后极早期IL-10分泌即上升,且随着LPS刺激时间延长,其分泌水平逐渐增加。IRF3 shRNA腺病毒的应用促进了LPS刺激后早期各时间点IL-10的分泌。结论:IRF3 shRNA腺病毒可使原代枯否细胞IRF3基因表达沉默;在LPS刺激原代KC,IRF3可促进其下游信号分子IFN-β、前炎细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌,并抑制抑炎细胞因子IL-10分泌。因此,IRF3可能在肝组织免疫炎症性损伤的发生中起中心作用。     

CIAPIN1基因的生物学功能及其与肿瘤的相关性

CIAPIN1是近年通过克隆表达方法鉴定的新基因,已证实其主要受细胞因子的调控,是Ras信号通路的重要介导者.CIAPIN1基因存在显著的细胞凋亡抑制效应,在肿瘤细胞中高表达,能抑制肿瘤细胞的凋亡和促进其细胞周期进程.进一步的研究还发现,CIAPIN1可促进肿瘤新生血管的形成和肿瘤多药抵抗的产生等.     

反义基因对肝癌血管内皮生长因子表达的抑制

原发性肝细胞癌(HCC)的生长很大程度上依赖新生血管的形成。抑制肿瘤血管的形成，特别是肿瘤血管形成调控因子血管内皮生长因子(VEGF)的基因治疗是近年HCC治疗研究的新方向。本文通过实验方法探讨不同序列的反义寡核苷酸(ODN)对VEGF表达的抑制效应，为今后肝癌VEGF的基因治疗提供实验基础。     

轻度肾功能不全对急性冠状动脉综合征患者预后生存质量的影响

目的探讨轻度肾功能不全对急性冠状动脉综合征(ACS)患者预后生存质量的影响。方法分析2010年7月至2013年7月该院确诊为ACS的50例患者的资料,按照患者肾小球滤过率估算值(e GFR)的高低分为肾功正常组(A组,n=25)和轻度肾功不全组(B组,n=25),分析研究轻度肾功不全对ACS患者出现终点事件的相关性。结果 A组患者中初级终点事件的发生率(24.0%)显著低于B组(72.0%)(P0.05);两组患者次级终点事件的发生率无统计学差异(P0.05)。COX回归分析发现,轻度肾功不全患者发生初级终点事件的相对危险度是正常者的2.135倍(95%CI 1.056~4.560,P=0.034),轻度肾功不全对全因死亡(HR 3.224,95%CI 1.209~8.145,P=0.025)和心源性死亡(HR 3.198,95%CI0.940~9.643,P=0.041)有预测价值。结论轻度肾功不全对ACS患者的预后具有重要预测价值。     

IκB激酶家族新成员:IKKε

IΚB激酶家族(IΚB kinases,IKKs)是NF-ΚB信号途径最为重要的成员之一,已发现其在先天性免疫以及炎症反应的调节中发挥关键作用.除IKKα/β/γ之外,作为IKKs的最新成员,IKKε不仅具有与IKKα/β/γ类似的作用,而且最近的研究数据证实IKKε还能通过凋亡蛋白抑制物(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)调节caspases的活性,参加caspases的凋亡和非凋亡依赖性信号途径.     

丝氨酸蛋白酶HtrA2/Omi与细胞存亡

HtrA2/Omi是一种寡聚丝氨酸蛋白酶,存在于大部分的正常组织器官中。在最初的研究中发现[1],当细胞受到凋亡刺激时,HtrA2/Omi可由线粒体膜间隙(mitochondrial intermembrane space)释放进入细胞质中,接着出现大量的细胞凋亡性死亡,这些现象表明HtrA2/Omi与细胞死亡之间有着密切的关系[2]。随着近年来研究的不断深入,人们又惊奇地发现,它不仅出现在细胞凋亡的进程中,当细胞面对各种应激环境时,HtrA2/Omi活性和浓度也会上调,以增加细胞对刺激的耐受能力,使细胞得以生存下来。这是一对看似互相矛盾的事实,却更体现出HtrA2/Omi在细胞存亡调…     

大鼠枯否细胞的分离、鉴定以及LPS刺激诱导TNF-α的表达

目的:分离、培养和鉴定枯否细胞,并探讨LPS刺激对细胞肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达和分泌的影响.方法:采用在体原位灌注、密度梯度离心和早期细胞换液等方法分离纯化大鼠肝枯否细胞(kupffer cell,KC),并采用墨汁吞噬和ED2染色试验对分离培养的细胞进行鉴定.TNF-α表达和分泌采用RT-PCR和酶联免疫技术(enzyme-linked immunosorbent,ELISA)检测.结果:成功分离和纯化大鼠肝KC,并经墨汁吞噬和ED2染色试验鉴定证实;LPS刺激KC细胞内TNF-α mRNA的表达较非刺激细胞(PBS处理细胞)显著升高(1.10±0.02vs0.09±0.01,P<0.001).另外,LPS刺激较非刺激KC培养上清液TNF-α蛋白的水平也显著升高(487.10pg/mL±5.56pg/mLvs39.41pg/mL±15.30pg/mL,P<0.001).结论:原位灌注和密度梯度离心法能有效分离纯化大鼠KC,LPS刺激可诱导其表达和分泌大量TNF-α.